小兒熱速清口服液中葛根素的含量測定

顧菲菲　徐小梅（安徽中醫藥大學第一附屬醫院　合肥　230031）

小兒熱速清口服液中葛根素的含量測定

顧菲菲徐小梅（安徽中醫藥大學第一附屬醫院合肥230031）

目的：建立小兒熱速清口服液中葛根素含量測定方法。方法：采用HPLC法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水（75∶25）為流動相，檢測波長為250nm，流速為1.0mL/min。結果：葛根素在3.446μg/mL～17.228μg/mL范圍內線性關系良好，相關系數為r=0.9999（n＝7），平均回收率為99.6%（RSD＝0.26%，n＝9）。結論：該方法準確可靠，重現性好。可作為該制劑的葛根質量控制方法。

小兒熱速清口服液 葛根素 高效液相色譜法 含量測定

小兒熱速清口服液具有清熱解毒、瀉火利咽的功效，用于小兒風熱感冒、發熱頭痛、咽喉紅腫等癥。其主要有柴胡、黃芩、葛根、金銀花、水牛角、連翹等多味藥材加工制成，其中，葛根主要有解表退熱、生津、透疹、升陽止瀉等功效［1］。目前。文獻報道了用高效液相色譜法測定小兒熱速清口服液中黃芩苷的含量和《中國藥典》2010年版一部中黃芩苷的含量測定［2］，缺少測定葛根中葛根素的含量方法。本文采用高效液相色譜法測定葛根素的含量，方法簡便，重復性好，結果滿意。

1　儀器與試藥

1.1儀器：戴安U-3000高效液相色譜儀（DAD檢測器）；Fisherbrand FB15065超聲波清洗器；XPE-205電子分析天平（梅特勒-托利多）

1.2試藥及試劑：葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定院；批號：110752-201313；含量為95.5%）；小兒熱速清口服液（市售品批號：150106，150526，150806）；甲醇（色譜純Fisher Scientific）；乙醇（分析純，上海振興化工一廠）；水為重蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1最佳檢測波長的選擇［3］、［4］：參考《中國藥典》2015年版葛根素的含量測定方法以及文獻，選擇250nm作為本品的檢測波長。

2.2色譜條件［3］：AgilengtC18柱（0.5μm，250mm×4.6mm）；流動相為甲醇-水（25∶75）；檢測波長為250nm；柱溫為30℃；流速為1.0mL/min；進樣量為5μL；理論塔板數按葛根素峰計算應不低于6000。見圖1：

2.3樣品溶液的制備

2.3.1對照品溶液的制備：精密稱取葛根素對照品18.04mg置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液（344.564μg/mL）。精密量取3mL置100mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品使用液（10.337μg/mL）。

2.3.2標準溶液的制備精密量取5mL置50mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過。取續濾液作為供試品溶液。

2.4線性關系考察：精密量取對照品儲備液1mL、2mL、2.5mL、3mL、3.5mL、4mL、5mL分別置100mL量瓶中，加稀釋至刻度，搖勻，濾過。吸取5μL注入液相色譜儀，進行檢測，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。并求得線性回歸方程：A= 0.29711C+0.04467，相關系數r=0.9999。結果表明濃度在3.446μg/mL～17.228μg/mL范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。見表1：

表1　線性關系考察結果

2.5重復性試驗：取批號150106的樣品，精密量取2mL置20mL量瓶中，同供試品溶液的制備方法處理，濾過。取續濾液作為供試品溶液。按2.2色譜條件連續進樣6次，測定葛根素峰面積A。重復性試驗結果見表2。表明重復性良好。

表2　重復性試驗結果

2.6穩定性試驗：取葛根素對照品使用液（8.6141μg/mL），于室溫下放置0、1、2、4、8h后進樣測定，按2.2色譜條件測定葛根素峰面積A，結果見表3，結果表明葛根素對照品溶液在8h內較穩定。

表3　穩定性試驗結果

2.7加樣回收率試驗：取批號150106的樣品，取9份，分別置9 個100mL容量瓶中，分別精密加入3個梯度量的對照品，再精密加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL置50mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。照含量測定項下方法測定上述9份供試品溶液的葛根素含量，考察加樣回收率。結果：平均回收率為99.6%，RSD為0.26%（n=9），表明本法測定葛根素的含量準確性較高，結果見表4。

表4　加樣回收率試驗結果

2.8樣品含量測定：取本品，精密量取2mL置20mL量瓶中，精密加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL置50mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。取續濾液作為供試品溶液。按“2.2”項下色譜條件測定葛根素峰面積A，計算樣品中葛根素的含量，結果見表5。

表5　樣品含量測定結果

3　討論

3.1通過試驗，確定了小兒熱速清口服液中葛根素的含量測定方法，測定結果可靠，方法簡便，為小兒熱速清口服液的質量控制提供了依據。

3.2流動相為甲醇一水（25∶75）時，峰形較好，理論板數高，流動相組成簡單、安全。

3.3采用HPLC法測定小兒熱速清口服液中葛根素的含量，操作方法簡便、準確、重現性好。不同批號的小兒熱速清口服液的含量測定結果表明，葛根素的含量，精密度、穩定性、重現性、加樣回收率都較好，所以，RP—HPLC法可作為藥品質量分析檢驗方法用來有效控制小兒熱速清口服液的質量。

本研究建立了HPLC法測定小兒熱速清口服液含量的方法，通過大量試驗得出最優的色譜條件。本法具有樣品處理簡單、分析周期短、重現性好等優點。可作為該制劑質量控制的方法之一。

［1］中國科技大學.中藥辭海（第三卷）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，1995：699-707.

［2］許海棠，黃富嶸，廖藝.高效液相色譜法測定小兒熱速清口服液中綠原酸、黃芩苷和葛根素［J］.理化檢驗（化學分冊）.2011，47 （11）：1326-1329.

［3］中國藥典［S］．一部．2010：312-313.

［4］遲霽菲，張國剛.高效液相色譜法測定不同產地葛根中葛根素的含量［J］.中南藥學，2006，4（4）：307-309.

Content determination of“Xiao-er resuqing”oral liquid for injection

Gu FeigeiXu Xiaomei（Anhui Provincial Hospital of traditional Chinese Medicine Hefei 230031）

0bjective：To establish a method for determine the content of“Xiao-er resuqing”oral liquid For injection.Methods：Using the method of HPLC，with eighteen alkyl silane bonded silica as filler，Methanol and water（25∶75）as mobile phase，The detection wavelength was 250nm，The flow rate was 1.0mL/min。Results：Purerin sodium in 3.446μg/mL～17.228 μg/mL and the linear range，correlation coefficient r=0.9999（n=7），the average recovery rate was 99.6%（RSD=0.26%，n=9）.Conclusion：the method is accurate and reliable，reproducible.Can be used as one of the methods for quality control of this preparation.

“Xiao-er resuqing”orl liquid Purerin HPLC Content

R286.0

A

1672-8351（2016）09-0004-02