大馬勃及大口靜灰球的抗炎鎮痛作用比較研究*

相聰坤，關勝江，馬娟娟

（河北省中醫院，石家莊　050011）

·中藥研究·

大馬勃及大口靜灰球的抗炎鎮痛作用比較研究*

相聰坤，關勝江，馬娟娟

（河北省中醫院，石家莊050011）

［目的］比較大馬勃及大口靜灰球的抗炎鎮痛作用，為區分馬勃真偽的必要性提供依據。［方法］分別采用二甲苯致小鼠右耳腫脹、蛋清致大鼠足腫脹和大鼠棉球肉芽腫實驗觀察大馬勃及大口靜灰球的抗炎作用。采用醋酸扭體法、酒石酸銻鉀扭體法和熱板法觀察藥物鎮痛作用。［結果］大馬勃的抗炎作用明顯高于混淆品大口靜灰球，大口靜灰球沒有明顯的鎮痛作用。［結論］大馬勃與其混淆品大口靜灰球在抗炎、鎮痛作用方面都存在一定的差異。

大馬勃；混淆品；抗炎；鎮痛

馬勃，最早載于《名醫別錄》［1］，味辛性平，有清肺利咽，止血等功效，用于風熱郁肺、咽痛、咳嗽、音啞；外治鼻衄，創傷出血。現代藥理研究表明，馬勃在抑菌［2］、止血［3］、殺蟲［4］、抗腫瘤［5］等方面具有明顯作用，現代研究還表明馬勃具有抗炎鎮痛活性［6］。據《中華人民共和國藥典》，馬勃為灰包科真菌脫皮馬勃 Lasiosphaera fenzlii Reich、大馬勃Calvatia gigantean（Batsch ex Pers.）Lloyd或紫色馬勃Calvatia lilacina（Mont.et Berk）Lloyd的干燥子實體［7］。在中醫臨床多年的應用實踐中，馬勃的品種一直較為混亂，灰包科多種大型、小型子實體均作為馬勃使用。其中最常見、應用最多的是灰包科真菌大口靜灰球Bovistella sinensis Lloyd。在1987年版《四川省中藥材標準》中，把大口靜灰球收入馬勃項下，而2010年版《四川省中藥材標準》中，為了與藥典相區別，則把大口靜灰球和長根靜灰球另立新名：川西馬勃Chuanximabo BOVISTELLA，從而收入四川的地方標準。時至今日，其他各地市場上仍然能發現大口靜灰球混充馬勃，供臨床使用。兩者之間是否有功效上的差別？筆者從抗炎、鎮痛方面進行了比較。

1　材料

1.1動物SPF級SD大鼠96只，雄性，體質量（180± 220）g；SPF級昆明小鼠192只，雄性，體質量（18± 22）g，由河北醫科大學實驗動物中心提供。

1.2受試藥物實驗用的大馬勃（購自安國市藥興藥材有限公司），為灰包科真菌大馬勃（Calvatia gigantea Lloyd）的干燥子實體；大口靜灰球（購自安國市藥興藥材有限公司），為灰包科植物大口靜灰球（Bovistella sinensis Lloyd）的干燥擔子果。藥材經河北省藥檢所段吉平主任中藥師鑒定。

1.3大馬勃水提液和大口靜灰球水提液由河北省中醫院煎藥室制備：取大馬勃粉末250 g，裝入紗布口袋，加水750 mL，浸泡0.5 h后，砂鍋煎煮0.5 h，濾出提取液；二次加水700 mL，提取0.5 h，濾出提取液；三次加水700 mL，提取0.5 h，濾出提取液。合并3次大馬勃提取液，再次過濾，加熱濃縮，量瓶定容至250mL，成1kg/L的水溶液，真空包裝為10g/袋，共25袋，冰箱冷藏備用。用同樣的方法制備大口靜灰球水提液。

2　方法

2.1大馬勃及大口靜灰球的抗炎作用比較

2.1.1二甲苯致小鼠右耳腫脹反應將48只小鼠隨機分為3組，每組12只，即：模型對照組、陽性藥組、大馬勃水煎劑組、大口靜灰球水煎劑組。大馬勃和大口靜灰球水煎劑組小鼠分別灌胃給予大馬勃及大口靜灰球水煎劑3.6 g/kg（含生藥，相當于臨床用量的18倍），陽性藥組小鼠給予地塞米松片0.001 2 g/kg，模型對照組灌胃給予相應量的生理鹽水，每日1次，連續7 d。第7天末次灌胃給藥40 min后，在每只小鼠右耳涂二甲苯0.02 mL，左耳涂生理鹽水。1 h后處死小鼠，剪下耳片，用8 mm打孔器取左右同一部位耳片，稱質量。兩耳重量的差值即為耳腫度，以mg（耳腫度）/g體質量表示。

