遠東擬沙丁魚蛋白多肽(Sardinopssagaxp olypeptide)的制備及其對酪氨酸酶的抑制作用

李亞會,吉　薇,吉宏武,2,3,*,蘇偉明,2,王晶晶

(1.廣東海洋大學食品科技學院,廣東湛江 524088;2.廣東省水產品加工與安全重點實驗室,廣東湛江 524088;3.水產品深加工廣東省普通高校重點實驗室,廣東湛江 524088)

?

遠東擬沙丁魚蛋白多肽(Sardinopssagaxpolypeptide)的制備及其對酪氨酸酶的抑制作用

李亞會1,吉薇1,吉宏武1,2,3,*,蘇偉明1,2,王晶晶1

(1.廣東海洋大學食品科技學院,廣東湛江 524088;2.廣東省水產品加工與安全重點實驗室,廣東湛江 524088;3.水產品深加工廣東省普通高校重點實驗室,廣東湛江 524088)

以遠東擬沙丁魚為原料,采用動物蛋白水解酶和風味酶聯合水解,通過膜分離等工序制備遠東擬沙丁魚蛋白多肽(SardinopssagaxPolypeptide/SSP),測定其分子量的分布,以生化水平上對酪氨酸酶的抑制率、細胞水平上對小鼠B16細胞中酪氨酸酶活性及黑色素含量的抑制率為檢測指標,研究SSP對酪氨酸酶活性及黑色素合成的影響。結果顯示:SSP的重均分子量為1664 u,其分子量區間主要為500～3000 u;無論是在生化水平還是細胞水平上,SSP對酪氨酸酶都具有一定的抑制作用,且SSP還能在一定程度上抑制細胞中黑色素的合成,這一結果表明了SSP具有一定的美白功能,有望作為無毒副作用的天然酪氨酸酶抑制劑,在醫藥、食品、化妝品等行業具有廣泛的應用前景。

遠東擬沙丁魚,蛋白多肽,酪氨酸酶活性,黑色素含量

酪氨酸酶是含銅的需氧酶類,含有多個亞基,每個亞基含兩個銅離子,每個銅離子分別與三個組氨酸殘基共價結合,構成其活性中心[1]。酪氨酸酶是黑色素形成的關鍵酶,而人皮膚中黑色素含量直接決定了皮膚的白皙程度。因此可以通過抑制酪氨酸酶的活性來抑制黑色素的生成,從而達到美白功效[2]。

目前市面上已經逐漸從借助物理性遮蓋美白向黑色素還原的生理性美白轉化。常見的美白活性成分主要有曲酸及其衍生物,熊果苷,水楊酸等[3]。由于天然產物安全性好、生理活性強,因此天然產物作為美白劑成為化妝品行業的一個發展趨勢,能夠滿足了消費者的需求[4]。海洋生物活性肽是從海洋生物中得到的,由于海洋生物相比陸地生物具有特殊的生態環境(如高鹽,高壓、缺氧等),賦予了他們一些特殊的化學結構[5]。王靜風等[6]報道,魷魚皮膠原蛋白多肽具有降低黑色素含量和抑制酪氨酸酶活性的功能;王奕等[7]報道,日本刺參膠原肽具有抑制酪氨酸酶活性。遠東擬沙丁魚(Sardinopssagax),又名斑點莎腦魚,具有分布廣、生長快、繁殖力強、價格低廉等優點[8]。據報道遠東擬沙丁魚蛋白多肽具有抑制ACE酶[9]、抗免疫、抗氧化[10]等多種生物活性。因此本文選用遠東擬沙丁魚為原料,通過蛋白酶酶解和膜分離[11]等技術制備遠東擬沙丁魚蛋白多肽,研究其對酪氨酸酶活性的抑制作用,進一步通過細胞實驗來驗證樣品對小鼠B16細胞中酪氨酸酶活性及黑色素含量的抑制作用,為其在美白化妝品中的應用提供一定的理論基礎。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

