敗醬草多糖對運動疲勞大鼠的肝組織保護作用

李愛臣，房磊（.吉林化工學院，吉林吉林32022；2.吉林農業科技學院，吉林吉林320）

敗醬草多糖對運動疲勞大鼠的肝組織保護作用

李愛臣1，房磊2，*
（1.吉林化工學院，吉林吉林132022；2.吉林農業科技學院，吉林吉林132101）

研究敗醬草多糖（HPP）對肝臟保護、增強運動力、抗疲勞以及提高疲勞恢復能力。大鼠力竭后，一氧化氮合酶（NOS）活性和NO含量明顯下降，線粒體活性下降，休息后，各生化指標恢復效果差。食用敗醬草多糖大鼠力竭后，同力竭組比較，肝臟抗氧化力、NOS活性以及NO含量、線粒體指標都顯著增大；經過休息，各指標和運動前幾乎相同。食用敗醬草多糖能夠有效地提高一氧化氮合酶活性，可提高NO含量，增強運動能力，延緩疲勞并增強疲勞恢復能力，促進運動后機體功能恢復。

敗醬草多糖；保護肝臟；抗疲勞

敗醬草（Herba Patriniae），又稱澤敗、苦菜等，隸屬于敗醬科多年生草本植物，作為我國重要的中藥材，被廣泛應用，具有解毒的功能[1-3]。有學者研究得出，敗醬草中具有大量的多糖、黃酮等具有生理活性的物質，敗醬草提取物有抗疲勞、抑菌以及抗腫瘤的作用[4-6]。還有學者指出，敗醬草內部含有大量的營養物質，如氨基酸、礦物質等，由此可知，敗醬草不僅作為藥材應用，還可食用。多糖是重要的高分子化合物，活性多糖為有特殊作用的化合物，具有降血糖、降血脂以及抗氧化等多重功能[7-8]。運動醫學提出，進行強度過大的運動后會產生大量的自由基損壞機體，造成機體組織和細胞功能下降[9-10]，引起機體功能發生障礙，線粒體等強度下降，呼吸變慢，從而加速疲勞，使得機體過早地產生疲勞感，如果不清除這些自由基，會導致運動能力降低，影響健康[11-12]。本文主要研究服用敗醬草多糖后對運動機體的影響，測定其對大鼠肝臟組織抗氧化效果，線粒體活性以及一氧化氮酶活性等。進一步分析敗醬草多糖對運動機體的影響，對抗疲勞、抗氧化等效果，為經常運動的機體活動作參考。

1　材料與方法

1.1動物、材料與試劑

健康Wistar雄性大鼠50只，質量為160 g～200 g，取自吉林大學動物中心。敗醬草：安國市健仁藥材有限公司；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）試劑盒、巰基（mercapto group，-SH）試劑盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒、一氧化氮合酶（nitricoxide synthase，NOS）試劑盒、一氧化氮（nitric oxide，NO）試劑盒、Na+/K+-ATPase試劑盒、Ca2+/Mg2+-ATPase試劑盒：南京建成生物工程研究所。

1.2儀器與設備

RE-2002旋轉蒸發儀：上海圣科儀器有限公司；722N型分光光度計：上海上天精密儀器有限公司；80-1型離心機：金壇市三和儀器有限公司；GM-33A型真空抽濾泵：廈門森態儀器儀表有限公司；TL96-2型超聲波粉碎機：江蘇天翎儀器有限公司；HH-4型恒溫水浴鍋：常州市鴻科儀器廠。

1.3方法

1.3.1HPP的制備

取一定量的洗凈烘干后的敗醬草皮，進行粉碎，再加入95%的乙醇浸泡20 min，對濾渣進行水提，2 h，提取溫度為80℃，過濾后，采用Sevag法除蛋白質，進行透析24 h，用丙酮進行洗滌，冷凍干燥后得HPP。

1.3.2動物分組

Wistar雄性大鼠正常飼養。將大鼠隨機分成5組，每組10只：運動模型組（A組）、力竭組（B組）、運動后休息組（C組）、HPP力竭組（D組）、HPP運動后休息組（E組）。HPP組每天灌胃多糖水溶液100 mg/（kg·d），采用高效液相色譜對HPP進行組成分析，得出HPP是一種含蛋白質的多糖，蛋白質含量為13.26%，單糖主要由D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖組成，其物質的量比0.53∶0.35∶3.18∶1∶2.72∶1.27；A、B、C組分別灌胃生理鹽水，持續30 d，末次灌胃30 min后進行測定相應指標。