2.1.2蛋清致大鼠足腫脹反應大鼠分組給藥同

2.1.1，第7天末次灌胃給藥40 min后，分別在大鼠后肢足跖皮下注射蛋清每只0.1 mL致炎。40 min后測量大鼠足跖腫脹程度。兩足厚度的差值即為足腫度，分別計算各組大鼠的足腫脹度。

*基金項目：河北省科技計劃項目（12277794）。

作者簡介：相聰坤（1973-），女，副主任中藥師，主要從事中藥學方面的研究工作。

2.1.3大鼠棉球肉芽腫實驗大鼠分組給藥同2.1.1，各組大鼠均以3%戊巴比妥鈉30 mg/kg腹腔注射麻醉，剪去腹部被毛，無菌條件下剪開下腹部正中皮膚，切口長1cm，向雙側腹股溝皮下植入10mg無菌干燥棉球，縫合切口。術后當日按10 mL/kg容積腹腔注射受試藥物，每日1次，連續給藥7 d。術后8 d，戊巴比妥鈉麻醉大鼠，手術取出棉球，剔凈周圍脂肪組織，放烘箱中60℃烘干24 h，稱干質量，該干質量減去棉球原質量即得肉芽腫干質量，以mg（肉芽腫）/100 g體質量表示。

2.2大馬勃及大口靜灰球的鎮痛作用比較

2.2.1醋酸致小鼠扭體反應小鼠分組給藥同2.1.1，陽性藥組小鼠給予復方乙酰水楊酸片0.2 g/kg，第7天末次灌胃給藥40 min后，各組小鼠均腹腔注射0.1 mL/10 g，1%冰醋酸，立即觀察20 min內各組小鼠的扭體次數。

2.2.2酒石酸銻鉀致小鼠扭體反應小鼠分組給藥同2.2.1，第7天末次灌胃給藥40 min后，各組小鼠均腹腔注射0.15 mL/10 g，0.05%酒石酸銻鉀，立即觀察20 min內各組小鼠的扭體次數。

2.2.3熱板法致痛實驗小鼠分組給藥同2.2.1，第7天末次灌胃給藥40 min后，將小鼠置于熱板上（55.0±0.5）℃，密切觀察小鼠反應。秒表記錄從置于熱板上到舔后足的時間，取其為該鼠的痛閾值。如小鼠在60 s內仍無產生疼痛反應，應立即取出不再刺激，按60 s計算。

2.3統計方法采用SPSS 18.0統計軟件進行統計學處理，計量資料用均值±標準差（±s）表示，計量資料組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較若方差齊采用LSD法，若方差不齊采用Dunnett's T3法以，P＜0.05為差異有統計學意義。

3　結果

3.1大馬勃及大口靜灰球對小鼠右耳腫脹的影響見表1。由表1可見，與模型組相比，大馬勃組和偽品組均能明顯降低二甲苯所致的小鼠右耳腫脹程度，具有明顯的抗炎作用，差異有統計學意義（P＜0.01）。但是，與大馬勃組相比較，偽品大口靜灰球的抗炎作用明顯降低（P＜0.05）。

3.2大馬勃及大口靜灰球對大鼠足腫脹的影響見表2。表2顯示的結果與表1相同，大馬勃組和偽品組均能明顯降低蛋清所致的大鼠足腫脹程度，具有明顯的抗炎作用，與模型組比較，差異有統計學意義（P＜0.01）。而與大馬勃組相比較，偽品大口靜灰球的抗炎作用顯著降低（P＜0.01）。

表1　大馬勃及其大口靜灰球對小鼠右耳腫脹的影響（±s）Tab.1　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice right ear swelling model induced by dimethybenzene（±s）

表1　大馬勃及其大口靜灰球對小鼠右耳腫脹的影響（±s）Tab.1　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice right ear swelling model induced by dimethybenzene（±s）

注：與模型組比較，**P＜0.01；與大馬勃組比較，#P＜0.05。

組別　動物數　耳腫度［mg/（g·wt）］模型組　12　0.48±0.10地塞米松組　12　0.16±0.10**大馬勃組　12　0.19±0.10**大口靜灰球組　12　0.30±0.10**#

表2　大馬勃及其大口靜灰球對大鼠足腫脹的影響（±s）Tab.2　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on rat paw swelling model induced by albumen（±s）

表2　大馬勃及其大口靜灰球對大鼠足腫脹的影響（±s）Tab.2　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on rat paw swelling model induced by albumen（±s）

