微小RNA在宮頸癌的早期篩查中的應用及預后價值研究

蘭艷麗　權效珍

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微小RNA在宮頸癌的早期篩查中的應用及預后價值研究

蘭艷麗權效珍

目的研究微小RNA在宮頸癌的早期篩查中的應用及預后價值。方法采用實時定量PCR(定量PCR)測定宮頸癌腫瘤組織中miRNA的表達水平(miR-21，miR-27a，miR-34a，miR-155，miR-196a，miR-203)。結果miR-27a在宮頸上皮內瘤變(CIN2-3)中的表達水平顯著高于CIN1(P=0.023)，而在鱗狀細胞癌(SCC)中的表達水平高于CIN2-3(P=0.033)。此外，miR-34a在CIN2-3中的表達水平顯著低于CIN1(P=0.041)，在SCC中的表達水平低于CIN2-3(P=0.021)。與CIN1比較，CIN2-3的miR-27a表達水平上調(P=0.028)而miR-34a表達水平下調，HPV16陽性與宮頸癌顯著相關(CIN2-3/CIN1：P=0.027；SCC/ CIN2-3：P=0.036)。miR-34a的表達水平與吸煙狀況和HPV16相關。結論檢測miRNA表達水平有助于評估不同宮頸癌變和預測HPV感染結果。

宮頸上皮內瘤；子宮頸癌；微RNA的表達；HPV感染

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:883～885)

基于最新的全世界癌癥統計數據，宮頸癌為女性第三大常見癌癥，每年新增病例約53萬，死亡病例27萬。HPV16和HPV 18是眾所周知的高致宮頸癌因子[1]。MicroRNAs (miRNAs)是一類分布廣泛的小的非編碼蛋白質的RNAs，其功能是負調控基因表達。它們調節了多種生物學信號通路，生物信息學數據顯示，每個miRNA可以調節數百個靶基因，這也表明miRNAs可能影響所有的信號途徑[2]。研究表明miRNAs可以抑制重要的腫瘤相關基因的表達，可能在癌癥的診斷和治療中起重要作用[3]。詳細分析miRNA的變化情況，將有助于了解宮頸癌的發生機制。因此，本文重點研究微小RNA在宮頸癌的早期篩查中的應用及預后判斷價值。現報告如下。

1　材料與方法

1.1一般資料

98例宮頸癌患者，平均年齡36.17歲(18～65歲)。錐切和子宮切除術獲得98例癌組織標本，福爾馬林液固定，石蠟包埋(FFPE)，隨后進行研究。癌組織經病理診斷為高風險HPV陽性(CIN1，CIN2-3和浸潤性宮頸癌)。

1.2標本組織學診斷

輕度不典型增生病變[(CIN 1)n=30]，其通常自發消退；癌前病變[(CIN2)n=10，(CIN3)n=20)]，約20%的人會發展為浸潤癌；宮頸鱗癌[(SCC)n=38]。單一HR HPV感染陽性樣本(n=65)，多種HR HPV感染陽性樣本(n=33)。

1.3RNA提取和微RNA的實時聚合酶鏈式反應(qPCR)表達分析

Trizol提取總RNA之前，去石蠟(二甲苯，無水酒精)處理。隨后進行反轉錄和定量PCR檢測。miRNA的相對表達水平應用2-ΔΔCT方法進行比較。

1.4統計學方法

所有統計數據采用SPSS 21.0統計軟件進行分析。Mann-Whitney U檢驗，非配對t檢驗，單向方差分析(ANOVA)比較連續變量和分類變量。Logistic回歸分析不良病理結果的相關變量(miRNA，社會人口和生活方式因素)。P<0.05認為差異具有統計學意義。

2　結果

高危型HPV的分布，HPV16最多(57.53%)。其次是HPV18和HPV31(10.96%)，最后為HPV56(9.59%)和HPV51，HPV52和HPV58(8.22%)。根據組織學診斷結果，98例樣本進行分組，CIN1占30.61%，CIN2-3占30.61%，SCC占38.78%。多種HPV感染陽性患者的平均年齡顯著小于單一HPV感染陽性患者[(33.30±7.994)歲和(37.98±10.516)歲，P=0.039)]。CIN1組，多種HPV感染患者和單一HPV感染患者平均年齡和年齡范圍相近[單(33.2±8.804)歲，多(33.2±10.207)歲]。miR-27a在宮頸上皮內瘤變(CIN2-3)的表達水平顯著高于CIN1(P=0.023)，而在鱗狀細胞癌(SCC)中的表達水平高于CIN2-3(P=0.033)，見圖1。從CIN1到SCC，miR-155表達水平也有顯著增高(P=0.023)。從CIN1到CIN2-3，miR-196a的表達水平增高，但在SCC中顯著降低(P=0.016)。此外，miR-34a在CIN2-3中的表達水平顯著低于CIN1(P=0.041)，而SCC中的表達水平低于CIN2-3(P=0.021)，見表1，表2。

