分離培養(yǎng)適用于染色體分選的新生小鼠皮膚成纖維細(xì)胞

晁天柱， 徐福意， 徐　偉， 李　凱， 周宇荀， 肖君華

(東華大學(xué) 生物科學(xué)與技術(shù)研究所，上海 201620)

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分離培養(yǎng)適用于染色體分選的新生小鼠皮膚成纖維細(xì)胞

晁天柱， 徐福意， 徐偉， 李凱， 周宇荀， 肖君華

(東華大學(xué) 生物科學(xué)與技術(shù)研究所，上海 201620)

摘要：采用酶消化法分離培養(yǎng)新生小鼠皮膚成纖維細(xì)胞(mouse skin fibroblasts, MSFs)．通過(guò)噻唑藍(lán)(MTT)比色法和流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)，深入探討不同培養(yǎng)基和血清濃度對(duì)MSFs增殖率和同步化效率的影響．結(jié)果表明：酶消化法能快速獲取大量健康、高活力的MSFs；在杜氏培養(yǎng)液(DMEM)傳代培養(yǎng)條件下，P2代MSFs具有高增殖率和有絲分裂指數(shù)；地美可辛工作濃度為0.05 μg/mL時(shí)，阻斷同步化獲取M期MSFs的效率最佳．研究結(jié)果為流式細(xì)胞術(shù)分選染色體提供實(shí)驗(yàn)材料和研究基礎(chǔ)．

關(guān)鍵詞：成纖維細(xì)胞； 噻唑藍(lán)(MTT)； 細(xì)胞同步化； 流式細(xì)胞術(shù)

純化的染色體可應(yīng)用于物理作圖[1-2]、熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization, FISH)[3-4]、構(gòu)建DNA文庫(kù)[5-6]、有絲分裂相關(guān)蛋白質(zhì)[7-8]的研究和二代測(cè)序．染色體純化和測(cè)序技術(shù)相結(jié)合能快速、高效地獲取目標(biāo)染色體的DNA序列信息[9]，并廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物個(gè)體，如小麥[10]、山羊草[11]、人[12]、小鼠[13]和倉(cāng)鼠[14]等．在染色體純化方法中，顯微切割技術(shù)雖能獲得高純度染色體，但耗時(shí)、耗力，得率低[15]；磁珠分選法的純度低，且染色體不完整[16]；而流式細(xì)胞術(shù)(FCM)是染色體純化效率最高的方法[17]．

雖然各種細(xì)胞類型都能用于流式細(xì)胞術(shù)分選染色體[18]，但細(xì)胞的質(zhì)量、穩(wěn)定性和有絲分裂指數(shù)，嚴(yán)重影響單染色體懸液的質(zhì)量和流式分辨率[19]．成纖維細(xì)胞在適當(dāng)體……