河北核桃ISSR反應體系的建立

雷　玲，王紅霞，高　儀，張志華*

（1河北省贊皇縣林業旅游局　051230；2河北農業大學山區研究所；3河北農業大學園藝學院）

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河北核桃ISSR反應體系的建立

雷玲1，王紅霞2，高儀3，張志華2*

（1河北省贊皇縣林業旅游局051230；2河北農業大學山區研究所；3河北農業大學園藝學院）

摘要：以3個河北核桃樣品為材料，對ISSR反應體系中的主要影響因子DNA模板濃度、引物濃度、?DNA聚合酶用量、退火溫度進行優化篩選。最后確定河北核桃 ISSR-PCR反應體系為 20L體系中含 10×PCR Buffer （Mg2+Plus）2L，dNTPs（各2.5 mM）1.6L，?DNA聚合酶1.0 U，引物25M，模板DNA 50 ng。反應的基本程序為：94℃預變性5 min（1個循環），然后94℃變性30 s，52℃退火60 s，72℃鏈延伸60 s（32個循環），72℃延伸10 min（1個循環），4℃保持。不同引物間適宜的退火溫度不同。通過對影響 ISSR反應體系的主要因子進行優化篩選，建立了適合河北核桃 ISSR分析的反應體系，為進一步開展河北核桃指紋圖譜、遺傳多樣性及品種鑒定等的研究奠定基礎。

關鍵詞：河北核桃；ISSR；反應體系

河北核桃（Juglans hopeiensis Hu）又稱麻核桃［1］，自然群體中類型較多，堅果的大小、形狀、紋理的起伏及變化等存在較大差異，并且其引種資源也比較混亂，國內通過鑒定的河北核桃新品種唯見張志華等［2］選育的“藝核1號”，因此，建立河北核桃ISSR反應體系為品種鑒定和育種改良打下基礎是非常必要的。ISSR （inter-simple sequence repeat）是由Zietkiewicz等于1994年創建的一種新型的分子標記［3-5］，這種SSR指紋是用SSR為引物來擴增重復序列之間的區域，因此又稱為Inter-SSR，簡稱ISSR［3］。

因ISSR分子標記技術特點其應用越來越廣泛，柑橘、蘋果和枇杷等物種的反應體系及其品種的指紋圖譜相繼建立［6-10］。在核桃屬ISSR體系建立方面也有些報道，如陳少瑜等［11］以漾濞核桃為研究對象，建立了適合漾濞核桃ISSR-PCR分析的反應體系。……