不同卵巢腫瘤組織中KI-67、P53、C23、EGFR蛋白的表達變化及其意義

張玨，蔡鴻寧，高晗，鄒苗，吳緒峰

(湖北省婦幼保健院，武漢430070)

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不同卵巢腫瘤組織中KI-67、P53、C23、EGFR蛋白的表達變化及其意義

張玨，蔡鴻寧，高晗，鄒苗，吳緒峰

(湖北省婦幼保健院，武漢430070)

目的觀察不同卵巢腫瘤組織中Ki-67核抗原(Ki-67)、野生型P53抑癌基因(P53)、核仁蛋白(C23)、血管內皮生長因子受體(EGFR)蛋白的表達變化，并探討其意義。方法 行手術治療的卵巢腫瘤患者139例，其中卵巢良性腫瘤46例、卵巢交界性腫瘤35例、卵巢癌58例，術中留取腫瘤組織及正常卵巢組織，采用免疫組化法檢測Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白。結果正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織、卵巢交界性腫瘤組織、卵巢癌組織中Ki-67蛋白陽性表達率分別為0、11.1%、74.5%、88.5%，P53蛋白陽性表達率分別為0、2.2%、28.6%、72.4%，C23蛋白陽性表達率分別為6.7%、19.6%、71.4%、91.4%，EGFR蛋白陽性表達率分別為43.3%、60.9%、88.6%、94.8%，不同卵巢腫瘤組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白陽性表達率高于正常卵巢組織(P均<0.05)；卵巢癌組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白陽性表達率高于卵巢良性腫瘤組織和卵巢交界性腫瘤組織(P均<0.05)；卵巢交界性腫瘤組織中P53蛋白陽性表達率高于卵巢良性腫瘤組織(P<0.05)。卵巢癌組織中P53與C23、P53與EGFR、Ki-67與C23、Ki-67與EGFR表達均呈正相關關系(r分別為0.220、0.195、0.231、0.217，P均<0.05)。結論 Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織、卵巢交界性腫瘤組織、卵巢癌組織中表達逐漸增高，Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白的異常表達可能參與了卵巢癌的發病。

卵巢腫瘤；卵巢癌；核仁蛋白；野生型P53抑癌基因；血管內皮生長因子受體；Ki-67核抗原

卵巢癌起病隱匿，70%的患者確診時已屬晚期，5年生存率僅為10%[1]。盡管經過多年研究，卵巢癌基因靶向治療呈現出較好前景，但卵巢癌的高度異質性給治療造成困難，影響效果[2,3]。目前關于Ki-67核抗原(Ki-67)、野生型P53抑癌基因(P53)、核仁蛋白(C23)、血管內皮生長因子受體(EGFR)與卵巢癌關系的研究較多[4～6]，但結論不盡相同，對于四項指標聯合檢測也少有報道。為此，本研究觀察了不同卵巢腫瘤組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白的表達變化，探討四種蛋白在卵巢癌發生發展中的作用及其機制，現報告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料2012年1月～2014年12月在湖北省婦幼保健院行手術治療的卵巢腫瘤患者139例，年齡17～72歲、中位年齡46歲，其中卵巢良性腫瘤46例、卵巢交界性瘤35例、卵巢癌58例。所有病例均經術后病理檢查證實。另取同期行卵巢切除且經病理檢查證實無卵巢惡性腫瘤患者的正常卵巢組織30例份作為對照，患者一般情況良好，無術后并發癥。

1.2Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白檢測采用免疫組化Elivision二步法。濃縮型Ki-67、P53、C23、EGFR兔抗人單克隆抗體購自Sigma公司，Elivision super試劑盒及DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術公司。染色操作步驟按試劑盒說明書進行。Ki-67抗體稀釋度為1∶200，P53抗體稀釋度為1∶200，C23抗體稀釋度為1∶100，EGFR抗體稀釋度為1∶200。用已知陽性切片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。EGFR定位于細胞膜或細胞質，Ki-67、P53、C23定位于細胞核，以細胞出現黃色或棕黃色顆粒為蛋白表達陽性，計算陽性細胞百分比，陽性細胞百分比≤10%為陰性、>10%為陽性。

1.3統計學方法采用SPSS19.0統計軟件進行統計學分析。計數資料比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman等級相關分析法。P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1不同卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白表達變化不同卵巢腫瘤組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白陽性表達率高于正常卵巢組織(P均<0.05)；卵巢癌組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白陽性表達率高于卵巢良性腫瘤組織和卵巢交界性腫瘤組織(P均<0.05)；卵巢交界性腫瘤組織中P53蛋白陽性表達率高于卵巢良性腫瘤組織(P<0.05)。詳見表1。