1.3.3運動模型的建立

保持全部大鼠同時進行30 d的跑臺運動訓練，運動方案應用Bedford等[15]的跑臺運動訓練模型，見表1。

表1　大鼠運動方案Table 1　Exercise protocols of experimentalrats

持續運動30 d，每天運動時以15 m/min的速率做5 min左右的適應性運動后正式運動。取規定量的HPP于生理鹽水中混勻，于每天運動后進行灌胃，劑量為2 mL。D、E組灌胃HPP，A、B、C 3組灌胃等量生理鹽水。在第30 d時，A組不運動，安靜時處死，作為持續運動的對照組；B、D組大鼠運動至力竭，并立即處死；C、E組大鼠運動至力竭后休息24 h后處死[13-15]。

1.3.4取材及樣品制備

大鼠在處理前需要禁食10 h，處理后應及時地進行指標檢測，包括肝臟線粒體以及漿液的制取。大鼠斷頭處死后，及時取出肝臟，用冷卻的液體（含250 mmol/L蔗糖、1 mmol/L EDTA、10 mmol/L Tris-HCl （pH 7.5））洗凈血液，除去多余部分，用濾紙吸去表面水分，取肝組織于燒杯中，將其剪碎，制作成肝勻漿，4℃、2 000 r/min離心15 min，去除沉淀，繼續將上清液以10 000 r/min的速度繼續離心15 min，本次沉淀即是肝臟線粒體。利用超聲波將肝臟線粒體破碎，備用。1.3.5指標測定方法

力竭時間測定：B、C、D、E組大鼠按照最后5 d強度運動至力竭，記錄力竭需要時間。大鼠運動力竭判斷標準：運動時大鼠不能達到規定速度，臀部置于籠體后壁，后肢體隨皮帶自然轉到達到30 s，采用相應刺激手段進行驅趕沒有效果，即可判斷為力竭。具體表現為呼吸加速、精神困倦、低頭、刺激后不動。-SH、MDA、NO含量及SOD、GSH-Px、NOS、Na+/K+-ATPase、Ca2+/Mg2+-ATPase活力等指標測定均嚴格按照試劑盒說明書方法進行。

1.4數據處理

數據用SPSS 16.0軟件進行數據分析，組間比較采用t檢驗，試驗數據用x±s表示。

2　結果與分析

2.1敗醬草多糖對大鼠力竭和休息24 h后肝組織抗氧化能力的影響

敗醬草多糖對大鼠力竭和休息24 h后肝組織抗氧化能力的影響見表2。

SOD及GSH-Px作為非常重要的兩大抗氧化酶類，能夠去除自由基等。-SH能夠保證體內基本功能，能夠防止自由基對機體的傷害。MDA量的大小能夠表示體內氧化程度。根據表2能夠得出，運動力竭后，B組動物肝臟中GSH-Px活力、SOD和-SH含量明顯比A組低（P＜0.05），MDA值要比A組高（P＜0.05）。C組動物肝臟中GSH-Px活力、SOD和-SH含量要比A組低（P＜0.05），MDA含量比A組高（P＜0.05）。通過D組動物實驗能夠看出，與B組相比，有明顯恢復，但相應指標要比對照組差，E組動物肝臟GSH-Px活力、SOD 和-SH含量要比B、C組高（P＜0.05），MDA含量比B、C、D組低（P＜0.05）。故根據實驗結果可知，敗醬草多糖能夠緩解運動造成的過氧化，并能加快運動傷害后的恢復。

表2　各組大鼠肝組織抗氧化能力的比較（x±s，n＝10）Table 2　Comparison ofantioxidant capacity of rats liver tissues in each group（x±s，n=10）

2.2敗醬草多糖對耐力訓練大鼠肝組織NO-NOS體系和肝線粒體ATPase活性的影響

敗醬草多糖對耐力訓練大鼠肝組織NO-NOS體系和肝線粒體ATPase活性的影響見表3。

表3　各組大鼠肝組織NO-NOS和肝線粒體ATPase活性的比較（x±s，n＝10）Table 3　Comparison of NO-NOS ofrats liver tissue and ATPase activity ofrats liver mitochondria in each group（x±s，n=10）

