不同培養因素對黑玫瑰石竹叢生芽增殖的影響

張引引 孫寧 陳小強 張菁雯

摘 要：研究多種因素對黑玫瑰石竹組培快繁中叢生芽分化增殖培養的影響，結果表明：叢生芽增殖培養以MS為基本培養基時，增加或減少大量礦質元素不利于叢生芽的誘導；NAA/6-BA為0.1 mg·L-1/1.0 mg·L-1的激素配比有利于叢生芽的增殖，在此基礎上添加谷氨酰胺100 mg·L-1，可提高增殖數達9.4；選用蔗糖15 g·L-1為增殖培養的碳源，在提高增殖效果的同時可有效降低成本。

關鍵詞：黑玫瑰石竹；組織培養；叢生芽；增殖系數

中圖分類號：S682.1+9 文獻標識碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2016.08.031

Abstract：The stems of Dianthus Linn were used as explants and the different effect factors on bud clusters propagation were studied. The results showed that the best medium was MS； NAA 0.1 mg·L-1 +6-BA 1.0 mg·L-1 + Gln 100 mg·L-1 was an optimum concentration for bud differentiation， the propagation coefficient was 9.4； the propagation coefficient could be remained at a high level and the cost could be reduced in sucrose 15 g·L-1.

Key words： Dianthus Linn； tissue culture； bud clusters； propagation coefficient

石竹科植物是重要的觀賞園藝植物，全世界共75個屬，約2 000種，我國有30屬388種，分布于全國各地[1-2]。黑玫瑰石竹是石竹科石竹屬多年生草本植物，重瓣花型，花瓣黑紫色嵌白邊、質如絲絨，株高30～50 cm，各地可種植，可用作盆栽、切花、花壇等栽植，觀賞價值極高。黑玫瑰石竹不易用種子繁殖，易產生品種混雜，不能保持原品種的優良品質，而傳統扦插繁殖易造成病毒害，切花質量變劣，栽培質量下降[3-4]。對黑玫瑰石竹組織培養技術的研究，不僅可以開展種苗的快繁，而且還可以結合脫毒技術實現無毒苗的生產，研究結果可為這一新特花卉品種的規?；a提供技術參考。本研究以黑玫瑰石竹試管苗莖段為試材，對外源激素、大量礦質元素、碳源、有機添加物及活性炭等多種因素對叢生芽增殖的影響進行了研究。

1 材料和方法

1.1 材 料

試驗材料為市售北京花仙子園藝黑玫瑰石竹種子。

1.2 方 法

1.2.1 初代培養 選取顆粒飽滿的黑玫瑰石竹種子，清水沖洗清潔，無菌條件下用70%乙醇浸泡30 s后，0.1%HgCl2浸泡7 min，無菌水沖洗4～5次。將表面滅菌后的種子接入初代培養基MS+蔗糖30 g·L-1，光照培養。

1.2.2 繼代培養 黑玫瑰石竹種子經初代培養20～30 d，即可獲得無菌實生苗。將初代培養獲得的實生試管苗剪切為1.5～2 cm莖段，接入不同處理的繼代增殖培養基中。接種后放于培養室中培養，培養條件為：（25±2） ℃、光照強度2 000～3 000 Lx、光照時長14 h·d-1。培養期間定期觀察培養苗的生長狀況，調查記錄試管苗的株高、芽增殖數、生根情況等指標。

（1）外源激素處理。以MS為基本培養基，附加蔗糖30 g·L-1。NAA/6-BA和 NAA/KT 2種激素配比分別設置6個處理：①0.1 mg·L-1/0.5 mg·L-1；②0.1 mg·L-1/1.0 mg·L-1；③0.1 mg·L-1/1.5 mg·L-1；④0.2 mg·L-1/0.5 mg·L-1；⑤0.2 mg·L-1/1.0 mg·L-1；⑥0.2 mg·L-1/1.5 mg·L-1。

（2）碳源處理。采用MS為基本培養基，附加（1）中篩選的適宜激素配比。培養基蔗糖、白砂糖和麥芽糖為碳源，每種碳源設15 g·L-1和30 g·L-12個濃度處理。

（3）大量元素處理。分別采用MS、1/2 MS、1/4 MS和2 MS為基本培養基，附加（1）中篩選的適宜激素配比，蔗糖30 g·L-1。

（4）添加物處理。采用MS為基本培養基，附加（1）中篩選的適宜激素配比，蔗糖30 g·L-1。培養基中添加水解乳蛋白（LH，100 mg·L-1）、谷氨酰胺（Gln，100 mg·L-1）、椰汁（100 ml·L-1）和活性炭（2 g·L-1）共4個處理。

2 結果與分析

2.1 外源激素對叢生芽誘導與增殖的影響

培養基中添加植物生長素和細胞分裂素能促進芽或根的分化。不同的NAA/6-BA濃度比對黑玫瑰石竹的芽增殖及株高影響不同，具體影響結果見表1。

由表1可見，當NAA濃度一定時，隨6-BA濃度的增大，莖長和增殖系數都有升高的趨勢。當NAA 0.1 mg·L-1、6-BA 1.5 mg·L-1時，增殖系數高于其它各個處理，且平均株高最高，但此時由于6-BA濃度過高，部分植株出現玻璃化現象。處理3、5的NAA/6-BA比例均為0.2，其增殖系數相近，但處理5的試管苗莖細弱，不易移栽成活。因此，綜合叢生芽增殖以及植株的生長情況，采用處理2即NAA/6-BA為0.1 mg·L-1/1.0 mg·L-1時，適宜黑玫瑰石竹叢生芽的分化增殖。

不同NAA/KT濃度比對黑玫瑰石竹試管苗芽增殖的影響見表2。