表1　不同卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白表達比較

注：與正常卵巢組織相比，*P<0.05；與卵巢癌組織相比，#P<0.05；與卵巢良性腫瘤組織相比，ΔP<0.05。

2.2卵巢癌組織中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白表達的相關性卵巢癌組織中，P53、C23蛋白同時陽性表達率為72.4%，P53、EGFR蛋白同時陽性表達率為74.1%，Ki-67、C23蛋白同時陽性表達率為92.2%，Ki-67、EGFR蛋白同時陽性表達率為94.0%。卵巢癌組織中P53與C23、P53與EGFR、Ki-67與C23、Ki-67與EGFR表達均呈正相關關系(r分別為0.220、0.195、0.231、0.217，P均<0.05)。

3　討論

腫瘤發病是細胞發生惡性轉化的結果，在這一過程中有多種基因出現異常表達，包括多個癌基因激活和(或)抑癌基因失活。卵巢癌的發生發展過程中也有多個癌基因和抑癌基因異常表達，但其具體發生機制尚未完全闡明。

P53基因是迄今為止發現的與人類腫瘤相關性最高的抑癌基因，因基因產物定位于細胞核，是一種細胞周期相關蛋白[7,8]。P53蛋白分為野生型和突變型兩種，野生型在正常細胞中呈低水平表達，突變型在腫瘤細胞中常高表達。P53蛋白異常表達與腫瘤細胞轉化、增殖及腫瘤細胞惡性表型有關[9,10]。本研究中，卵巢腫瘤惡性程度越高，P53蛋白陽性表達率越高，提示P53異常表達可能參與了卵巢癌的發病。

Ki-67是一種與細胞周期相關的核增殖標志基因，Ki-67表達水平對評價細胞增殖狀態、研究腫瘤生物學行為有重要意義，Ki-67是判斷腫瘤預后的可靠指標之一[11]。本研究結果顯示，卵巢癌組織中Ki-67蛋白陽性表達率高于卵巢良性腫瘤組織和卵巢交界性腫瘤組織，提示在卵巢腫瘤發生及進展過程中，Ki-67表達增高，細胞增殖活性逐漸增強。

已有研究證實，C23在惡性腫瘤的發生發展中起重要作用，其在腫瘤細胞及其他快速分裂的細胞中表達增高，而在非分裂細胞或分裂慢的細胞中低表達，因此，C23常被用來評估腫瘤細胞增殖程度，與腫瘤的生物學行為密切相關[12～14]。本研究中，C23蛋白在卵巢癌組織中的陽性表達率高于正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織和卵巢交界性腫瘤組織，與相關研究結果一致；且我們還發現C23、EGFR蛋白的表達呈現協同上升趨勢，推測C23參與了腫瘤新生血管的形成及其調控[14]。

EGFR是一種具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，參與信號轉導、細胞周期調控。正常情況下EGFR表達水平較低，但在病理狀態尤其是惡性腫瘤組織中過表達[15]。本研究結果顯示，EGFR陽性表達率隨著卵巢腫瘤級別的升高而增高，提示EGFR異常表達與卵巢腫瘤的發生發展有密切聯系。文獻[16]報道EGFR與配體結合可誘導G0/G1期細胞進入DNA合成期，促使受體激活，可導致細胞無自主性增殖。EGFR高表達對卵巢癌的增殖及浸潤有促進作用，可作為評估卵巢癌細胞增殖活性及患者預后的參考指標。

本研究分析了卵巢癌組織中P53、Ki-67、C23、EGFR蛋白表達的相關性，結果發現四項指標中兩兩表達均呈正相關關系。EGFR為細胞信號轉導通路的上游因子，推測EGFR與C23具有協同作用[17]；EGFR的過表達可能先于Ki-67，并對Ki-67的表達有正向調節作用[18,19]，且EGFR信號轉導途徑所激活的下游轉錄因子可能誘導Ki-67的過表達；Ki-67可激活細胞有絲分裂，使當P53基因發生突變時可改變其他DNA結合能力，從而削弱Ki-67等細胞增殖相關基因表達抑制，使細胞過度增殖。我們推測，卵巢癌的發生發展可能需要兩種甚至更多癌基因和相關蛋白的協同作用，這些協同作用的機制及對卵巢癌生物學行為的影響尚有待深入研究。

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2013年武漢市中青年醫學骨干人才培養項目(2014-47)。

吳緒峰(E-mail: zwuxufeng@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.21.024

R737.31

B

1002-266X(2016)21-0067-03

2015-12-28)