NO能夠增強血管的舒張力，改良體內組織循環和代謝，能夠增強代謝物質的運輸能力。根據表3能夠得出，運動大鼠力竭后，肝臟NOS活力及NO含量、肝線粒體Na+/K+-ATPase、Ca2+/Mg2+-ATPase活力明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）；休息24 h，肝臟中NOS活力及NO含量、肝線粒體Na+/K+-ATPase、Ca2+/Mg2+-ATPase活力加強，但沒有達到最佳狀態（P＜0.05）。食用敗醬草多糖大鼠運動力竭后，肝臟中NOS活力及NO含量、線粒體Na+/K+-ATPase、Ca2+/Mg2+-ATPase活力要比A組低（P＜0.05），比B組高（P＜0.05）；休息24 h后，肝臟中NOS活力、NO含量和線粒體指標幾乎與A組相當，和B組相比要升高（P＜0.01），和C、D組相比顯著升高（P＜0.05）。根據結果可知，食用敗醬草多糖能夠促進體內代謝物質的平衡，促進生理性恢復。防止自由基對肝臟細胞的作用。

2.3敗醬草多糖對耐力訓練大鼠跑臺運動力竭時間的影響

敗醬草多糖對耐力訓練大鼠跑臺運動力竭時間的影響見表4。

根據表4能夠得出，多糖力竭組（D）食用敗醬草多糖大鼠力竭時間明顯比運動力竭組（B）要長，而且時間上延長22.52%，具有統計學意義（P＜0.05）。根據實驗可知，給大鼠服用多糖后起到了很大的作用，力竭時間顯著延長，故敗醬草多糖能夠延緩運動疲勞，能夠延長運動時間。

表4　大鼠運動力竭時間比較（x±s，n＝10）Table 4　Comparison ofexhaustive exercise time（x±s，n=10）

3　結論

根據試驗結果，大鼠食用敗醬草多糖后，GSH-Px活力、SOD和-SH含量要比普通組高（P＜0.05），MDA含量比普通組低（P＜0.05）。故根據實驗結果可知，敗醬草多糖能夠緩解運動造成的過氧化，并能加快運動傷害后的恢復。肝臟中NOS活力及NO含量、線粒體活力要比A組低（P＜0.05），比B組高（P＜0.05）；休息24 h后，肝臟中NOS活力、NO含量和線粒體指標幾乎與A組相當，和B組相比要升高（P＜0.01），和C、D組相比顯著升高（P＜0.05），食用敗醬草多糖能夠促進體內代謝物質的平衡，促進生理性恢復。防止自由基對肝臟細胞的作用。多糖力竭組（D）食用敗醬草多糖大鼠運動后力竭時間明顯比運動力竭組（B）要長，而且時間上延長22.52%，根據實驗可知，給大鼠服用多糖后對肝組織起到了較顯著的保護作用，力竭時間顯著延長，同時敗醬草多糖能夠延緩運動疲勞，能夠延長運動時間。

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The Protective Effect of Herba Patriniae Polysaccharide on Fatigue Rats Liver Tissue

LIAi-chen1，FANG Lei2，*
（1.Jilin Institute of Chemical Technology，Jilin 132022，Jilin，China；2.Jilin Agriculture Science and Technology College，Jilin 132101，Jilin，China）

Liver protection，enhancementofmoving force，anti-fatigue and improving the fatigue recovery capability of Herba patriniae polysaccharide（HPP）were researched.After exhaustion，the activity ofnitric oxide synthase（NOS）and the contentofNO decreased obviously，and the activity ofmitochondria decreased，and all the biochemical parameters were poor recovery after rest.Compared with the exhausted group，the antioxidant capacity of liver，the content of NO，and the mitochondria index increased significantly after eating HPP.And after a break，all the indicators were nearly the same as before exercise.Eating HPP could effectively increase the activity of NOS as well as the content of NO，enhance exercise ability，delay fatigue，improve fatigue resilience，and promote body's functionalrecovery after doing exercise.

Herba patriniae polysaccharide；liver protection；anti-fatigue

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.12.041

李愛臣（1983—），男（漢），講師，碩士，研究方向：運動營養保健。

房磊（1983—）男，講師，碩士，研究方向：運動產品開發。

2016-03-28