酸棗仁湯對老年失眠模型大鼠學習記憶能力及腦內神經遞質含量的影響

郭　杰，尹曉剛

（1.南陽醫學高等專科學校第一附屬醫院門診部，河南南陽　473000；2.南陽醫學高等專科學校第一附屬醫院神經內科，河南南陽　473000）

酸棗仁湯對老年失眠模型大鼠學習記憶能力及腦內神經遞質含量的影響

郭杰1＊，尹曉剛2#

（1.南陽醫學高等專科學校第一附屬醫院門診部，河南南陽473000；2.南陽醫學高等專科學校第一附屬醫院神經內科，河南南陽473000）

目的：研究酸棗仁湯對老年失眠模型大鼠學習記憶能力及腦內神經遞質含量的影響。方法：將大鼠隨機分為正常組、模型組、陽性組［艾司唑侖片，2×10-3g/（kg·d）］和酸棗仁湯低、中、高劑量組［5、10、15 g/（kg·d）］，每組10只。除正常組外，其余各組大鼠均于頸背部ih D-半乳糖+睡眠剝奪以復制老年失眠模型，造模6周后各給藥組大鼠連續ig相應藥物1周，正常組和模型組大鼠ig生理鹽水。觀察大鼠逃避潛伏期、原平臺象限游泳時間百分比、穿過原平臺位置的次數，測定大鼠腦組織中谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）和下丘腦中白細胞介素1β（IL-1β）、5-羥色胺（5-HT）含量。結果：與正常組比較，各組大鼠逃避潛伏期延長、原平臺象限游泳時間百分比降低、穿過原平臺位置的次數減少，腦組織中Glu、GABA含量增加，下丘腦中IL-1β、5-HT含量減少（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組大鼠上述指標均得到明顯改善，差異有統計學意義（P＜0.05）；與陽性組比較，酸棗仁湯中、高劑量組大鼠上述指標變化更為明顯，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論：酸棗仁湯可明顯增加老年失眠模型大鼠的學習記憶能力，且可降低腦內神經遞質含量、減輕Glu、GABA參與的遲發性神經元損害。

酸棗仁湯；老年失眠模型大鼠；學習記憶能力；神經遞質

失眠是最常見的一種睡眠障礙類型，一般指睡眠時間和（或）質量不滿足且影響白天社會功能的一種主觀體驗［1］。流行病學調查研究發現，失眠發病率呈不斷上升趨勢，且常見于老年人，其中40%～50%65歲以上的老年人都表現出失眠的相關癥狀［2］。失眠是一個復雜的過程，近年有學者研究發現神經遞質參與了睡眠機制的調節［3］。酸棗仁湯收載于《金匱要略》，由酸棗仁、甘草、知母、茯苓、川芎等5味藥材組成，具有明顯的鎮靜、催眠、抗焦慮、抗抑郁以及改善睡眠等作用［4］，但目前對其作用機制尚不明確。故在本研究中作者擬考察酸棗仁湯對老年失眠模型大鼠學習記憶能力和腦組織中谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）、5-羥色胺（5-HT）以及下丘腦中白細胞介素1β（IL-1β）含量的影響，以進一步探討酸棗仁湯的作用，為其基礎研究和臨床應用提供參考。

1　材料

1.1儀器

7180全自動生化分析儀（日本日立公司）；TGL-160臺式高速離心機（上海醫用分析儀器廠）；MP31001電子天平（上海舜宇恒平科技儀器有限公司）；Waters e2695高效液相色譜儀（美國Waters公司）。

1.2藥材、藥品與試劑

酸棗仁、甘草、知母、茯苓、川芎均來自南陽醫藥高等專科學校第一附屬醫院中藥房，經該院主任中藥師王書梅鑒定均為合格藥材；艾司唑侖片（焦作市博愛藥業有限公司，批號：20140806，規格：1 mg/片）；IL-1β酶聯免疫吸附（ELISA）試劑盒（上海星科生物科技有限公司）；5-HT ELISA試劑盒（上海遠慕生物科技有限公司）；醋酸鈉緩沖液、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.3動物

SPF級SD大鼠60只，♂，體質量（180±20）g，由北京維通利華公司提供［合格證號：SCXK（京）2007-0001］。常規飼養2周，室溫為23～25℃，相對濕度為40%～70%。

2　方法

2.1酸棗仁湯的制備[4]

稱取酸棗仁15 g、甘草3 g、知母6 g、茯苓6 g、川芎6 g，加適量冷水浸泡30 min，再以“武火”煮沸約10 min后改為“文火”慢煎30 min，煎煮2次；分別濾出藥液，將2次藥液混勻，濃縮，得每1 ml含生藥2 g的藥液，即得。

