改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基的應(yīng)用效果

王洪亮，程艷宇，王夢曉（天津乳品食品監(jiān)測中心，天津300381）

改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基的應(yīng)用效果

王洪亮，程艷宇，王夢曉
（天津乳品食品監(jiān)測中心，天津300381）

評估GB4789.11-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物檢驗β型溶血性鏈球菌檢驗》中改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基的質(zhì)量。選取國內(nèi)三家（標(biāo)記為A、B、C）和國外一家（標(biāo)記為D）培養(yǎng)基生產(chǎn)商的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（商品化脫水合成培養(yǎng)基）和相應(yīng)添加劑，使用目標(biāo)菌（乙型溶血性鏈球菌FSCC225016）和非目標(biāo)菌（大腸埃希氏菌ATCC25922），依據(jù)GB4789.28-2013《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物檢驗培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》中選擇性增菌培養(yǎng)基的定性測試方法進(jìn)行質(zhì)量評估。同時不加添加劑進(jìn)行試驗。國內(nèi)A、B和C三家改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中目標(biāo)菌濁度值均為0，非目標(biāo)菌濁度值為0；未加試劑的培養(yǎng)基目標(biāo)菌濁度值均為0，非目標(biāo)菌濁度值為0。國外D改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中目標(biāo)菌濁度值為2，非目標(biāo)菌濁度值為0；未加試劑的培養(yǎng)基目標(biāo)菌濁度值為2，非目標(biāo)菌濁度值為1。國內(nèi)A、B、C三家的改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基質(zhì)量評估證明是胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（不加添加劑）基礎(chǔ)成分的問題；國產(chǎn)胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基質(zhì)量有待提高。

改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基；選擇性增菌培養(yǎng)基；濁度值

食品安全監(jiān)管及檢測是保障人民群眾“舌尖上的安全”的一項重點(diǎn)工作，為了使食品安全檢測工作更好的為食品安全監(jiān)管服務(wù)，各項食品安全檢測標(biāo)準(zhǔn)都在不斷的清理和改進(jìn)中。培養(yǎng)基和試劑作為微生物檢驗中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，所以培養(yǎng)基的質(zhì)量尤為重要，我國的培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家眾多，質(zhì)量也參差不齊，本文對國內(nèi)外培養(yǎng)基生產(chǎn)廠商的GB 4789.11-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物檢驗β型溶血性鏈球菌檢驗》中改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行了評估，為今后β型溶血性鏈球菌的檢測工作提供一定參考。

1　材料

1.1培養(yǎng)基

腦心浸液肉湯（BHI）、改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（國內(nèi)三家A、B、C和國外一家D）。

1.2試驗標(biāo)準(zhǔn)菌株

乙型溶血性鏈球菌ATCC21059、大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923：購于廣州環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.3儀器設(shè)備

高壓滅菌鍋：日本雅馬拓；隔水式恒溫培養(yǎng)箱：上海一恒科技有限公司。

2　方法

2.1培養(yǎng)基

將待評估培養(yǎng)基按說明書配制，高壓滅菌后分裝無菌試管，每管10 mL。

2.2工作菌懸液的制備

將標(biāo)準(zhǔn)菌株接種到腦心浸液肉湯（BHI）36℃培養(yǎng)過夜，進(jìn)行10倍系列稀釋至10-3，作為工作菌懸液。

2.3接種

用1 μL接種環(huán)取一環(huán)工作菌懸液直接接種到用于性能測試的液體培養(yǎng)基中，36℃培養(yǎng)24 h。

2.4結(jié)果解釋

用目測的濁度值（如0～2）評估培養(yǎng)基：0表示無混濁；1表示很輕微的混濁；2表示嚴(yán)重的混濁。

目標(biāo)菌的濁度值應(yīng)為2，非目標(biāo)菌的濁度值應(yīng)為0 或1。有時可以觀察到微生物生長后聚集成細(xì)胞團(tuán)，沉積在試管或瓶子底部，發(fā)生這種情況時，小心振蕩試管后再進(jìn)行觀察。選擇性液體計數(shù)培養(yǎng)基目標(biāo)菌應(yīng)有產(chǎn)氣現(xiàn)象，非目標(biāo)菌無產(chǎn)氣現(xiàn)象。

3　結(jié)果與討論

濁度值的實驗結(jié)果見表1。

表1　A、B、C、D四家生產(chǎn)的改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基的濁度值Table 1　A，B，C，D modified tryptone soy broth four production medium turbidity value

國內(nèi)三家生產(chǎn)的改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基不能滿足檢驗工作的要求，由試驗結(jié)果顯示出，是基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的成分不能滿足菌種的生長要求，而國外生產(chǎn)的改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基能滿足檢驗工作的要求。因此，期待國內(nèi)微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家要進(jìn)一步加強(qiáng)培養(yǎng)基原料的質(zhì)量控制，進(jìn)而加強(qiáng)檢驗工作的可靠性和準(zhǔn)確性。

