植物組織培養在林業育苗實踐中的應用

顏曉魯

(甘肅省小隴山林業實驗局云坪林場，甘肅兩當742403)

植物組織培養在林業育苗實踐中的應用

顏曉魯

(甘肅省小隴山林業實驗局云坪林場，甘肅兩當742403)

植物組織培養育苗就是在無菌而又適合植物生長發育所需營養和環境條件下，培養活植物的組織或器官，使之成為一新的獨立植株。植物的組織或器官可以取自植物的任何部位，如根、莖、葉、花、果實、種子、胚等任何部位的細胞、單個細胞，甚至細胞內原生質體。

目前在我局林業科研所的生產上采用最多的是植物莖尖(3 mm以下)、胚、花器等的組織培養。組織培養可以迅速擴大繁殖系數，僅用一小塊植物組織，就可在很短時間內繁殖出上萬株苗木。植物組織培養所用組織或細胞很少，對稀有珍貴而且繁殖極其困難的植物種類具有非常重要的意義。

1組織培養條件

1.1實驗室

組織培養在無菌條件下進行，需要一定的實驗室條件，應具備的基本條件：

1.1.1化學實驗室。存放各類化學藥品，配制培養基等。需具備下列物品：藥品柜、玻璃器皿柜、實驗臺、冰箱、天平、水浴鍋、酸試計、水池等。其要求與一般化學實驗室要求相同。

1.1.2洗滌消毒室。用做器皿的洗刷、消毒、干燥等，配有高壓滅菌鍋、烘箱、木架、水池等。

1.1.3無菌操作室。用于植物材料的消毒、接種、轉移、原生質體制備等。要求室內封閉，保持無菌。并具有以下物品：超凈工作臺、紫外燈、解剖鏡、低速離心機。

1.1.4培養室。是供培養物生長的場所。要求室內整潔，有控溫和照明設備。室內溫度要求恒溫，均勻一致，有自動調節溫度的設備，一般要求室溫在25～27℃，或依所培養植物而定。光源以白色熒光燈為好，還應有培養架裝置等。

1.2常用藥品

組培所需藥品主要用于培養基的配制，也有部分用于外植體消毒。

1.2.1需要消毒藥品。次氯酸鈣(鋁)、過氧化氫、漂白精片、溴水、硝酸銀等。

1.2.2無機鹽類。包括大量元素和微量元素兩類。大量元素包括植物生長發育所必需的N、P、K、Ca、

社區)和山頭地塊及小班。地方政府牽頭組織有關部門(單位)聯合對下達的防控目標任務完成情況開展春季、年度和平時督查指導，發現問題，督促整改，及時通報結果。縣重大外來林業有害生物防控指揮部安排縣林業局于每年年底對各鄉鎮及有關部門(單位)防控情況進行全面檢查考核，并將考核結果進行通報。對領導到位、責任落實、防控任務目標完成好的鄉鎮，予以表彰；對不能認真履行責任，沒有完成防控任務目標的鄉鎮(場)，依法追究有關責任人的責任。

3.5加大資金投入，保障防控需要

堅持以地方投入為主，上級補助為輔的原則，縣財政要優先安排防控經費，并積極爭取上級部門對防控資金的支持，保證防控資金按需要投入。經費主要包括春秋季兩次松材線蟲病疫情普查經費、重點地帶疫情監測經費、零星松枯死木清理處理經費、松墨天牛防治經費、檢疫執法工作經費、松材線蟲病疫情舉報獎勵費和林分改造費，以及一旦發生松材線蟲病疫情除治費等費用。加強對松材線蟲病防控資金使用的管理，確保防控成效和資金專用。防控所用農藥器械由縣林業部門統一采購提供。

參考文獻

[1]王玲萍.福建省松材線蟲病防控類型區劃與對策措施[J].生物災害科學，2014(3)：228-231.

