白術多糖對H22肝癌小鼠抗腫瘤作用實驗研究

周 劍，蘇德春，宋國權

(牡丹江醫學院紅旗醫院 普外二科，黑龍江 牡丹江 157011)

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白術多糖對H22肝癌小鼠抗腫瘤作用實驗研究

周 劍，蘇德春，宋國權

(牡丹江醫學院紅旗醫院 普外二科，黑龍江 牡丹江 157011)

目的：探討白術多糖對H22肝癌小鼠相關因子的影響，分析其抗腫瘤機制。方法：觀察白術多糖不同給藥劑量對H22肝癌小鼠模型血清中VEGF、 IL-2含量和瘤組織中p21和Bcl-2表達變化的影響，并計算抑瘤率。結果：白術多糖對H22肝癌小鼠腫瘤抑制效果以中劑量為佳，可減少血清中VEGF含量，增加IL-2含量，同時下調Bcl-2基因表達，而上調p21基因表達。結論：白術多糖對H22肝癌小鼠的腫瘤有較明顯的抑制作用，可能是通過增強機體免疫功能而實現。

肝癌；白術多糖；IL-2；VEGF；Bcl-2；p21

中藥白術為菊科類植物，藥用部位為干燥根莖，主要產于浙江、湖北、湖南等地。白術性苦，甘，溫，歸脾，有和中、止汗的功效[1]。白術的有效化學成分十分復雜，包括脂類、糖類等。白術多糖是從白術根莖中提取出的多糖類，其主要成分為甘露聚糖、果聚糖及白術揮發油等。其中，免疫活性多糖類的藥用報道較為多見，其具有抑制腫瘤生長、激活免疫細胞、改善機體免疫功能，并且對免疫器官和固有免疫功能都有積極的促進作用[2]。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

昆明小鼠50只,雌雄各半,體重18～22g,由黑龍江中醫藥大學實驗動物飼養中心提供。將其分為5組,每組10只,即空白對照組，白術多糖高、中、低劑量組，豬苓多糖組。

1.2 試劑

白術多糖粗制晶體藥品、H22肝癌細胞株由哈爾濱醫科大學購進；IL-2、VEGF、Bcl-2、p21測定試劑盒購自西安瑞安試劑有限公司。

1.3 主要儀器

電子天平、電熱恒溫水浴鍋(成都臺盟儀器廠)；微量移液器(上海優博器械廠)；MNT5-WS型臺式低速離心機、全自動酶標儀-ER-7078A酶標儀、PCR擴增儀(成都儀器廠制造)。

1.4 造模及給藥方法

將H22肝癌細胞按照一定比例配比,每只小鼠右腋部皮下接種0.25mL。接種24h后,分別腹腔注射給藥白術多糖高(200mg/kg)、中(100mg/kg)、低(50mg/kg)劑量組,陽性組給藥豬苓多糖100mg/kg,空白對照組給予相同體積的生理鹽水,連續給藥15天，停藥次日處死。

1.5 指標檢測

ELISA法測血清中VEGF、IL-2含量；免疫組化法測瘤組織中Bcl-2基因表達情況、RT-PCR法測瘤組織中p21基因表達；并且計算抑瘤率。抑瘤率=(對照組平均瘤重-治療組平均瘤重)/對照組平均瘤重×100%。

1.6 數據處理

2 結果

2.1 白術多糖對小鼠血清中IL-2、VEGF及瘤組織Bcl-2、p21基因表達的影響

經不同劑量給藥后，白術多糖中劑量小鼠血清中IL-2水平顯著上升，VEGF水平明顯降低；瘤組織Bcl-2基因表達上調、p21基因表達顯著下調，與豬苓多糖組比較，差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