4　小結(jié)

培養(yǎng)基的質(zhì)量是微生物實驗室檢測工作的基礎(chǔ)，事關(guān)檢測工作的準(zhǔn)確性、可靠性，在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個環(huán)節(jié)的質(zhì)量問題，導(dǎo)致偏離檢驗結(jié)果的科學(xué)性、客觀性。因此，認(rèn)真地做好培養(yǎng)基的質(zhì)控工作，不斷完善和提高培養(yǎng)基的質(zhì)控水平，為微生物檢測實驗室提供高質(zhì)量的培養(yǎng)基，至關(guān)重要。

根據(jù)對4家培養(yǎng)基生產(chǎn)商的改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量評估，一方面顯示出國內(nèi)3家的不能滿足檢驗要求，從試驗結(jié)果看出，是基礎(chǔ)培養(yǎng)基的問題；另一方面，也證明了對于檢驗工作，培養(yǎng)基質(zhì)量評估的重要性。

［1］陸承平．獸醫(yī)微生物學(xué)［M］.4版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2007：67-73

［2］葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜．全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］．3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：763-769

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［5］中華人民共和國衛(wèi)生部．GB 4789.11-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗金β型溶血性鏈球菌檢驗［S］．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2014

［6］中華人民共和國衛(wèi)生部．GB 4789.28-2013食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求［S］．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2013

Effect of Modified Tryptone Soy Broth Medium

WANG Hong-liang，CHENG Yan-yu，WANG Meng-xiao
（Dairy and Food Monitoring Center，Tianjin 300381，China）

Evaluation of GB 4789.11-2014＜National food safety standard Food microbiological examination：β-hemolytic streptococcus test＞in modified tryptone soy broth medium quality.a total of three domestic（labeled A，B，C）and foreign（labeled D）a culture based manufacturer of tryptone soya broth culture base（commercial dehydration synthetic culture medium）and the corresponding additives，use target bacteria（βhemolytic streptococcus ATCC21059）and non target bacteria（Escherichia coli ATCC25922，Staphylococcus aureus ATCC25923），according to the GB4789.28-2013＜National food safety standards Food microbiological examination Quality requirements for media and reagents＞in selective enrichment culture based qualitative test method for quality evaluation.At the same time without additives test.The A，B and C three modified tryptone soy broth culture medium target bacteria turbidity values are 0 and non target bacteria turbidity value of 0；without reagent medium target bacteria turbidity values are 0，non target bacteria turbidity value of 0.Foreign D improvement of the pancreatic tryptone soya broth culture medium target bacteria turbidity value is 2，non target bacteria turbidity value of 0；without reagent culture based target bacteria turbidity value of 2，non target bacteria turbidity values for 1.Domestic A，B，C three modified tryptone soy broth medium quality assessment that is tryptone soya broth culture medium（without additives）based problem；domestic tryptone soya broth culture medium quality needs to be improved.

modified trypticase soy broth medium；selective enrichment medium；turbidity value鏈球菌歸屬于鏈球菌屬，在伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊列有30多個種。鏈球菌種類很多，在自然界分布很廣，水、塵埃、動物體表、消化道、泌尿生殖道黏膜、乳汁等都有存在，有些是非致病菌，有些構(gòu)成人和動物的正常菌群。在鏈球菌屬中與食品衛(wèi)生和安全有關(guān)的鏈球菌主要是β-溶血性鏈球菌，尤以A群鏈球菌（如化膿鏈球菌）和B群鏈球菌（如無乳鏈球菌）為主。β-溶血性鏈球菌對人的毒力較強(qiáng)，能夠引起各種化膿性疾病、肺炎、傷口感染和敗血癥等。化膿鏈球菌為β-溶血、對地衣桿菌素敏感、PYR陽性具有蘭氏A群抗原，可形成大菌落，是人體的重要致病菌之一。該菌有多種毒力因子（M蛋白、脂磷壁酸酶、毒素），可引起多種感染，包括咽炎、呼吸道感染皮膚感染（膿皰病、丹毒）、軟組織感染、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、產(chǎn)褥期膿毒病、關(guān)節(jié)炎，產(chǎn)毒素的菌株引起的感染可導(dǎo)致猩紅熱或更嚴(yán)重的中毒性休克綜合征。無乳鏈球菌是發(fā)生以產(chǎn)褥期膿毒癥和腦膜炎為特征的新生兒感染的一個重要原因。近年來，在北美洲和歐洲伴發(fā)中毒性休克綜合征的嚴(yán)重鏈球菌感染有增多的趨勢［1-4］。

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.10.035

王洪亮（1981—），男（漢），工程師，碩士研究生，從事食品微生物檢測。

2016-03-08