正交試驗優選強心顆粒提取工藝

徐　勇

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正交試驗優選強心顆粒提取工藝

徐勇

目的優選我院制劑強心顆粒的提取工藝。方法以加水量、煎煮時間和提取次數為考察因素，丹酚酸B含量及干膏率為試驗指標，采用L9(34)正交試驗優選強心顆粒提取工藝。結果強心顆粒最佳提取工藝為8倍水，煎煮1小時，提取2次。結論該研究為強心顆粒劑型改革和制劑工藝研究提供實驗依據。

正交試驗；強心顆粒；提取工藝；丹酚酸B

強心顆粒是我院研制的純中藥制劑，該制劑由黃芪、丹參、太子參、茯苓、白術、葶藶子、麥冬、紅花等8味中藥組成，具有益氣養陰、活血通絡之功效，用于氣陰兩虛、瘀血阻絡所致的胸痹，癥見胸悶隱痛，時作時止，心悸氣短，倦怠懶言，面色少華，頭暈目眩，遇勞則甚，冠心病、肺心病、擴展性心肌病見上述證候者。原方以湯劑用于臨床多年，療效確切。但湯劑煎煮、攜帶、使用均不方便，口感亦不佳。因此，為方便患者，我院考慮更改劑型，根據本方的功能主治，在保持原有療效的前提下，結合劑型三效、三小、五方便的原則，同時考慮到穩定性及對藥物的容納量大、制劑工藝工業化程度等因素，最終確定該劑型為顆粒劑[1，2]。顆粒劑是目前最為常用的固體劑型之一，其既保持了湯劑吸收快、作用迅速的優點，又克服了湯劑煎煮、攜帶不便，易霉敗變質等缺點，受到廣大患者的歡迎[3]。為了保證臨床用藥的質量與療效，須對其制備工藝進行研究。文獻顯示[4，5]，水煎提取工藝中加水量、提取次數、提取時間等因素直接影響浸出物及有效成分的溶出。為優選水煎提取工藝，以加水量、提取次數、提取時間3 個影響因素為考察因素，丹酚酸B含量及干膏率為試驗指標，按正交試驗法優選最佳提取工藝，為強心顆粒的制備有效性提供實驗依據。以期為強心顆粒的開發和應用奠定基礎。

1　儀器與試藥

1.1儀器日本島津LC-10AD高效液相色譜儀，SPD-10Avp紫外-可見檢測器，Anastar工作站，AUW220D型島津分析天平。

1.2試劑丹酚酸B(中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：111810-201304；中藥材均由河北祁奧中藥飲片有限公司提供，經本溪市藥檢所鑒定，符合《中華人民共和國藥典》2010年版一部項下規定[6]。甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水。其他化學試劑均為分析純。

2　工藝設計

根據處方中所含8味中藥材的成分分析[7]，均可用水提法提取有效成分，用正交試驗對提取工藝進行優選。

2.1正交試驗設計考慮水提取工藝的主要影響因素，選擇加水量(A)、煎煮次數(B)、煎煮時間(C)為考察因素，按L9(34)正交試驗表進行試驗，以丹酚酸B含量及干膏率為試驗指標，因素與水平見表1。

表1　提取工藝的因素水平表

2.2樣品制備按處方比例稱取9份處方中各藥味，每份樣品按正交表安排的條件進行煎煮，合并煎煮液，濃縮，定容至200ml，備用。

2.3丹酚酸B含量測定

2.3.1色譜條件與系統適用性試驗色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充刻;流動相:甲酸-水(1∶59)與甲醇、乙腈的比例為64∶27∶9;流速1.0ml/min;檢測波長:286nm;柱溫:25℃;理論塔板數按丹酚酸B計算應不低于2000。主峰與其他物質峰的分離度應符合規定。

2.3.2對照品溶液的制備取丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加75%甲醇制成每1ml含0.190mg的溶液，即得。

2.3.3供試品的制備精密量取上述2.2中煎煮液10mL, 加水30ml稀釋，置分液漏斗中，用乙酸乙酯振搖提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，殘渣加適量75%甲醇使溶解，微孔濾膜濾過，濾液定容至10ml，作為供試品溶液。

2.3.4標準曲線的制備分別精密量取丹酚酸B對照品溶液(C=0.190mg/ml)2，4，6，8，10μL，按上述色譜條件進樣測定峰面積，以丹酚酸B峰面積積分值為縱坐標(y),進樣量(μg)為橫坐標(x),進行線性回歸，得同歸方程y=109580x+31130，r=0.9995。結果表明，丹酚酸B在0.380-1.900μg范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.3.5穩定性試驗精密吸取同一供試品溶液2μl,于0、2、4、6、8h分別進樣,測定峰面積,測得的峰面積RSD值為1.92%,試驗結果表明,樣品供試液在8小時內穩定性良好。

2.3.6精密度試驗精密吸取同一供試品溶液2 ul,連續進樣6次,測定其峰面積,計算其RSD為0.96+%(n=6),表明儀器精密度良好。

2.4干膏率的測定精密量取上述2.2中煎煮液25mL，置干燥恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，于105℃干燥箱中干燥3小時，取出，置干燥器內冷卻30分鐘，取出，迅速精密稱定重量，計算干膏率。[干膏率=干膏重(g)/藥材總重(g)×100%]