2.2 白術多糖對H22肝癌小鼠瘤重的影響

檢測H22肝癌小鼠瘤重可得，白術多糖中劑量抑瘤效果最好，其抑瘤率達28.36%，與豬苓多糖組比較，差異有統計學意義(P<0.01)。見表2。

表1 白術多糖對小鼠血清中IL-2、VEGF及瘤組織Bcl-2、p21基因表達的影響

組別例數(n)劑量(mg/kg·d)IL-2(μg/mL)VEGF(μg/mL)p21/β-actinBcl-2(平均積分)空白對照組109.15±0.174.51±0.0117.26±2.238.32±0.43豬苓多糖組1010011.14±0.532.34±0.2226.16±2.363.69±0.42白術多糖低劑量組105010.31±0.28**2.24±0.25**21.34±1.68**3.05±0.28**白術多糖中劑量組1010011.78±0.75**2.14±0.39**26.51±2.28**3.13±0.78**白術多糖高劑量組1020010.56±0.57**2.59±0.38**23.55±3.16**3.59±0.48**

注：與豬苓多糖組比較，*P<0.05，**P<0.01。

表2 白術多糖對H22肝癌小鼠瘤重的影響 ±s)

注：與豬苓多糖組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3 討論

隨著社會的發展和時代的進步，人民的生活水平不斷提升，加之大氣、環境污染和電離輻射及食物各種添加劑的使用，使得普通人群中腫瘤的發生率不斷提高。其中最常見的為胃癌、肝癌、肺癌、消化道腫瘤等。臨床最直接且最有效的治療方法為手術切除和大面積清掃淋巴結等，對患者帶來了極大的創傷，且治療效果并不明顯，存活率不過數月或者幾年。因此，各國學者始終在尋找一種能夠有效遏制腫瘤生長和轉移的高效藥物[3]。

本項研究在祖國傳統醫學寶庫資料的基礎上建立，白術多糖為白術根莖的重要提取物，有資料記載其有抗氧化、抗自由基、提高對缺氧耐受度及控制機體細胞過度生長等作用。同時在細胞信號傳導和細胞凋亡的調節中也有十分重要的作用，并且可以提高固有免疫細胞的功能，如NK細胞、NKT細胞、B1細胞、肥大細胞、嗜堿性粒細胞等[4]。另外，其不僅能夠提高機體的體液免疫水平，還可提高小鼠淋巴細胞對ConA的反應性及小鼠學習記憶和抗氧化作用。

實驗數據明確顯示，不同給藥劑量的白術多糖相對于空白組腫瘤的重量都有不同程度的減輕，并且抑制腫瘤生長的效果較好。白術多糖的高、中、低劑量組與豬苓多糖組相對比，可以發現其能夠提高血清中IL-2含量達到提高機體免疫力效果，進而消滅腫瘤細胞；同時減少VEGF含量水平，減少了腫瘤的生長營養和抑制其轉移效果；并抑制促凋亡蛋白Bcl-2的表達，且上調p21基因表達，控制細胞周期殺死腫瘤細胞[5]。因此，希望本研究的進一步推進，為開發新型抗癌藥物提供理論依據。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010:95.

[2] 黃利，李利民，唐麗燕暢白術水煎劑對小鼠免疫功能的影響[J].中藥藥理與臨床，2012,28(1):114.

[3] 孫文平，李發勝，侯殿東，等.當歸、白術、制白附子多糖對小鼠免疫調節作用的影響[J].中國中醫藥信息雜志，2008,15(7):37.

[4] 金伯泉.醫學免疫學[M].北京：人民衛生出版社，2011.

[5] Kamb A,Gruis NA.Weaver-Feldhaus J,et al.A cell regulator potentiallyinvolved in genseis of many tumor types[J].Science,1994,264:436-440.

(責任編輯：魏 曉)

2015-04-21

周劍(1984-)，男，黑龍江省牡丹江醫學院紅旗醫院醫師，研究方向為直腸腫瘤的臨床治療。

R285.5

A

1673-2197(2015)17-0009-01

10.11954/ytctyy.201517004