遠東擬沙丁魚(Sardinopssagax),購于湛江市東風市場。

小鼠B16黑色素瘤細胞購于中山大學細胞庫;高糖DMEM培養基、0.25%胰蛋白酶、青霉素、鏈霉素GIBCO公司;胎牛血清、L-DOPA、曲酸均購于廣州市齊云生物技術有限公司;MTT、DMSO、TritonX-100Amresco公司;96孔板、24孔板、6孔板康寧;酪氨酸酶worthingtom;L-酪氨酸華藍集團;動物蛋白水解酶(14.5萬U/g)、風味酶(14萬U/g)南寧龐博生物工程有限公司;DPPH試劑、曲酸廣州市齊云生物技術有限公司;其他試劑均為分析純。

MCO-175型CO2培養箱Thermo公司;SW-CJ-2FD型超凈工作臺蘇州凈化有限公司;CKX41-A32PH型倒置顯微鏡日本奧林巴斯公司;MμLtiskanGO全波長多功能酶標儀Thermo Fisher Scientific公司;FA2104A分析天平上海天平儀器廠;SHZ-B水浴恒溫振蕩器江蘇金壇市佳美儀器公司;Agilent LC 1200液相色譜儀美國安捷倫公司;TM-CM-01陶瓷膜分離設備(SG1812C 8175396 100 u反滲透膜、88688246 3000 u超濾膜)杭州沃騰有限公司。

1.2實驗方法

1.2.1遠東擬沙丁魚蛋白多肽的制備工藝流程:遠東擬沙丁魚→前處理→酶解→滅酶→離心→脫油→脫色(活性炭)→過分子篩(60目)→超濾→反滲透→旋轉蒸發→冷凍干燥→得到樣品遠東擬沙丁魚蛋白多肽(SSP)。

將遠東擬沙丁魚(100 g)去頭去內臟,清洗,打漿,在適宜的酶解條件下反應3 h(動物蛋白水解酶0.5%、風味酶0.1%,溫度50 ℃,自然pH),之后在90 ℃條件下滅酶10 min,4000 r/min離心,取上清液于管式離心機中脫油,再加入活性炭脫色,過60目的篩,得到的澄清液用截留分子量為3000 u的超濾膜超濾,再用反滲透膜去除小分子物質,最后得到分子量區間大致在200～3000 u的多肽樣品,再將其在50 ℃條件下旋轉蒸發,冷凍干燥之后得到干粉(13.4 g)。保存在干燥器中備用。

1.2.2SSP的分子量測定以SDS-PAGE超低分子量標準蛋白質(20100、14400、7823、5856、3312 u);馬尿酰-組氨酸-亮氨酸(429.47 u)為相對分子質量標準品,采用高效液相空間排阻法測定,根據所測得分子量作相對分子量校正曲線,之后在相同條件下測定樣品的分子量。將冷凍干燥樣品溶于超純水,配置濃度為2 mg/mL。條件如下:色譜柱為Waters protein pak 60(300 nm×7.8 nm);柱溫25 ℃;流動相:pH7.2的Tris-HCl;流速:0.7 mL/min;檢測波長214 nm;進樣量20 μL。

1.2.3酪氨酸酶抑制率的測定根據參考文獻[12]的操作方法,稍作修改。酪氨酸酶抑制率的測定方法見表1。

表1　酪氨酸酶抑制率測定方法Table 1　Determination method of Tyrosinase Inhibition

注:先將前三種溶液混勻,于37 ℃水浴鍋中保溫10 min,加入酪氨酸酶搖勻后,37 ℃保溫30 min后立即在475 nm條件下測定其吸光度。

酪氨酸酶抑制率:

式中:A1代表不加樣品,酪氨酸酶與L-酪氨酸反應產生的吸光度;A2代表不加樣品,L-酪氨酸所產生的吸光度;A3代表添加樣品,酪氨酸酶與L-酪氨酸反應產生的吸光度;A4代表樣品與酪氨酸所產生的吸光度。

1.2.4小鼠B16黑色素瘤細胞的培養在無菌條件下,將購買的B16黑色素瘤細胞接種于含10%胎牛血清、雙抗(100∶1)的高糖DMEM培養基中,置于5% CO2培養箱37 ℃飽和濕度培養,每24 h換液。當細胞生長至培養瓶的80%～90%后,經0.25%胰蛋白酶消化,傳代并繼續培養[13]。每次實驗取自同一傳代細胞。

