TGF—β/smad蛋白在大鼠高氧肺損傷中的表達及意義

楊軍+廖志勇+巨容

【摘要】 目的 探討TGF-β/smad蛋白在大鼠高氧肺損傷中的表達及意義， 探求高氧肺損傷的原因以及TGF-β/smad蛋白的表達及其作用。方法 60只10 d日齡的大鼠， 隨機分為實驗組和對照組， 實驗組大鼠讓其處于95%氧氣的高氧環境下暴露7 d， 而對照組在正常的空氣環境下暴露7 d， 觀察檢測大鼠的肺情況， TGF-β/smad蛋白， 肺組織LKB1、TGF-β1、psmad2蛋白的表達和分布， 分析蛋白的表達和意義。結果 與對照組比較， 實驗組的肺組織LKB1、TGF-β1、psmad2蛋白下降明顯， 呈高表達， 實驗組肺組織中LKB1與TGF-β1蛋白表達呈正相關（r=0.474， P=0.04）， TGF-β1與psmad2蛋白表達呈正相關（r=0.491， P=0.033） 結論 TGF-β/smad蛋白可以作為判斷高氧的肺損傷的損害程度和判預后的一種重要指標， 并且受到信號分子的調控， 在高氧的情況下， 可影響肺功能的正常情況， 并對肺部產生損傷。

【關鍵詞】 TGF-β/smad蛋白；高氧肺損傷；表達及意義

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.21.200

現階段人們經常有肺損傷的情況，而其中的原因可能由于細胞、細胞因子和炎癥介質構成的調節網絡的失控， 而導致肺內皮細胞肺泡的上皮間質細胞等靶細胞受到影響而不能正常接收信號出現障礙， 而TGF-β/smad蛋白則在其中擔當了很大一部分的效果， 醫療護理的工作者需要盡自己的工作的責任[1]， 發現TGF-β/smad蛋白在大鼠高氧肺損傷中的表達及意義并且能在后續的研究中發現治療方法讓患者盡快康復， 研究蛋白情況與高氧肺損傷關系， 發現新的思路等作出探索， 現報告如下。

1 材料與方法

1. 1 標本來源 選擇60只10 d日齡的大鼠， 隨機分為實驗組和對照組， 各30只。采集大鼠的體重、身長等數據并記錄， 制備高氧肺損傷的模型， 使用一個容量適當的塑料容器， 并且在塑料箱中防治一臺測氧儀， 時刻監控氧氣含量濃度， 當大鼠放入塑料瓶內時， 由于呼吸作用會有二氧化碳產生， 在塑料容器內放入石灰吸附， 并保持塑料箱的溫度與濕度適中。實驗組大鼠體重30.6～42.3 g， 身長21.3～26.3 cm， 對照組體重29.8～40.1 g， 身長20.2～24.8 cm， 兩組大鼠體重、身長等一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 實驗組大鼠稱重、做好標記， 記錄數據之后放置于高氧濃度的容器中連續7 d， 而對照組置于空氣中， 其他環境都不變， 同樣放置7 d， 之后在同一時間對每只大鼠稱重并重新測量身長， 之后處死， 剪開胸腔并觀察， 采用氯胺酮腹腔麻醉， 常規消毒鋪巾， 沿胸骨中線打開胸腔， 剔除結締組織和脂肪組織、氣管支氣管及其他非肺組織成分， 取出大鼠的肺臟肺組織， 完整地取出之后肉眼觀察， 并使用生理鹽水沖洗， 觀察之后在甲醛溶液中固定， 做病理解剖切片， 使用活性酶等物質做標記顯色等， 并做好陰性陽性對照， 采取不用制作的單克隆抗體， 都是相同的品種。采用專業圖像軟件對其進行分析， 并且測定相關值[3]。

1. 3 判定標準 在同一時間， 對于制作成功的每種切片在顯微鏡下依次觀察， 在不同視野下觀察， 陽性的細胞所測得的百分數<5%則判定為為陰性， 5%～20%是弱陽性， 20%～75%是純陽性， 而>75%則判定為強陽性。

1. 4 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

60只大鼠接受實驗測定后， 在與對照組比較， 實驗組的肺組織LKB1、TGF-β1、psmad2蛋白下降明顯， 呈高表達， 并且TGF-β/smad蛋白的含量以及變化情況在高氧肺損傷中有顯著的意義。實驗組肺組織中LKB1與TGF-β1蛋白表達呈正相關（r=0.474， P=0.04）， TGF-β1與psmad2蛋白表達呈正相關（r=0.491， P=0.033）

3 討論

TGF-β/smad蛋白可以作為判斷高氧下肺損傷的損害程度和預后的一種重要指標[4]。實驗測定之后， 發現兩組大鼠在各自環境中生長發育之后， 大鼠的體重和身長都有所減少說明生長滯后， 并且肉眼觀察肺組織發生損害。轉化生長因子（TGF-β） 通路主要由TGF-β配體、Ⅰ型Ⅱ型受體和smad蛋白介導。并且在TGF-β/smad蛋白關系通路之下參加上皮細胞生長過程， 而肺組織的上皮細胞與受體結合之后需要將信號傳送才能繼續進行合成轉錄等， TGF-β通路可促進細胞增殖，并且在一定時候也有抑制的作用， 有時分泌過少則導致細胞過度增殖、增生， LKB1可以調節VEGF的水平導致大鼠通路抑制受到抑制而生長停滯。實驗組肺組織中LKB1與， TGF-β1蛋白表達呈正相關， （r=0.474， P=0.04）， TGF-β1與psmad2蛋白表達呈正相關（r=0.491， P=0.033）， 提示LKB1缺失間質中， TGF-β1分泌降低， SIK可以負向調控TGF通路， 間接指出LKB1與TGF通路的相互關系， 然而LKB1與TGF蛋白相互作用的具體機制仍不明確， 需進行進一步研究。

參考文獻

[1] KatajistoP， VaahtomeriK， EkmanN， et al. LKB1 signaling in mesenchymal cells required for suppression of gastrointestinal polyposis. NatGenet， 2008， 40（4）：455-459.

[2] 雷玲， 鐘小寧. Th17與TGFβ1的關系及在肺纖維化中的作用. 實用醫學雜志， 2013， 29（4）：671-673.

[3] 徐麗娜， 劉倩， 王建海. IL-31與TGF-131在小鼠肺纖維化過程中的表達及關系.菏澤醫學專科學校學報， 2011， 23（4）：1-3.

[4] 李莉， 李燕芹.格列衛對肺纖維化小鼠的干預機制.中國呼吸與危重監護雜志， 2009， 8（4）：365-370.

[收稿日期：2016-03-04]