正交試驗(yàn)優(yōu)選肺積飲合劑最佳工藝研究△

黃亞彬　歐陽勇　梁瑞梅　余應(yīng)嘉　梁欣健（廣州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥學(xué)部　廣州　510800）

正交試驗(yàn)優(yōu)選肺積飲合劑最佳工藝研究△

黃亞彬歐陽勇梁瑞梅余應(yīng)嘉梁欣健（廣州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥學(xué)部廣州510800）

目的：優(yōu)選肺積飲合劑的最佳提取工藝。方法：采用紫外-可見分光光度法測定總皂苷含量作為肺積飲合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，采用L9（34）正交試驗(yàn)法考察加水量、提取時間和提取次數(shù)對肺積飲提取工藝的影響，優(yōu)選最佳提取工藝。結(jié)果：影響肺積飲提取工藝的因素中，加水量＞提取時間＞提取次數(shù)，最佳制備工藝為加8倍量水，提取1.5h，提取2次。結(jié)論：該提取工藝穩(wěn)定可控、合理可行，可作為肺積飲合劑的最佳提取工藝。

肺積飲合劑 總皂苷 正交試驗(yàn) 提取工藝

肺積飲是我院腫瘤科通過長期對肺癌患者進(jìn)行中醫(yī)辨證并總結(jié)多年肺癌臨床診療經(jīng)驗(yàn)而創(chuàng)建的組方，已在臨床應(yīng)用多年，對延長肺癌患者的生存時間，改善患者的生存質(zhì)量有顯著的作用，尤其對氣陰兩虛型肺癌療效更佳［1］。本實(shí)驗(yàn)旨在建立對肺積飲合劑的質(zhì)量控制方法，以確保該制劑的安全有效及臨床療效穩(wěn)定。

1　材料與儀器

1.1儀器：HCTP型天平（上海五久自動化設(shè)備有限公司），F(xiàn)A1004N型電子天平（大連太平洋電子有限公司），DHG-9023A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（濟(jì)南樂清醫(yī)療器械有限公司），HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司），UV2100紫外可見分光光度計(jì)（尤尼柯（上海）儀器有限公司）。

1.2材料：肺積飲組方藥材（黃芪、黨參、白術(shù)、沙參、麥冬、山海螺、薏苡仁、肺形草、十大功勞、炙甘草等）由廣州致信藥業(yè)有限公司提供，均符合《中國藥典》2015版一部標(biāo)準(zhǔn)；甲醇、乙醇、正丁醇等試劑均為分析純；黃芪甲苷（中國藥品生物制品檢定所）。

2　方法與結(jié)果

2.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)：本方臨床以湯劑應(yīng)用，方中有效成分多為皂苷，有較好的水溶性，因此本試驗(yàn)采用水煎煮提取法。正交試驗(yàn)法選取加水量、提取時間、提取次數(shù)為考察因素，每個因素設(shè)置3個水平，采用L9（34）正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，見表1。

表1　肺積飲提取因素水平表

2.2樣品制備：按照肺積飲處方量配比1/5量稱取9份藥材（肺形草3g，黃芪3g，黨參3g，白術(shù)1g，沙參3g，麥冬3g，山海螺3g、薏苡仁3g，十大功勞3g，炙甘草1g），按照正交試驗(yàn)因素水平表分別進(jìn)行提取，濾液濃縮至相對密度1.05～1.10（60℃），定容至50mL即為樣品液。

2.3L9（34）試驗(yàn)中樣品總皂苷的含量測定

2.3.1樣品供試品溶液制備：取各提取溶液50mL，用水飽和正丁醇提取3次（30、30、20mL），每次水浴65℃，30min，合并正丁醇液，再用氨試液洗2次，取正丁醇液回收至干，殘?jiān)由僭S乙醇溶解，加入已處理好的大孔吸附樹脂柱，先以水100mL洗脫，棄水液，再用20%乙醇50mL洗脫，棄醇液，最后用70%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，回收至干，用甲醇定容至10mL量瓶中，為供試品溶液。

2.3.2標(biāo)準(zhǔn)溶液制備：精密稱取黃芪甲苷10mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得到1mg·mL-1黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3.3測定方法及波長選擇［2］：精密量取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液各0.2mL置于10mL具塞試管中，水浴上揮干甲醇，精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，混勻后置65℃水浴中加熱15min，冷卻后加入冰醋酸5mL，搖勻后放置20min。以空白試劑為參比溶液，于紫外-可見分光光度計(jì)于200～800nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波長掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)最大吸收波長為530nm。

2.3.4線性關(guān)系考察：精密量取黃芪甲苷對照品溶液1mg·mL-10mL，0.5mL，1.0mL，1.5mL，2.0mL，2.5mL分別置10mL具塞試管中，按“2.2.3”項(xiàng)下方法操作，以第一份為空白對照，在530nm處分別測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，對照品質(zhì)量濃度（C，mg·mL-1）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程A=14.816C-0.0322（r=0.9993），表明黃芪甲苷對照品在0.005～0.025mg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)：在本試驗(yàn)條件下，取對照品溶液及供試品溶液，分別在室溫放置0，10，20，30，40，50，60min，依法進(jìn)行含量測定，對照品溶液吸光度RSD為0.96%，供試品溶液吸光度RSD 為1.22%，表明供試品溶液室溫放置在60min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取同一批樣品9份，按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法進(jìn)行含量測定，供試品溶液吸光度RSD為1.18%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.7樣品總皂苷的含量測定：按照“2.3.3”項(xiàng)下測定方法在530nm處測定吸收度，代入回歸方程求出供試品溶液中的總皂苷含量。對正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果詳見表2、表3。