1.2.5MTT比色法測定細胞存活率參考文獻[14]的操作方法,稍作修改。取對數期生長的小鼠B16黑色素瘤細胞,經0.25%胰蛋白酶消化分散成單個細胞懸液,調整細胞濃度至2×104/孔,接種到96孔板中,隔夜培養后,至細胞完全貼壁,換新鮮培養液,每孔加入不同濃度的樣品SSP(25、50、75、100、125 μg/mL)和曲酸(25、125 μg/mL)每個濃度設置5個復孔,對照組用新鮮培養液代替,每隔一天測定一次(共測3 d),采用PBS清洗兩次后,每孔加20 μL的5 mg/mL MTT和180 μL EMDM培養基,繼續放在CO2培養箱中培養4 h后,棄掉培養液,加入200 μL DMSO,振蕩均勻后于酶標儀中測定在570 nm條件下的吸光度。

細胞存活率計算公式:

1.2.6SSP對小鼠B16 黑色素瘤細胞酪氨酸酶活性的影響參考文獻[15]的操作方法,稍作修改。細胞培養與細胞處理如上述1.2.4,培養1、2、3 d后,棄除上清液,用PBS清洗2次,每孔加入含0.9 mL 1%TritionX-100和0.1 mL 5 mg/mL的L-DOPA,混勻后置于30 ℃培養箱中反應1 h后,置于酶標儀中測定475 nm條件下的吸光度。

酪氨酸酶的抑制率計算公式:

1.2.7SSP對小鼠B16 黑色素瘤細胞中黑色素含量的影響參考文獻[16]的操作方法,稍作修改。細胞培養與細胞處理如上述1.2.4,調整細胞數為1×106個/孔,添加到6孔板中培養,培養1、2、3 d后,棄除上清液,用PBS清洗2次,每孔加入1 mol/L的氫氧化鈉1 mL,用細胞刮器將細胞刮下來,置于1.5 mL離心管中,在80 ℃條件下加熱1 h,冷卻后在1500×g離心10 min,吸取上清液200 μL,置于96孔板中,于酶標儀測定475 nm條件下的吸光度。

黑色素含量的抑制率:

1.3數據處理與分析

使用SPSS和Excel2013軟件進行數據處理和方差分析,采用Origin 8.0軟件繪圖。重復實驗3次,以平均值±標準誤來表示。

2　結果與分析

2.1SSP的分子量分布

根據標準品測定得到的圖譜(圖1)。以保留時間(x)和分子量的對數(y)作圖,得到分子量回歸方程為:y=-0.208x+6.045,R2=0.9905(如圖2)。根據圖2的標準曲線方程,結合SSP樣品所測得分子量分布圖譜(如圖3),計算得到樣品的分子量分布區間(表2)。

圖1　標準樣品的出峰圖譜Fig.1　The spectrum of the stanurd sample

圖2　標準樣品保留時間對應其分子量的對數值Fig.2　The logarithm of molecular weight of stanurd sample’s retention time

圖3　SSP的分子量分布圖譜Fig.3　Distribution of molecular weight of SSP

由表2可知,雖然經過3000 u的超濾膜過濾后,但由于其組分復雜,所測得的分子量范圍還存在大于3000 u的組分,可能與該膜的性能、透過壓力[17]等有一定的關系,故不能完全保證分子量一定在3000 u以下。分子量在3000 u以下的組分約占75%,其中2000～3000 u之間的組分占32.27%;1000～2000 u之間的組分占13.17%;500～1000 u之間的組分占14.17%。表2中還顯示SSP的數均分子量和重均分子量分別為2752.86、1664 u。

表2　肽的分子量分布Table 2　Distribution of peptide molecular weight

根據國內外研究報道了一些來自海洋類的生物活性肽的分子量,發現較強活性的功能肽主要集中在3000 u以下[18]。不同來源的提取物得到的分子量不同,不同分子量的肽也表現出不同的生物活性[5]。宋永相等報道[19],相對分子質量小于1000 u的海洋活性膠原肽對酪氨酸酶有較好的抑制作用;王靜鳳等[20]報道,不同分子量魷魚皮膠原蛋白多肽SP1(Mr>10000 u)、SP2(6000u