至于其他因素，分析了吸煙和高危型HPV的影響。HPV16對疾病結果產生顯著影響(P=0.004)。從CIN1到CIN2-3，miR-27a和miR-34a均與HPV陽性16存在相關性(P=0.028和P=0.027)。CIN2-3進展到SCC，miR-34a與HPV16顯著相關(P=0.036)。吸煙患者比例CIN1為65%，CIN2-3為46.67%。吸煙者和非吸煙者之間的miRNA表達水平，尤其是miR-27a表達與miR-34a表達間具有統計學差異(P=0.036和P=0.029)。

表1　不同分級不典型增生組織中的miRNA表達差異(均值)

表2　不典型增生組織和腫瘤組織中的miRNA表達差異(均值)

圖1　miR-27a在不典型增生組織和腫瘤組織中表達水平

3　討論

現有研究已經證明，miRNA的失調與惡性病變相關。高危型HPV類型的宮頸癌發展的關聯性病因在過去的幾十年中通過一系列的流行病學和生物學研究已被證明[4]。盡管如此，高危型HPV感染并不必然發展為浸潤癌。多種HPV基因型已被發現是健康年輕婦女罹患宮頸癌的危險因素，而涉及HPV16和58共同感染的婦女，宮頸癌發生的危險增加[5]。我們觀察到，從低分化到高分化不典型增生的進展過程中，miR-27a和miR-34a與 HPV陽性16相關，這似乎強化了以往的觀察結果。

以前的研究使用了不同類型的樣品(培養細胞，癌來源的細胞系，人類組織樣本，血清)用以研究宮頸癌相關的miRNA表達譜，雖然研究結果多有重疊，但仍有相當數量的變異性[6]。在我們的研究中，我們試圖區分miR-21，miR-27a，miR-34a，miR-155，miR-196a，miR-203在宮頸SCC不同階段的表達差異。miR-27a是一種由P53，E2F和c-Myc調制的致癌miRNA。高危型HPV E6和E7與c-Myc有關，并增強c-Myc的轉錄活性[7]。我們發現，高危型HPV陽性組織樣品中的miR-27a的表達與宮頸癌相關，因此miR-27a可成為一個可靠的生物標志物，預判HR HPV相關宮頸癌的進展。

miR -34a是由p53直接調控的腫瘤抑制因子，而HR HPV E6通過p53通路從而 抑制miR-34a的功能[8]。miR-34家族是p53直接的轉錄靶標。miR-34的激活可以誘導細胞周期停滯和細胞凋亡，這些都是p53的活性效應。此外，miR-34的缺失會減少p53介導的細胞死亡。上述發現再一次告訴我們：miRNA是腫瘤抑制網絡中的核心角色之一，非編碼RNA同樣是腫瘤發生過程中的關鍵分子。研究人員發現，異位表達的miR-34可以產生與p53相同的生物學效應，如誘導細胞生長停滯及細胞凋亡，miR-34則是通過減少促增殖基因及抗凋亡基因的表達來發揮上述作用的。Li等[9]已經證明了miR-34a在高危HPV感染組織中的表達顯著降低。我們的觀察清楚地證實了miR-34a在HPV引起的宮頸癌病過程中充當腫瘤抑制性miRNA。我們也注意到，miR-34a的表達改變與單個或多個HR HPV類型存在關聯，因此支持多HPV感染增效理論。

香煙煙霧誘導miRNA表達失調已在大鼠和人類試驗中得到證實，但主要集中在支氣管氣道上皮肺細胞[10]。香煙煙霧(CS)引發miR-34a表達顯著失調并導致肺癌發生。在由吸煙導致的肺癌中，煙霧似乎在p53基因中留下了獨特的“分子標記”。基于以上觀點，我們可以推測CS可能影響miRNA在其他器官中的調節機制，例如宮頸[11]。基于這些發現，我們可以得出結論，miR-34a可能有助于預測HPV感染的結果，并區分不同的宮頸病變。

miR-155的表達與低分化進展到高分化宮頸病變相關，使的miR-155可作為另一個生物標志物，預判HR HPV相關的宮頸癌的發生。雖然我們沒有找到一個顯著的相關性，但是需要強調一點，miR-155的表達差異與吸煙史有關。功能性miR-155通過形成淋巴樣細胞轉錄，控制適應性免疫中重要的多種生物功能，從而介導的免疫反應。Lao等[12]發現miR-155在宮頸癌組織表達上調，高于相鄰的非癌組織。