注：與模型組比較，**P＜0.01；與大馬勃組比較，##P＜0.01。

組別　動物數　足腫度模型組　12　0.65±0.076地塞米松組　12　0.30±0.069**大馬勃組　12　0.39±0.033**大口靜灰球組　12　0.52±0.080**##

3.3大馬勃及大口靜灰球對大鼠棉球肉芽腫的影響 見表3。由表3可見，與模型組相比，大馬勃組和偽品組均能明顯降低棉球肉芽腫脹程度，差異有統計學意義（P＜0.01或P＜0.05），具有明顯的抗炎作用，而與大馬勃組相比較，偽品提取液的抗炎作用明顯降低（P＜0.01）。

表3　大馬勃及其大口靜灰球對大鼠棉球肉芽腫的影響（±s）Tab.3　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on the cotton ball granuloma of rats（±s）

表3　大馬勃及其大口靜灰球對大鼠棉球肉芽腫的影響（±s）Tab.3　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on the cotton ball granuloma of rats（±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與大馬勃組比較，##P＜0.01。

組別　動物數　耳腫度（mg/100 g·wt）模型組　12　49.51±2.70地塞米松組　12　20.74±2.45**大馬勃組　12　22.40±2.45**大口靜灰球組　12　45.72±3.90*##

3.4大馬勃及大口靜灰球對小鼠醋酸扭體反應的影響見表4。由表4可以看出，與模型組相比，大馬勃組對醋酸致小鼠扭體反應有明顯的鎮痛作用，差異有統計學意義（P＜0.01）。然而偽品組大口靜灰球提取液對小鼠扭體反應無明顯的鎮痛作用（P＞0.05）。

表4　大馬勃及大口靜灰球對小鼠醋酸扭體反應的影響（±s）Tab.4　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice acetic acid writhing model（±s）

表4　大馬勃及大口靜灰球對小鼠醋酸扭體反應的影響（±s）Tab.4　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice acetic acid writhing model（±s）

注：與模型組比較，**P＜0.01。

組別　動物數　扭體次數模型組　12　48.83±11.76陽性藥組　12　25.00±8.44**大馬勃組　12　30.92±9.97**大口靜灰球組　12　41.00±9.95

3.5大馬勃及大口靜灰球對小鼠酒石酸銻鉀扭體反應的影響見表5。表5顯示的結果與表4相同，與模型組相比，大馬勃組對酒石酸銻鉀致小鼠扭體反應有明顯的鎮痛作用，差異有統計學意義（P＜0.01）。然而偽品組大口靜灰球提取液對小鼠扭體反應無明顯的鎮痛作用（P＞0.05）。

表5　大馬勃及其大口靜灰球對小鼠酒石酸銻鉀扭體反應的影響（±s）Tab.5　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice antimony potassium tartrate writhing model（±s）

表5　大馬勃及其大口靜灰球對小鼠酒石酸銻鉀扭體反應的影響（±s）Tab.5　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on mice antimony potassium tartrate writhing model（±s）

注：與模型組比較，**P＜0.01。

組別　動物數　扭體次數模型組　12　51.58±10.44陽性藥組　12　25.75±7.80**大馬勃組　12　33.42±8.10**大口靜灰球組　12　46.00±10.22

3.6大馬勃及大口靜灰球對小鼠熱板反應的影響見表6。表6結果顯示，與模型組相比，大馬勃組對小鼠熱板反應有明顯的鎮痛作用，差異有統計學意義（P＜0.05）。然而偽品組大口靜灰球提取液對小鼠熱板反應無明顯的鎮痛作用（P＞0.05）。

表6　大馬勃及其大口靜灰球對小鼠熱板反應的影響（±s）Tab.6　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on hot plate model（±s）

表6　大馬勃及其大口靜灰球對小鼠熱板反應的影響（±s）Tab.6　Effects of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on hot plate model（±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別　動物數　痛閾值（s）模型組　12　24.92±5.92陽性藥組　12　50.83±7.65**大馬勃組　12　48.33±8.17*大口靜灰球組　12　26.50±7.98

4　討論

炎癥是具有血管系統的活體組織對損傷因子發生的防御反應，是感染及其許多疾病的最基本病理過程。本研究采用多種炎癥實驗動物模型，比較大馬勃及其大口靜灰球的抗炎作用。研究結果表明，大馬勃對二甲苯致耳腫脹以及蛋清致足腫脹急性炎癥模型和棉球肉芽腫亞急性炎癥模型都具有很好的抗炎作用。然而相比較之下，大口靜灰球的抗炎作用較小（P＜0.05或P＜0.01）。在醋酸扭體實驗和熱板實驗均表明大馬勃具有明顯的鎮痛作用，然而大口靜灰球無明顯鎮痛作用。