2.2SSP對酪氨酸酶活性的影響

由圖4可知:在一定濃度(1～10 mg/mL)范圍內,隨著SSP濃度增大,其對酪氨酸酶的抑制作用逐漸增強,說明SSP在生化水平上對酪氨酸酶能表現出較強的抑制作用其結果與報道相符。陳龍等[23]報道,20 g/L質量濃度的魚膠原肽溶液的酪氨酸酶抑制率可以達到30%以上,遠強于市場上的同類產品;王靜風等[6]報道,魷魚皮膠原蛋白多肽具有降低黑色素含量和抑制酪氨酸酶活性的功能。其可能原因是SSP能夠破壞酪氨酸酶的活性中心,使其活性降低。Rao Fu等[24]報道酪氨酸酶的抑制作用可能與銅離子螯合能力有一定相關性,能通過絡合銅離子而抑制酪氨酸酶活性。由圖中看出當曲酸濃度只有0.1 mg/mL時,其抑制率將近40%,當濃度為1 mg/mL時,其抑制率達到90%,說明SSP與市面上酪氨酸酶抑制劑相比還是存在一定差距,但是曲酸作為酪氨酸酶抑制劑應用于美白化妝品仍然存在一定的爭議[25],因此其使用受到一定限制。

圖4　SSP和曲酸對酪氨酸酶活性的影響Fig.4　Effect of kojic acid and SSP on tyrosinase activity注:橫坐標軸刻度的“曲酸0.1”表示曲酸濃度為 0.1 mg/mL,“曲酸1”表示曲酸濃度為1 mg/mL。

2.3SSP對小鼠B16存活率的影響

由圖5中可知:在處理的1、2 d中可以看出在樣品組25～100 μg/mL濃度范圍內,隨著濃度的增加,小鼠B16細胞數量呈現出增加的趨勢(即細胞存活率>100%),當濃度達到125 μg/mL時,細胞數量有所降低,但是其存活率在80%以上。在樣品處理的2 d內,SSP可能作為一種營養物質對細胞的生長具有促進的作用,所以細胞數量明顯增加[26]。而當細胞培養到3 d時,細胞數量有所降低,可能是由于細胞數量增加,所需要的營養增多,而供給的營養不足而且細胞之間也存在相互的競爭,導致細胞數量略微降低,但是整體來說SSP對細胞的生長具有促進的作用,因此可以判定SSP對細胞無毒害作用。該結果與國內外學者報道相同,范成成[27]研究發現從文蛤中分離得到的一種多肽不僅抑制B16黑色素瘤細胞的增長,而且能激活細胞的增長,這表明該海洋活性物質對細胞無毒害作用,且對細胞具有營養的效果。相比較而言,曲酸對B16細胞的生長具有一定的抑制作用,說明曲酸對小鼠B16細胞存在一定的不良刺激作用。

圖5　SSP和曲酸對小鼠B16黑色素瘤細胞生長的影響Fig.5　Effect of kojic acid and SSP on B16 murine melanoma cells growth注:橫坐標軸刻度的“曲酸25”表示曲酸濃度為25 μg/mL, “曲酸125”表示曲酸濃度為125 μg/mL。圖6、圖7同。

