HPLC法測定復方丹七郁膠囊中丹酚酸B的含量△

劉宴林鄭錦坤徐曉梅郭基燕黃義純譚本仁（.汕頭大學醫學院附屬粵北人民醫院　韶關52026；2.韶關市食品藥品檢驗所　韶關　52028）

HPLC法測定復方丹七郁膠囊中丹酚酸B的含量△

劉宴林1鄭錦坤1徐曉梅1郭基燕2黃義純2譚本仁1（1.汕頭大學醫學院附屬粵北人民醫院韶關512026；2.韶關市食品藥品檢驗所韶關512028）

目的：建立高效液相法測定復方丹七郁膠囊中丹酚酸B含量的方法。方法：采用Kromasil 100-5C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱；以甲醇-乙腈-甲酸-水（10∶30∶1∶59）為流動相，波長為286nm；流速為1.0mL·min-1；柱溫為30℃；進樣量為10μL。結果：丹酚酸B 在6.25～249.87μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系，平均回收率100.51%（RSD為0.3%，n=6）。結論：該法快速，簡便易行，結果可靠，專屬性強，可作為復方丹七郁膠囊的質量控制指標。

復方丹七郁膠囊 丹酚酸B高效液相色譜法

復方丹七郁膠囊是基于傳統中醫理論研制的中藥復方制劑，具有補肝腎、活血化瘀、降血脂、抗動脈粥樣硬化的功效。該方由丹參、三七、山楂、川芎等8種中藥組成，對高脂血癥、腦動脈粥樣硬化癥、冠心病等有良好的療效。方中丹參為君藥，主要活性成分為丹參酮ⅡA、丹酚酸B等。為有效控制產品質量，本研究采用高效液相色譜法，建立了處方中丹酚酸B的含量測定方法，可用于復方丹七郁膠囊的質量控制。

1　儀器與試藥

1.1儀器：AG-135電子天平（瑞士METTLER T0LED0公司）；LC-2010C高效液相色譜儀（島津公司）；HT-300BQ數控超聲波清洗器（濟寧恒通超聲電子設備有限公司）。

1.2試劑：丹酚酸B對照品，中國食品藥品檢定研究院，批號：111562-201313，含量97.0%；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

1.3樣品：復方丹七郁膠囊，批號為：20140201、20140301、20140401。

2　方法與結果

2.1色譜條件：色譜柱：Kromasil 100-5C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-乙腈-甲酸-水（10∶30∶1∶59）；檢測波長：286nm；流速：1mL·min-1；柱溫：30℃；進樣量：10μL。

2.2供試品溶液的制備：取復方丹七郁膠囊內容物約1g，精密稱定，置50mL容量瓶中，加入70%甲醇適量，超聲處理30min（功率350W，頻率50kHz），取出，放冷，定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.3陰性對照溶液的制備：按質量標準中處方工藝制成缺丹參的陰性樣品，按照供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液，依法測定。結果表明，復方丹七郁膠囊中其他成分對丹酚酸B的測定無干擾，見圖1。

2.4對照品溶液的制備：精密稱取丹酚酸B對照品12.88mg至50mL容量瓶中，加70%甲醇適量，超聲處理30min，取出，放冷，定容至刻度，制成濃度為0.26mg·mL-1的對照品溶液，備用。

2.5線性關系考察：精密稱取丹酚酸B對照品溶液適量加70%甲醇稀釋成濃度為6.25μg·mL-1；12.49μg·mL-1；62.47μg·mL-1；124.94μg·mL-1；249.87μg·mL-1的對照品溶液，在上述色譜條件下試驗，測定各濃度的峰面積，以丹酚酸B峰面積積分值為縱坐標Y，進樣量為橫坐標X（μg），繪制標準曲線，得丹酚酸B回歸方程：Y=3550.4X-2350.4，r=0.9992。結果表明丹酚酸B在6.25～12.49μg·mL-1范圍內與其峰面積線性關系良好。

2.6精密度試驗：分別精密吸取丹酚酸B對照品溶液10μL，按“2.1”項下色譜條件連續進樣6次，測定含量。丹酚酸B的RSD%為0.07%。結果表明儀器精密度良好。

2.7穩定性試驗：取復方丹七郁膠囊約1.0g（批號：20140201），精密稱定，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液，于室溫下分別放置0、2、4、8、12、24h后進樣，記錄丹酚酸B的峰面積，結果丹酚酸B含量的RSD為0.8%。表明供試品溶液在24h內穩定。