表2　L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果

表3　評分方差分析

由表2、表3可知，3個因素的極差R大小順序?yàn)锳＞B＞C，因此，加水量對提取工藝的影響最大，其次為提取時間，提取次數(shù)的影響最小。根據(jù)K值大小判斷各因素不同水平優(yōu)劣，A2＞A3＞A1，B2＞B1＞B3，C3＞C2＞C1，但考慮到實(shí)際生產(chǎn)及經(jīng)濟(jì)效益，最終確定肺積飲合劑提取工藝為A2B2C2，即最佳提取工藝為：藥材加8倍量水，提取1.5h，提取2次。

2.4最佳工藝驗(yàn)證：按照正交試驗(yàn)所得的最佳提取工藝條件提取3批樣品，測定總皂苷提取率。結(jié)果表明，該工藝重復(fù)性好，條件穩(wěn)定可行，結(jié)果見表4。

表4　水提工藝驗(yàn)證結(jié)果

3　討論

肺積飲為我院腫瘤科經(jīng)驗(yàn)組方，益氣養(yǎng)陰，清熱化痰散結(jié)，可有效地改善氣陰兩虛型晚期肺癌患者的臨床癥狀，聯(lián)合使用放射性粒子可以提高晚期非小細(xì)胞肺癌患者的生存質(zhì)量，同時局部控制腫瘤［3］。肺積飲組方中含有較多皂苷類成分，皂苷類成分具有調(diào)節(jié)免疫、抗炎、清除氧自由基等功效，抗腫瘤作用通過多效應(yīng)、多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)干擾腫瘤細(xì)胞生長，發(fā)揮中醫(yī)藥整體調(diào)節(jié)特點(diǎn)，同時可改善患者免疫功能，減少放化療治療副作用［4～5］。目前皂苷的提取方法主要有水提、醇提、微波輔助提取法等，測定方法主要有紫外-可見分光光度法和HPLC法等，本實(shí)驗(yàn)利用大孔樹脂吸附法進(jìn)行總皂苷的提取率，其工藝條件相對穩(wěn)定，具有較好的解吸率和吸附率，并可較好地將皂苷富集純化［6］。在保留傳統(tǒng)中藥湯劑的基礎(chǔ)上，按現(xiàn)代藥劑學(xué)理論技術(shù)通過正交試驗(yàn)優(yōu)選肺積飲提取工藝，結(jié)合生產(chǎn)成本因素和功效成分含量，確定最佳提取工藝為處方藥材加8倍量水，煎煮1.5h，煎煮2次，并經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)表明該制備工藝穩(wěn)定可行、提取簡便、成本可控，可作為配制生產(chǎn)肺積飲合劑的參考依據(jù)。

［1］龍德，徐舒，王棟范，等.肺積飲對改善氣陰兩虛型晚期肺癌患者的生存質(zhì)量的臨床研究［C］.規(guī)范治療與科學(xué)評價——第五屆國際中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)交流大會暨第十四屆全國中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集（2014）.

［2］祁俊，朱應(yīng)成，劉亮鏡，等.正交試驗(yàn)優(yōu)選歸芪益氣養(yǎng)血合劑的水煎工藝［J］.中國生化藥物雜志，2015，35（10）：151-157.

［3］趙永心，徐舒，趙燕，等.肺積飲聯(lián)合碘125粒子植入治療晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床研究 ［J］.中醫(yī)藥臨床雜志，2013，25（5）：386-388.

［4］段立軍，孫博航.黃芪甲苷的研究進(jìn)展［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2011，28（5）：410-416.

［5］蔡翊，王群偉.黃芪總皂苷抗肝癌活性的研究［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2011，21（34）：4258-4260.

［6］蘇玉珂.黃芪總皂苷的提取工藝及分析方法研究［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2012，14（5）：911-912.

Optimization of Water Extraction Technology for Feijiyin Mixture by Orthogonal Test

Huang Yabin 0uyang Yong Liang Ruimei Yu Yingjia Liang Xinjian（Department of Pharmacy，Guangzhou Hospital of Integrated West and Traditional Medicine，Guangzhou 510800）

0bjective：To optimize extraction technology of Feijiyin Mixture by orthogonal test.Methods：By measuring the contents of total saponin as the quality standard of Feijiyin Mixture.The extraction conditions were optimized by orthogonal test，with the solvent volume，extraction time and extraction times as the influencing factors.Results：Among the influencing factors，solvent volume＞extraction time＞extraction times.The optimal extraction conditions were refluxing extraction for 2 times and 1.5h each time with 8 fold amount of water. Conclusion：The extraction technology is reliable and reasonable.It could provide a foundation for production and quality control of Feijiyin Mixture.

Feijiyin Mixture Total Saponin 0rthogonal Test Extraction Technology

R286.0

B

1672-8351（2016）09-0121-02

廣州市花都區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目（項(xiàng)目編號：14-HDWA-027）。