2.4SSP對小鼠B16細胞中酪氨酸酶活性的影響

從圖6中可知:在樣品處理3 d中,其測定結果顯示,在一定濃度(25～75 μg/mL)范圍內,隨著樣品組的濃度增大,SSP對酪氨酸酶的抑制作用逐漸增強,當SSP濃度增大到75 μg/mL,其抑制作用達到最大,繼續增加SSP的濃度,其抑制作用有所降低,其中第1 d下降較為明顯,到第3 d時下降趨勢較為平緩。可能原因是在第3 d時細胞存活率相對降低,且營養狀況及細胞周圍的環境狀況導致細胞的狀態不好,從而使得各濃度間的酪氨酸酶活性差距較小。圖6中還可知:同一濃度條件下,隨著作用時間延長,其對細胞中酪氨酸酶活性的抑制作用增加,可能是由于時間延長,細胞數量相對增多,細胞內產生的酪氨酸酶含量增加,SSP并未對細胞中酪氨酸酶作用達到飽和狀態,從而能抑制更多細胞中酪氨酸酶的活性,使得相對的測定酪氨酸酶活性降低。這說明了SSP不僅能在體外抑制酪氨酸酶的活性(圖4),還能透過細胞抑制細胞內酪氨酸酶活性。Chan[11]等研究發現細胞內酪氨酸酶的活性測定比體外酪氨酸酶活性測定可靠性更高。因此在細胞中對酪氨酸酶的測定更能說明SSP能夠透過細胞,抑制酪氨酸酶活性。范成成[27]從文蛤里分離得到一種多肽Mer1對酪氨酸酶有很好抑制作用,且對細胞無毒害作用。目前的研究顯示SSP作為天然來源的生物活性肽,不添加任何刺激性物質,純天然,安全可靠,具有較好的應用前景。

圖6　SSP和曲酸對小鼠B16黑色素瘤細胞中 酪氨酸酶活性的抑制作用Fig.6　Inhibition of kojic acid and SSP on tyrosinase activity in B16 melanoma cells

2.5SSP對小鼠B16細胞中黑色素含量的影響

從圖7可知:作用1、2、3 d后,在一定濃度(25～125 μg/mL)范圍內,隨著SSP濃度增大,其對細胞中黑色素生成的抑制作用逐漸增強,細胞中黑色素含量降低。且同一濃度條件下,隨著時間天數的增加,其抑制作用呈上升趨勢。可能是由于時間延長,細胞數量相對增多,細胞內產生的黑色素含量增加,而整體黑色素含量并不多,故在SSP濃度充足的條件下,其能夠充分的作用于細胞,從而使細胞中黑色素含量在小幅度范圍內降低。CANUN等[28]人將HQ和EGFP與11-聚谷氨酸融合后,采用經皮注射的方法測定融合物是否能進入表皮細胞來抑制黑色素的生成。MARINI等[29]進一步研究了四肽PKEK在體內(人臉部及背部)對黑色素的抑制作用。因此選擇測定細胞中黑色素含量更能證明其具有美白的功效。

圖7　SSP和曲酸對小鼠B16黑色素瘤細胞中 黑色素含量的抑制作用Fig.7　Inbition of SSP and kojic acid on cellular melanin content in B16 melanoma cells

黑色素的含量直接決定了皮膚的白皙程度,目前,公認的黑色素形成的過程[30]大致為酪氨酸在酪氨酸酶的作用下氧化成多巴,多巴氧化形成多巴醌,多巴醌再經過一系列的反應,最后形成真黑素。其中酪氨酸酶是黑色素形成的關鍵酶[31]。因此本研究通過在生化水平上測定其對酪氨酸的抑制作用之后,進一步在細胞水平上驗證SSP能夠透過細胞作用于細胞中的酪氨酸酶,并測定其對細胞中黑色素生成的抑制作用,以上實驗結果(圖5～圖7)表明SSP對細胞無毒害作用,并且能夠透過細胞,抑制細胞中的酪氨酸酶活性及黑色素的生成。因此,皮膚美白劑可以通過抑制酪氨酸酶活性,從而減少黑色素的生成,達到美白皮膚的效果[32]。

3　結論

通過酶法水解和膜分離技術等工序,從遠東擬沙丁魚制備低分子量的蛋白多肽是具有可行性的。得到的遠東擬沙丁魚蛋白多肽重均分子量為1664 u,分子量在500～3000 u之間,約占75%。該蛋白多肽無論在生化水平和細胞水平上都能抑制酪氨酸酶的活性,并在細胞水平上能夠抑制黑色素的生成。因此SSP能夠作為一種酪氨酸酶抑制劑廣泛應用于美白化妝品及醫藥品行業。

[1]徐睿. 海帶和菲律賓蛤仔提取物對酪氨酸酶活性和黑素生成影響的研究[D].青島:中國海洋大學,2010.