2.8重復性試驗：取復方丹七郁膠囊約1.0g（批號：20140201），精確稱取6份，依“2.2”項下方法制備供試品溶液及測定。丹酚酸B的平均含量為9.58mg·g-1，RSD為0.24%。表明本方法重復性良好。

2.9加樣回收率試驗：稱取6份同一批樣品（批號：20140201），約0.5g，精密稱定，分別精密加入丹酚酸B對照品溶液，按“2.2”項下方法制備供試液及測定，計算回收率。測得丹酚酸B的平均回收率為100.51%，RSD為0.31%。結果見表1。

表1　丹酚酸B的回收率測定（n=6）

2.10含量測定：取3批樣品，按“2.2”項下制備供試品溶液，在“2.1”項下色譜條件進行測定，結果見表2。

表2　復方丹七郁膠囊中丹酚酸B的含量（n=3）

3　討論

中藥丹參是唇形科植物丹參（Salviae MiltiorrhizaBunge）的干燥根及根莖，作為活血化瘀藥，被廣泛用于治療冠心病、心絞痛等心血管疾病。丹參的化學成分主要為脂溶性二萜醌類和水溶性酚酸類，其中水溶性酚酸類中以丹參素和原兒茶醛含量較高，活性較強［1］。近年研究發現作為丹參素衍生物的丹參多酚酸鹽是丹參最主要的水溶性有效成分，具有抗血栓，改善血液循環，減輕白細胞損傷、抗氧化、減少細胞凋亡等作用［2］。丹參作為方中君藥，丹酚酸B作為其主要藥理成分故選為含量測定的指標。

本次研究參照了《中華人民共和國藥典》（2015年版）［3］，考察了不同濃度甲醇對復方丹七郁膠囊中丹酚酸B的提取率。結果表明，75%甲醇提取率高，雜質峰少，重現性好，故本試驗采用75%甲醇為提取溶劑。通過紫外掃描顯示丹酚酸B在286mm波長處有最大吸收，同時參考相關文獻［4］及反復實驗選取甲醇-乙腈-甲酸-水（10∶30∶1∶59）作為流動相可使得色譜峰分離度大于1.5，峰型良好，無雜質干擾峰，保留時間較短。

采用本研究建立的HPLC含量測定方法，對復方丹七郁膠囊進行含量測定。結果表明，本方法簡便可行，重現性良好，適用于復方丹七郁膠囊的質量控制及質量標準的制定。

［1］吳燕燕，孫煜，王易.丹參多酚酸鹽活血化瘀作用的多元化藥理作用［J］.中國現代應用藥學，2010，27（12）：1072-1076.

［2］戈升榮，俞一心，謝更新.丹酚酸的藥理作用研究進展［J］.中藥材，2002，9（25）：683-686.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：70-71.

［4］楊道炬，張懷，劉樹強，等.HPLC法測定消脂膠囊中丹參酮ⅡA和丹酚酸B的含量 ［J］.中藥新藥與臨床藥理，2014，25（6）：737-740.

△項目名稱：復方丹七郁膠囊工藝制備和質量標準研究，項目編號：20161245。

Determination of Compound DanQiYu Capsule of Salvianolic acid B by HPLC

Liu Yanlin1Zheng Jinkun1Xu Xiaomei1Guo Jiyan2Huang Yichun2Tan Benren1（1.The Affiliated YueBei People’s Hospital of Shantou University Medical College，Shaoguan，512026；2.shaoguan institue for food and drug control，shaoguan，512028）

0bjective：To develop a high performance liquid chromatography（HPLC）method for simultaneous determination of salvianolic acid B in Compound DanQiYu jiangzhi Capsule.Methods：Samples were analyzed on Kromasil 100-5C18（250mm×4.6mm，5μm）. Salvianolic acid B was detected with a mobile phase of methanol-acetonitrile-methanoic acid-water（10：30：1：59）for isocratic elution and a detection wavelength of 286 nm.The flow rate was 1.0mL·min-1，temperature of column was set at 30℃ and injection volume was 10μL.Results：Salvianolic acid B showed good linearity in the range of 6.25～249.87μg·mL-1，and the recovery was 100.51%（RSD= 0.3%，n=6）.Conclusion：The established method is rapid，practical and accurate，and is suitable for the quanlity control of Fufang DanQiYu Capsule.

Fufang DanQiYu Capsule Salvianolic acid B HPLC

R927.2

A

1672-8351（2016）09-0002-02