本研究通過比較大馬勃及其混淆品大口靜灰球的抗炎鎮痛作用，結果發現混淆品大口靜灰球的抗炎作用明顯低于大馬勃（馬勃正品），而且大口靜灰球沒有明顯的鎮痛作用。說明正品馬勃與混淆品大口靜灰球在抗炎、鎮痛作用方面都存在一定的差異，為臨床提供了使用依據。

武翠玲等［8-9］將馬勃用熱水提取所得的粗品，經Sevag法脫白，DEAE-sepharose fast flow離子交換層析及sephacryl S-300HR凝膠過濾法得大馬勃多糖（CGP-l）。氣相色譜表明，單糖組成為:Gal，Glc，Man 等4種單糖，其中Gal，Gle，Man摩爾比為3.92∶11.28∶1.22。經溴代十六烷基三甲胺絡合后，再通過DEAE-纖維素和SephadexG-75柱層析得馬勃多糖精品，經進一步純化依次得到多糖PS。據推測馬勃產生抗炎鎮痛藥理作用的活性成分很有可能是多糖部分。馬勃所含的化學成分比較復雜，馬勃種屬的復雜性更加劇了這種復雜性［10］。目前對其化學成分的相關研究表明，馬勃中主要含有：甾體化合物、萜類化合物、以及多糖、氨基酸、脂肪酸、蛋白質、多肽等，還含有一些微量元素。馬勃的抗炎鎮痛作用的有效成分到底是什么，仍需要進一步研究。

［1］張慶康，丁永輝.10種馬勃的氨基酸含量測定及聚類分析［J］.中成藥，1996，18（8）:35-37.

［2］孫菊英，郭朝輝.十種馬勃體外抑菌作用的實驗研究［J］.中藥材，1994，17（4）:37-381.

［3］陶文洲，呂競競，楊淑云，等.經纖維胃鏡定位噴灑復方馬勃液治療上消化道出血的療效觀察［J］.中西醫結合雜志，1987，36（1）: 12.

［4］魏艷，高錦明，郝雙紅，等.擔子菌黃硬皮馬勃殺蟲活性研究［J］.西北植物學報，2005，25（2）:382-385.

［5］Ng TB，Lam YW，Wang H.Calcaelin，a new protein with translation inhibiting，antipro-Liferative and antimitogenic activities from the mosaic puffball mushroom Calvatia caelata［J］.Planta Med，2003，69 （3）:212-217.

［6］蘇方華，潘日興.馬勃的抗炎鎮痛實驗研究［J］.齊魯藥事，2010，29（10）:586-588.

［7］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2015:50.

［8］武翠玲，鄧永康，孟延發.大馬勃水溶性多糖的結構研究［J］.天然產物研究與開發，2008，20（6）:1027-1030.

［9］Lam YW，Ng TB，Wang HX.Antiproliferative and antimitogenic activities in a peptide from puffball mushroom Calvatia caelata［J］. Biochemical and Biophysical Research Communications，2001，289 （3）:744-749.

［10］郭晶，江蔚新，范明松.馬勃化學成分及藥理作用研究進展［J］.現代醫藥衛生，2013，29（3）:386-389.

（本文編輯：馬英，滕曉東）

Study on the comparison of Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on anti-inflammatory and analgesia effects

XIANG Cong-kun，GUAN Sheng-jiang，MA Juan-juan
（Hebei Province Traditional Chinese Medicine Hospital，Shijiazhuang 050011，China）

［Objective］To compare the Calvatia gigantea and Bovistella sinensis lloyd on anti-inflammatory and analgesic effects，and provide the basis for the necessity to distinguish the authenticity of Calvatia gigantea.［Methods］The anti-inflammatory effect was observed by mice right ear swelling model induced by dimethybenzene，rat paw swelling model induced by albumen，and the cotton ball granuloma of rat.The analgesic action was observed by mice acetic acid and antimony potassium tartrate writhing test，and hot plate test. ［Results］Anti-inflammatory effects of Calvatia gigantea was obviously higher than that of adulterant Bovistella sinensis lloyd.Bovistella sinensis lloyd has no obvious analgesic action.［Conclusion］Calvatia gigantea and adulterant Bovistella sinensis lloyd have some differences in the anti-inflammation and analgesic actions.

Calvatia gigantea；adulterant；anti-inflammatory；analgesic

R285.5

A

1672-1519（2016）07-0430-04

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.07.12

2016-04-25）