綜上所述，評估miRNA表達水平有助于區分不同宮頸癌變和預測HPV感染結果。

[1]李明，鄧芳，張揚，等.應用 Luminex 液相芯片技術檢測宮頸癌組織中人乳頭瘤病毒基因型〔J〕.安徽醫藥，2014，18(11)：2083-2086.

[2]敬敏，趙穎海，陳小毅，等.miRNA-146a 在鼻咽炎癥和癌癥病變組織中的表達及意義〔J〕.山東醫藥，2013，52(37)：1-3.

[3]郝莉，孫國平.miRNA 作為大腸癌生物標志物的研究進展〔J〕.安徽醫藥，2013，17(2)：183-185.

[4]韓競男，魯昊騁，梁靜.DNA 甲基化與癌癥〔J〕.中國生物化學與分子生物學報，2012，28(2)：108-114.

[5]楊娟，肖蘭，楊繼洲.高危型 HPV 負載量與宮頸癌前病變發展的相關性〔J〕.實用癌癥雜志，2012，27(6)：656.

[6]萬淑瓊，張軍.miRNA 在 HPV 陽性和陰性宮頸癌組織之間的差異研究〔J〕.海南醫學院學報，2013，19(1)：101-103.

[7]Toden S，Okugawa Y，Hur K，et al.Novel evidence for chemopreventive effects of curcumin and boswellic acid through regulation of mir-27a and mir-34a in human colorectal cancer〔J〕.Cancer Res，2014，74(19 Supplement)：4119.

[8]Liu C，Kelnar K，Liu B，et al.The microRNA miR-34a inhibits prostate cancer stem cells and metastasis by directly repressing CD44〔J〕.Nat Med，2011，17(2)：211-215.

[9]Li B，Hu Y，Ye F，et al.Reduced miR-34a expression in normal cervical tissues and cervical lesions with high-risk human papillomavirus infection〔J〕.Int J Gynecol Cancer，2010，20(4)：597-604.

[10]楚毅.香煙提取物刺激對食管鱗狀上皮細胞 miRNA 的影響及機制研究〔D〕.中南大學，2012.

[11]Suzuki HI，Yamagata K，Sugimoto K，et al.Modulation of microRNA processing by p53〔J〕.Nature，2009，460(7254)：529-533.

[12]Lao G，Liu P，Wu Q，et al.Mir-155 promotes cervical cancer cell proliferation through suppression of its target gene LKB1〔J〕.Tumour Biol，2014，35(12)：11933-11938.

(編輯：吳小紅)

Application and Prognostic Value of Small RNA in Early Screening of Cervical Cancer

LANYanli，QUANXiaozhen.

XiangyangCentralHospitalAffiliatedtoHubeiArtsandSciencesCollege，Xiangyang，441021

ObjectiveTo study the application and prognostic value of small RNA in early screening of cervical cancer.MethodsReal-time quantitative PCR (quantitative PCR) was used to determine the expression levels of miRNA cervical cancer tissues (miR-21，miR-27a，miR-34a，miR-155，miR-196a，miR-203).ResultsmiR-27a expression level in cervical intraepithelial neoplasia (CIN) 2-3 was significantly higher than CIN1(P=0.023)，while the expression levels of squamous cell carcinoma (SCC) was higher than CIN2-3 (P=0.033).In addition，miR-34a expression level in CIN2-3 was significantly lower than CIN1(P=0.041)，and in SCC was lower than CIN2-3 (P=0.021).Compared with CIN1，miR-27a expression of CIN2-3 increased (P=0.028) and miR-34a decreased，HPV 16 positive expression was correlated with CIN(CIN2-3/CIN1：P=0.027；SCC/CIN2-3：P=0.036 ).miR-34a expression level and smoking status and HPV16 were correlated.ConclusionThe detection of miRNA expression level can help evaluate cervical lesions and HPV infection.

Cervical intraepithelial neoplasia(CIN )；Cervical cancer；Expression of micro RNA；HPV infection

441021 湖北文理學院附屬襄陽市中心醫院

權效珍

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.06.004

R737.33

A

1001-5930(2016)06-0883-03

2015-08-07

2016-02-07)