[2]張建友,方艷燕,吳曉琴,等.天然活性美白化妝品研究現狀及發展前景[J].精細化工,2008,25(1):72-76.

[3]鄭虹. 美白化妝品的配方設計[J].日用化學品科學,2012,35(7):54-56.

[4]官興麗,羅理勇,曾亮.天然產物的美白作用及其機理研究進展[J].食品工業科技,2011,5:432-435.

[5]于榮敏,嚴春艷,曲紅艷,等.近年來海洋生物活性多肽的研究概況與展望[J].海洋通報,2004,23(3):87-88.

[6]王靜鳳,王奕,崔鳳霞,等.魷魚皮膠原蛋白多肽對 B16黑素瘤細胞黑素合成的影響[J].中國藥理學通報,2007,23(9):1181-1182.

[7]王奕,王靜風,張瑾,等.日本刺參膠原肽對B16黑素瘤細胞黑素合成的影響[J].營養學報,2007,29(4)：401-404.

[8]王杏珠.日本遠東擬沙丁魚Sardinmelanostictus(TemniineketSehlegel)開發利用的新技術[J].現代水產漁業,1994,9(9):13-15.

[9]H Matsufuji,T Matsui,E Seki,et al. Bioscience,Biotechnology and Biochemistry 58(1994)2244-2245.

[10]García-Moreno P J BatistaI,Pires,Carla,et al. Antioxidant activity of protein hydrolysates obtained from discarded Mediterranean fish species[J]. Food Research International,2014,65:469-476.

[11]吳靖娜,許永安,王茵,等.羅非魚魚鱗膠制備降血壓膠原肽的工藝及酶解物活性[J].廣東海洋大學學報,2012,32(1):76-80.

[12]Rangkadilok N,Sitthimonchai S,Worasuttayangkurn L,et al. Evaluation of free radical scavenging and antityrosinase activities of stanurdizedlongan fruit extract[J]. Food and Chemical Toxicology,2007,45:328-336.

[13]Canun G,Michiue H,Ishikawa S,et al. Combining poly-arginine with the hydrophobic counter-anion 4-(1-pyrenyl)-butyric acid for protein transduction in transdermal delivery [J]. Biomaterials,2012,33(27):6468-75.

[14]Chan Y Y,Kim K H,Cheah S H. Inhibitory effects of Sargassumpolycystum on tyrosinase activity and melanin formation in B16F10 murine melanoma cells[J]. Journal of ethnopharmacology,2011,137(3):1183-1188.

[15]Momtaz S,Mapunya B M,Houghton P J,et al. Tyrosinase inhibition by extracts and constituents of Sideroxyloninerme L. stem bark,used in South Africa for skin lightening[J]. Journal of ethnopharmacology,2008,119(3):507-512.

[16]Chen Y S,Lee S M,Lin C C,et al. Kinetic study on the tyrosinase and melanin formation inhibitory activities of carthamus

yellow isolated from Carthamustinctorius L[J]. Journal of bioscience and bioengineering,2013,115(3):242-245.

[17]胡亞芹,曹楊. 超濾膜技術在多糖提取方面的應用[J].生物技術通訊,2005(2):228-230

[18]王晶,吳燕燕,楊賢慶. 海洋貝類活性肽的研究現狀和應用前景[J].食品工業科技,2013(13):346-349.

[19]宋永相,孫謐,王躍軍,等.海洋活性膠原肽的抗氧化性及對酪氨酸酶的抑制作用與初步分離研究[J].中國食品學報,2009,9(5):8-12.

[20]王靜鳳,王奕,崔鳳霞,等.魷魚皮膠原蛋白多肽對B16黑素瘤細胞黑素合成的影響[J].中國藥理學通報,2007,23(9):1183-1184.

[21]Lee H E,Kim E H,Choi H R,et al. Dipeptides Inhibit Melanin Synthesis in Mel-Ab Cells through Down-Regulation of Tyrosinase[J]. The Korean journal of physiology &pharmacology:official journal of the Korean Physiological Society and the Korean Society of Pharmacology,2012,16(4):287-291.