2.5正交實驗結果與分析根據經驗知道，丹酚酸B含量比出膏率更重要，因此，兩個指標的權重系數分別取為ω1=0.6和ω2=0.4。為使各指標單位統一，把試驗結果的每項指標中最好的指標定為60分和40分，綜合評分為100分。在統一標準下加權評分為：干膏率：y1=(y1÷32.12×100)×0.4，丹酚酸B含量：y2=(y2÷6.98×100)×0.6，綜合評分：y= y1+y2，正交試驗結果見表2。

表2　正交實驗結果

以綜合評分值為指標，對結果進行方差分析，列出方差分析表，見表3。

表3　方差分析表　 F0.05(2,2)=99,F0.01(2,2)=19

由實驗結果看7號(A3B1C3)最好，即10倍水，煎煮1小時，提取3次。直觀分析中，最優組合為A3B3C2，即10倍水，煎煮2小時，提取2次。方差分析表明，因素C對實驗結果有顯著影響(P>0.05)，結合直觀分析選擇C2；因素A、B均為不顯著因素，可根據實際生產情況確定加水量和煎煮時間。直觀分析中，A因素最優應選A3，但A因素無顯著影響，A2與A3差別又較小，考慮到實際生產中加水10倍量，后期濃縮及受熱時間較長，為省時節能，選擇A2較好；同樣，B因素無顯著影響，B1、B2與B3的試驗結果相差不大，由實驗結果看A3B1C3最好，選B1為好，從生產實際出發考慮，煎煮時間越長能耗越大且易煎出更多雜質，給后期分離帶來困難，選B1較為合適，故B1為優選。因此最佳工藝為A2B1C2，即8倍水，煎煮1小時，提取2次。

2.6工藝驗證試驗按處方比例稱取各藥材，共3份，按優選的最佳工藝分別進行提取，按“2.3”“2.4”項下方法測定提取液中丹酚酸B含量和干膏率。該驗證試驗結果理想，表明優選工藝合理、可行，可用于強心顆粒提取。結果見表4。

表4　驗證試驗結果

3　討論

提取工藝是制劑生產過程中最重要的環節之一，對于中藥質量、療效有著舉足輕重的影響。眾所周知，中藥多組分多靶點的整體調節效應，使得中藥具有廣泛的藥理活性。為保證中藥產品的質量穩定，療效可靠，必須對中藥提取進行研究，建立的標準化提取過程。

本工藝的篩選指標確定為2個。丹參系方中君藥，丹參的主要活性成分丹酚酸B在心血管疾病的治療方面有著較強的藥理活性，其為水溶性成分。本方采用傳統的水煎煮法提取藥材，因此，選擇以丹酚酸B含量作為提取工藝主要的評價指標進行綜合評價。而干浸膏是藥物治療疾病的物質基礎，故也應作為檢測指標[8]。本試驗以多指標控制和評價中藥制劑質量，使試驗結果更科學、合理、全面，獲得的提取工藝更適合實際生產條件并且操作簡單、穩定可行。

[1]楊璐,王亮,李福杏，等.“加味白頭翁”顆粒劑的制備及穩定性考察[J].中國畜牧獸醫,2012，39(10):238-241.

[2]羅文蓉,楊扶德,金智生.糖脂平顆粒的制備工藝優選[J].中國實驗方劑學雜志,2013,19(23):11-14.

[3]李穎.栝樓桂枝解痙顆粒的制備工藝研究[J].中國民族民間醫藥,2013,22(23):17-18.

[4]張銘,馬麗穎,孟舒.止骨顆粒提取工藝研究[J].遼寧中醫藥大學學報,2010,12(7)：180-181.

[5]劉雪飛.婦樂寧顆粒提取工藝的研究[J].陜西中醫，2006,27(4):487 -488.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(1)[M].北京:化學工業出版社,2010：70.

[7]肖慶祥，江紀武.植物藥有效成分手冊[M].北京:人民衛生出版社,1986：303.

[8]彭凱麗,李新民,李元林,等.正交試驗優選復方桑菊口服液中藥材的提取工藝[J].中國藥房,2014,25(3):243-245.

Optimization of Extraction Technology of Qiangxin Granules by Orthogonal Experiment

XU Yong

(Department of Pharmacy, Benxi Hospital of Traditional Chinese Medicine, Liaoning, Benxi 117000, China)

ObjectiveTo study the abstraction procedure of Qiangxin granules. MethodsThe optional extraction process was selected for the yields of extracts & salvianolic acid B by using L9 (34) orthogonal design. The effects of water addition, duration of decoction and times of extraction were observed. ResultsThe optimal extraction process was determined by 8 times water addition, reflux extracting 2 times, decoction 1 hour. ConclusionThe study provided experimental basis for dosage reform and pharmaceutical technology of Qiangxin granules.

Orthogonal experiment; Qiangxin granules; Extraction technology; Salvianolic acid B

遼寧省本溪市中醫院藥劑科(本溪 117000)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.16.020

1003-8914(2016)-16-2343-03

(本文校對：張葉2015-12-30)