結腸癌中Ezrin蛋白的表達及臨床病理學意義

賀愛軍,任　羽

(延安大學附屬醫院,1.普通外科; 2.血液科,陜西 延安,716000)

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結腸癌中Ezrin蛋白的表達及臨床病理學意義

賀愛軍1,任羽2

(延安大學附屬醫院,1.普通外科; 2.血液科,陜西 延安,716000)

摘要:目的觀察和分析結腸癌中Ezrin蛋白的表達及臨床病理學意義。方法選取100例結腸癌組織標本、100例癌旁組織標本、56例轉移淋巴結組織標本作為研究材料，應用免疫組化法對各類標本中的Ezrin蛋白表達水平進行檢測和比較。結果轉移淋巴結組織中的Ezrin蛋白表達陽性率顯著高于結腸癌組織或癌旁組織，結腸癌組織中的Ezrin蛋白表達陽性率顯著高于癌旁組織(P<0.05); 不同腫瘤分化程度、侵犯漿膜情況、淋巴結轉移情況、臨床分期和生存時間患者的結腸癌組織中的Ezrin蛋白表達陽性率差異均有統計學意義(P<0.05)。結論結腸癌的侵襲和轉移等臨床病理特征與腫瘤組織中的Ezrin蛋白高表達密切相關，Ezrin蛋白表達水平可作為評價結腸癌病理特征和患者預后的輔助指標。

關鍵詞:結腸癌; Ezrin蛋白; 免疫組化法; 病理學特征

結腸癌是臨床上較為常見的胃腸道惡性腫瘤，以40～60歲人群的發病率最高[1]。目前，臨床上針對結腸癌的主要治療方式為手術治療，在保證根除病灶的前提下，綜合應用術后化療、靶向治療、內分泌治療及免疫治療能夠減少轉移的發生率和復發率，提高患者的生活質量和生存率[2]。消化道是血供和淋巴循環分布豐富的組織，結腸癌易早期出現血行轉移和淋巴結轉移，而且結腸癌細胞的生物學行為存在較大的異質性，這導致結腸癌患者的腫瘤病理特征和預后也存在著較大的差異[3]。本研究分析結腸癌中Ezrin蛋白的表達及臨床病理學意義，現報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2009年1月—2013年5月在本院行手術切除的結腸癌標本100份，標本均來自不同患者，均經術后病理檢查證實為結腸癌。所有納入患者術前均未經化療治療，且均無遠處臟器轉移，其中男61例，女39例，年齡為35～76歲，平均為(54.3±9.2)歲；高分化癌51例，中等分化癌33例，低分化癌16例; 59例患者的腫瘤直徑≤5 cm者,41例患者的腫瘤直徑>5 cm者; 56例患者伴有淋巴結轉移,48例患者的腫瘤侵及漿膜。同時選取與上述腫瘤組織一并切除的100例癌旁良性組織、56例轉移淋巴結組織作為研究對象。

1.2研究方法

應用免疫組化法對上述組織中的Ezrin蛋白表達情況進行檢測和分析，具體方法為:取上述標本組織，經脫蠟、水化，抗原修復后以PBS漂洗，置于H2O2中10 min后于正常血清中在37 ℃溫度下孵育15 min,加入1:50稀釋的抗Ezrin單克隆抗體，以PBS代替一抗作為對照，在4 ℃的溫度下過夜，加人二抗在37℃下孵育60 min,經DAB顯色、蘇木精復染后封片鏡檢。Ezrin蛋白陽性著色主要分布在細胞質或細胞膜中，根據細胞染色強度和表達陽性細胞比例進行分級，其中各視野中均無著色細胞計為(-),各視野平均著色細胞數<50%或染色較淺計為(+),各視野中平均著色細胞數>50%且染色較深計為(2+),以分級結果為(+)或(2+)為陽性表達。

1.3統計學方法

應用 SPSS 22.0統計軟件進行統計學分析，計數資料以百分比的形式表示，有等級關系的計數資料比較應用頻數表的秩和檢驗(Mann-Whitney U法)進行處理，無等級關系的計數資料應用卡方檢驗或Fisher 精確概率法進行處理，均以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1不同組織中的Ezrin蛋白表達陽性率的比較

三種組織標本中的Ezrin蛋白表達陽性率的差異有統計學意義(χ2=27.243,P<0.01),其中轉移淋巴結組織中的Ezrin蛋白表達陽性率顯著高于結腸癌組織或癌旁組織，結腸癌組織中的Ezrin蛋白表達陽性率顯著高于癌旁組織(P<0.05),見表1。

表1　不同組織中的Ezrin蛋白表達陽性率的比較

與癌組織比較,*P<0.05; 與癌旁組織比較,##P<0.05。

2.2Ezrin蛋白表達與結腸癌臨床病理學特征的相關性分析

不同腫瘤分化程度、侵犯漿膜情況、淋巴結轉移情況、臨床分期和生存時間患者的結腸癌組織中的Ezrin蛋白表達陽性率差異均有統計學意義(U=2.995、4.576,χ2=13.675、21.645、15.818,P<0.05),見表2。

