固定化重組大腸桿菌細胞催化合成靛藍

程丹丹，徐天虹，王　舒，趙玉婷，肖其敏

(1.浙江理工大學生命科學學院，杭州 310018；2.南京市第二十九中學，南京 210036；3.東南大學醫學院生物工程學系，南京 210009)

?

固定化重組大腸桿菌細胞催化合成靛藍

程丹丹1，徐天虹2，王舒3，趙玉婷3，肖其敏2

(1.浙江理工大學生命科學學院，杭州 310018；2.南京市第二十九中學，南京 210036；3.東南大學醫學院生物工程學系，南京 210009)

為提高表達黃素單加氧酶(FMO, E.C.1.14.13.8)的重組菌E.coliBL21(pET28a-fmo)轉化吲哚的效率，采用包埋法對重組菌進行了固定化研究。采用常規的固定化方法，分別使用卡拉膠、明膠、聚乙烯醇、海藻酸鈉對重組大腸桿菌進行包埋并分析各自對吲哚的轉化效果，確定了海藻酸鈉是較好的固定化載體。隨后對海藻酸鈉固定化條件進行研究，得到合適的條件是：海藻酸鈉濃度為2.0%，CaCl2濃度為2.0%，固定化時間8 h，細胞包埋量50 g/L。采用該方法制備的固定化細胞靛藍的轉化率為58.6%，固定化后重組E.coli細胞的耐熱性明顯提高，且具有較好的操作穩定性，重復催化第8次的轉化率為第1次的29.5%，說明固定化細胞轉化法確實提高了重組細胞的轉化吲哚合成靛藍的效率。

重組大腸桿菌；固定化；生物合成；靛藍

0　引　言

靛藍是最早發現也是使用量最大的染料之一，在紡織、食品、醫藥等領域具有廣泛的運用。微生物合成靛藍工藝以其高效、環境友好等優點備受關注[1]。早在1929年就有微生物合成靛藍的報道，但是野生型的菌株合成靛藍的效率低、副產物多。1983年，Ensley等[2]首次使用表達萘雙加氧酶的基因工程菌進行靛藍生物合成，利用重組氧化酶轉化合成靛藍成為研究熱點[3]。……