[2]詹祖仁，張龍華，詹斐，等．福建省松材線蟲病防控的法規問題及建議[J]．中國林副特產，2013(1)：94-96．

Mg、S等；微量元素包括Fe、Zn、Cu、B、Mo、C等。

1.2.3有機物。主要是蔗糖、維生素、氨基酸等。

1.2.4植物生長調節劑。用于組培的主要有生長素、細胞分裂素及赤霉素。

1.2.5有機附加物。常用的有酵母提取物、椰乳、果汁等及相應的植物組織浸提液。

1.2.6水。培養基用水原則上使用蒸餾水、去離子水等。

2培養基的配制

2.1培養基種類及成分

培養基分為固體培養基和液體培養基兩類。在培養基中加入一定量的凝固劑(如瓊脂、明膠等)即為固體培養基，而不加入凝固劑的為液體培養基。這兩種培養基的基本成分是類似的，一般分為兩部分，即基本培養基和附加成分如激素和天然附加物等。

2.2培養基的配制

2.2.1母液的配制與保存。為減少工作量及便于低溫貯藏，一般配成比所需濃度高10～100倍母液保存在低溫環境條件下，在配制培養基時按比例量取即可。母液的配制及保存應注意藥品稱量要精確，微量元素化合物精確到0.0001g，大量元素化合物精確到0.01g。母液貯藏時間不宜過長，一般為幾個月。要在盛裝母液的容器上注明配制日期，以便定期檢查，出現渾濁等現象時不能用。母液應放在2～4℃的冰箱內保存。

2.2.2培養基配制。將母液從冰箱中取出，依次排好，按照需要量定量吸取放入量筒中。稱取瓊脂，培養基中的蔗糖和瓊脂，可依其需要量隨稱取隨用。加少量水煮制。加熱時要不斷攪拌，使之充分混合。測定一下配好的培養基pH值，用0.1～1.0的HCI(或NaOH)對培養基的pH位進行調整，使pH值保持在5.4～ 6.0。再分裝于三角瓶等培養容器內封禁包好備用。

3方法和程序

3.1外植體的選取和滅菌

組培外植體一般分為兩類：一類是帶芽的外植體，如莖類、側芽、鱗芽、原球莖等，可直接誘導促進叢生芽的大量產生；另一類是根、莖、葉等營養器官及花藥、花瓣、花萼、胚珠、果實等生殖器官，要經過愈傷組織階段再分化出芽或產生胚珠狀體后形成再生植株。進行培養的植物材料大都為植物的莖尖，通常切取莖尖的大小，一般2～5 mm。脫毒組織培養小于3mm。切下的芽應分別用流水沖洗30 min，然后放在10%次氯酸鈉溶液或漂白粉溶液中浸泡10～15 min。滅菌的時間和滅菌液的濃度應根據芽的大小和成熟度及不同種類的植物進行調整，做到既要防止菌類污染，又要避免滅菌液的殺傷作用引起組織壞死。

滅菌后的芽應在無菌條件下進行剝離和切割，體積較大的剝離可以在肉眼下直接操作，太小的要在顯微鏡下進行。切出的組織可以直接接種在已準備好的培養基上。在瓶上做好標記然后移到培養架上。

3.2外植體的增殖

接種后的培養容器放在營養室中，一般每天光照16 h，溫度控制在25℃左右，對外植體進行分化培養。在新梢形成后為了擴大繁殖系數，還需要進行繼代培養。把材料分株或切斷后轉入增殖培養基中，增殖培養1個月左右后，可視情況再進行多次增殖，以增加植株數量。增殖培養基一般在分化培養基上加以改良，以利于增殖率的提高。

3.3根的誘導

繼代培養形成的不定芽和側芽等一般沒有根，必須轉移到生根培養基上進行生根培養。生根培養基較多用l/2MS培養基。一般在生根培養基中培養1個月左右即可獲得健壯根系。此外，生產中也有用具有根原基的試管苗移植，這樣的試管苗只在坐根培養基中培養 7～10d，誘導出根原基或小于1mm的幼根，但其基部切口已愈合，不易感染，栽后能很快生根，亦具較高的成活率。

3.4組培苗的移栽

組培苗一般長至高5～8 cm，有3～5條根后即可移栽。先將培養容器蓋子打開，在室內光照下放l～2d，使幼苗的葉片能增強一些抗性。然后取出苗，用自來水將根系上的瓊脂沖洗干凈，再栽入已準備好的基質中。盆栽苗需放在與培養室溫度差不多的溫室中，溫度25℃左右，相對濕度90%左右，但基質不宜過濕或積水，以防爛苗。培養4～6周，新梢開始生長，小苗即可轉入正常管理。

組織培養育苗，要受到溫度、光照、濕度等物理條件和不同氣體、培養基的組成、pH值、滲透壓等化學條件，以及外植體的樹種、部位、大小等生物條件的影響。

中圖分類號:S722.3+7

文獻標識碼:B

作者簡介：顏曉魯(1988-)，男，林業助理工程師，E-mail:whh790502@163.com。

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2016.03.027