表2　Ezrin蛋白表達與結腸癌臨床病理學特征的相關性

與同一臨床特征的亞項比較,**P<0.01。

3討論

侵襲和轉移是惡性腫瘤的主要生物學特征，也是導致腫瘤患者死亡的重要原因之一。研究[4]發現，結腸癌的侵襲和轉移與腫瘤浸潤深度、分化程度及腫瘤所在的解剖部位等臨床病理因素有關。近年來，隨著分子生物學技術和人類基因組學研究的迅速發展，發現腫瘤轉移是多種基因調控、多因素參與、多階段發展的復雜病理過程，同時也發現了很多與之高度相關的基因及其產物，而他們也成為了臨床腫瘤靶向治療的重要靶點或評價腫瘤患者預后、轉移的重要指標，針對腫瘤轉移的相關蛋白研究已成為腫瘤研究領域的熱點問題。相關研究結果[5-8]顯示，磷脂酰肌醇3激酶(P13K)/絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶(Akt)信號通路、Wnt信號通路/Hedgehog(Hh)信號通路、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路等蛋白信號通路在結腸癌遷移、侵襲、相關血管內皮細胞功能異常、表皮生長因子和肝細胞生長因子表達水平上調等多種生物學行為中均發揮著重要的作用。

本研究結果顯示，在結腸癌腫瘤組織和轉移淋巴結組織中,Ezrin蛋白表達陽性率均明顯升高，而且轉移淋巴結組織中的Ezrin蛋白表達陽性率還要顯著高于結腸癌組織，結腸癌組織中的Ezrin蛋白表達水平與腫瘤分化程度、侵犯漿膜情況、淋巴結轉移情況、臨床分期和患者生存時間等均具有相關性，這說明結腸癌的侵襲和轉移等病理特征及患者預后均與Ezrin蛋白表達水平的上調具有密切的相關性。Ezrin蛋白表達水平可作為評價結腸癌病理特征和預后的重要輔助指標。Ezrin蛋白是ERM蛋白家族中的重要成員之一，是一種膜細胞骨架連接蛋白，能夠通過介導細胞膜與細胞骨架的連接來調節細胞形態、運動、黏附及細胞信號轉導，是細胞維持其形狀、運動、極性及其信號轉導所不可缺少的一種蛋白。研究結果[9]顯示，Ezrin蛋白參與了微絨毛的形成并能夠與CD43、CD44、E-cadherin、ICAM-1、F-型肌動蛋白等細胞膜和細胞骨架組件相連接而發揮多種生物學作用。Ezrin蛋白在1981年首次被發現，但其后的10多年中一直被認為只是細胞骨架的重要組成成分。直到2004年，有學者發現Ezrin蛋白表達水平異常與骨肉瘤、橫紋肌肉瘤的轉移有關,Ezrin蛋白的重要意義才被逐漸重視。近年來的研究[10]證實,Ezrin蛋白在婦科腫瘤、消化道腫瘤、黑色素瘤及鼻咽癌、成人軟組織腫瘤等多種腫瘤細胞中存在高表達，并在腫瘤組織中的發生、發展、浸潤、轉移等生物學行為中發揮著重要作用，與多種腫瘤的發病風險、病情進展及預后高度相關。研究者[11]發現Ezrin蛋白的高表達能夠通過改變腫瘤細胞極性和細胞運動、調節腫瘤細胞間及細胞外基質的黏附力、參與腫瘤細胞內信號轉導等多種機制來影響惡性腫瘤的轉移,Ezrin蛋白的高表達可打破正常細胞內的細胞信號轉導相關分子(Rho)、受體酪氨酸蛋白激酶等信號傳遞網絡，并借助這些信號轉導網絡對腫瘤細胞的形態、黏附、吞噬、運動、血管形成等一系列生物學行為發揮調控作用，最終賦予腫瘤細胞高轉移活性。Ezrin蛋白的作用幾乎貫穿于腫瘤細胞轉移的整個過程，包括腫瘤細胞從原發灶脫落并具有運動性、侵入周圍組織及脈管系統、穿透基底膜、在靶器官增殖形成轉移灶等多個環節。

綜上所述，結腸癌的侵襲和轉移等臨床病理特征與腫瘤組織中的Ezrin蛋白高表達密切相關,Ezrin蛋白表達水平可作為評價結腸癌病理特征和患者預后的輔助指標。

參考文獻

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收稿日期:2016-04-11

中圖分類號:R 735.3

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2016)15-050-03

DOI:10.7619/jcmp.201615014

Expression of Ezrin protein in colonic carcinoma and its clinical pathological significance

HE Aijun1,REN Yu2

(1.Department of General Surgery; 2.Department of Hematology,The Affiliated Hospital of Yan′an University,Yan′an,Shaanxi,716000)

ABSTRACT:ObjectiveTo observe and analyze the expression of Ezrin protein in colonic carcinoma and its clinical pathological significance.MethodsA total of 100 specimens of colonic carcinoma tissues,100 specimens of paracancerous tissues and 56 specimens of metastatic lymph node tissue were selected as the research materials.The immunohistochemical method was used to detect the expression of Ezrin protein in all kinds of specimens.ResultsThe positive expression rate of Ezrin protein in metastatic lymph node tissues was significantly higher than that in colonic carcinoma tissues or paracancerous tissues,and the positive expression rate of Ezrin protein in colonic carcinoma tissues was significantly higher than that in paracancerous tissues (P<0.05).There were significant differences in the positive expression rates of Ezrin protein among the patients with different conditions of tumor differentiation degree,serosa invasion,lymph node metastasis,clinical stage and survival time (P<0.05).ConclusionThe clinical pathological characteristics such as invasion and metastasis of colonic carcinoma are closely correlated with the high expression of Ezrin protein in tumor tissues,and the expression of Ezrin protein can be used as an auxiliary indicator to evaluate the clinical pathological characteristics and the prognosis of the patients with colonic carcinoma.

KEYWORDS:colonic carcinoma; Ezrin protein; immunohistochemistry method; pathological characteristics