[22]成靜,陳棟梁,江雪瓊,等.膠原三肽對B16黑素瘤細胞黑素合成的影響[J].中國美容醫學,2011,20(6):5-7.

[23]陳龍,陳棟梁,楊國燕,等.魚膠原肽抑制酪氨酸酶活性能力的比較研究[J].中國美容醫學,2008,17(10):3-4.

[24]Rao Fu,Yuting Zhang,Yiran Guo,et al. Antioxidant and tyrosinase inhibition activities of the ethanol-insoluble fraction of water extract of Sapiumsebiferum(L.)Roxb

[25]Son K H,Heo M Y. The evaluation of depigmenting efficacy in the skin for the development of new whitening agents in Korea [J]. International Journal of Cosmetic Science,2013,35(1):9-18.

[26]Balcos M C,Kim S Y,Jeong H S,et al. Docosahexaenoic acid inhibits melanin synthesis in murine melanoma cells in vitro through increasing tyrosinasedegraution[J]. Actapharmacologica Sinica,2014,35(4):489-495.

[27]范成成.文蛤多肽的研究與應用[D].廈門:廈門大學,2009.

[28]Canun G,Michiue H,Ishikawa S,et al. Combining poly-arginine with the hydrophobic counter-anion 4-(1-pyrenyl)-butyric acid for protein transduction in transdermal delivery [J]. Biomaterials,2012,33(27):6468-6475.

[29]Marini A,Farwick M,Grether-beck S,et al. Modulation of skin pigmentation by the tetrapeptide PKEK:in vitro and in vivo evidence for skin whitening effects [J]. Experimental dermatology,2012,21(2):140-146.

[30]宋康康.抑制劑對酪氨酸酶的效應及其對黑色素生成調控的研究[D].廈門:廈門大學,2007.

[31]HalabanR,PattonRS,ChengE,et al. AbnormalAcidificationof Melanoma Cells Induces Tyrosinase Retention in the Early Secretory Pathway[J].J Biol Chem,2002,277(17):14821-14828.

[32]徐學濤.西藏紅纓合耳菊提取物的美白機理研究[D].廣東:廣東工業大學,2008.

Preparation of polypeptide fromSardinopssagaxand its tyrosinase inhibition activities

LI Ya-hui1,JI Wei1,JI Hong-wu1,2,3,*,SU Wei-ming1,2,WANG Jing-jing1

(1.College of Food Science and Technology,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China;2.Key Laboratory of Advanced Processing of Aquatic Products of Guangdong Higher Education Institution,Zhanjiang 524088,China;3.Guangdong Provincial Key Laboratory of Aquatic Product Processing and Safety,Zhanjiang 524088,China)

The polypeptide was prepared from theSardinopssagaxbythrough hydrolysing by animal proteolytic enzymes and flavor enzyme and ultrafiltration separation. The molecular weight distribution of the polypeptide obtained was determined by HPLC. With tyrosinase inhibition rate on the biochemical level and tyrosinase activity and melanin content in B16 cells on cell level as indexs,the effects of SSP on tyrosinase activity and the content of melanin were investigated. The results showed that average molecular mass of SSP was 1664 u,the range of which was mainly from 500 u to 3000 u.Both in the biochemical level and cellular level,SSP can inhibit tyrosinaseavticity and the content of melanin in B16 cell.With the function of whitening,SSP was expected to be a non-toxic nature tyrosinaseinhibitor. There were good potentials for SSP application in pharmaceutical,foods and cosmetic.

Sardinopssagax;polypeptide;tyrosinase activity;melanin content

2015-06-08

李亞會(1989-)，女，碩士研究生，研究方向：水產品深加工及貯藏工程，E-mail:13058369058@163.com。

吉宏武(1962-)，男，博士，教授，從事海洋生物資源高值化利用研究,E-mail:Jihw62318@163.com。

廣東省高等學校學科建設專項資金資助項目(2013CXZDA020)；廣東省省部產學研合作專項資金項目( 2013B090600155)；國家海洋公益性行業科研專項課題 (201305018)。

TS254.1

A

1002-0306(2016)03-0058-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.03.003