2.2實驗分組、造模與給藥

將60只健康SD大鼠隨機分為6組，即正常組、模型組、陽性組［艾司唑侖片，2×10-3g/（kg·d）］和酸棗仁湯低、中、高劑量組［5、10、15 g/（kg·d）］，每組10只。除正常組外，其余各組大鼠均于頸背部連續ih D-半乳糖［60 mg/（kg·d）］6周復制亞急性衰老模型［5］。然后將大鼠放入自制睡眠剝奪箱中給予睡眠剝奪，睡眠剝奪時間為1周［當大鼠進入眼球快速運動睡眠時相時肌張力減弱，掉入水環境中，然后會迅速爬上平臺，處于一種想睡而不能睡的狀態。實驗時保持水環境和實驗室溫度相同（均保持在22～25℃），實驗箱每日換水；睡眠剝奪從早晨6：00開始，每天1 h］，以大鼠呵欠、瞌睡、精神不振、活動量少、目光呆滯為造模成功。造模成功后，各給藥組大鼠ig相應藥物，正常組和模型組大鼠ig等量生理鹽水，連續1周。艾司唑侖片給藥劑量為人臨床用量的6倍，酸棗仁湯高、中、低劑量分別為人臨床用量的18、9、4.5倍。

2.3各組大鼠學習記憶能力的考察

給藥結束后，采用Morris水迷宮對各組大鼠進行定位航行實驗和空間探索實驗，考察大鼠的學習記憶能力。本實驗所用水迷宮為高50 cm、直徑120 cm的圓形水池，分4個象限，池中水溫控制在20～23℃。將直徑為12 cm的圓形平臺固定于某一象限，使平臺面低于水面1 cm，實驗前先將大鼠放入水中適應環境。（1）定位航行實驗：該試驗分別以4個象限的某一固定點為起點、平臺為終點，然后面向池壁將大鼠放入水池中，記錄大鼠由起點游至終點的時間，即逃避潛伏期。實驗允許最大逃避潛伏期為60 s。（2）空間探索實驗：將平臺撤去，于水池中任意一點將大鼠放入水中游泳，記錄大鼠在120 s內穿過原平臺位置的次數，并記錄大鼠在原平臺象限游泳的時間占總游泳時間的百分比。

2.4各組大鼠腦組織中Glu、GABA含量的測定

各組大鼠禁食、禁水24 h后，采用斷頭法處死。取大鼠左側腦組織，以離心半徑為10 cm、3 000 r/min離心15 min，重復操作2次，收集上清液。采用高效液相色譜法檢測腦組織中Glu、GABA含量［6］。

2.5各組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量的測定

取上述處死的大鼠，迅速剪斷延髓，將腦組織快速去除，分離出下丘腦，洗凈血液，于-80℃條件下保存。采用ELISA法測定下丘腦IL-1β、5-HT含量，具體操作按照相應試劑盒說明書進行。

2.6統計學方法

3　結果

3.1各組大鼠學習記憶能力考察結果

與正常組比較，模型組及各給藥組大鼠逃避潛伏期延長，穿過原平臺位置的次數減少，原平臺象限游泳時間百分比降低（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組大鼠逃避潛伏期縮短，穿過原平臺位置的次數增加，原平臺象限游泳時間百分比升高（P＜0.05）；與陽性組比較，酸棗仁湯中、高劑量組大鼠逃避潛伏期縮短，穿過原平臺位置的次數增加，原平臺象限游泳時間百分比升高（P＜0.05）。各組大鼠學習記憶能力考察結果見表1。

表1　各組大鼠學習記憶能力考察結果（±s，n=10）Tab 1　The learning and memory ability of rats in each group（±s，n=10）

表1　各組大鼠學習記憶能力考察結果（±s，n=10）Tab 1　The learning and memory ability of rats in each group（±s，n=10）

注：與正常組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與陽性組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal group，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05；vs. positive group，ΔP＜0.05

原平臺象限游泳時間百分比，% 36.28±1.76 26.94±3.10＊34.67±2.71＊#35.03±3.14＊#37.99±2.91＊#Δ41.63±2.58#Δ組別正常組模型組陽性組酸棗仁湯低劑量組酸棗仁湯中劑量組酸棗仁湯高劑量組劑量，g/（kg·d）2×10-35 10 15逃避潛伏期，s 36.28±1.76 54.38±2.14＊40.39±2.13＊#41.31±2.09＊#39.39±2.19＊#Δ36.03±1.58#Δ穿過原平臺位置的次數5.89±1.32 0.00±0.00＊1.94±0.34＊#1.89±0.41＊#2.63±0.37＊#Δ3.56±0.48＊#Δ

3.2各組大鼠腦組織中Glu、GABA含量測定結果

與正常組比較，模型組及各給藥組大鼠腦組織中Glu、GABA含量增加（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組大鼠腦組織中Glu、GABA含量減少（P＜0.05）；與陽性組比較，酸棗仁湯中、高劑量組大鼠腦組織中Glu、GABA含量減少（P＜0.05）。各組大鼠腦組織中Glu、GABA含量測定結果見表2。

表2　各組大鼠腦組織中Glu、GABA含量測定結果（±s，n= 10，g/L）Tab 2　The contents of Glu and GABA in cerebral tissue of rats in each group（±s，n=10，g/L）

表2　各組大鼠腦組織中Glu、GABA含量測定結果（±s，n= 10，g/L）Tab 2　The contents of Glu and GABA in cerebral tissue of rats in each group（±s，n=10，g/L）

注：與正常組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與陽性組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal group，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05；vs. positive group，ΔP＜0.05

GABA 0.24±0.05 0.42±0.08＊0.35±0.06＊#0.36±0.07＊#0.32±0.05＊#Δ0.27±0.04＊#Δ組別正常組模型組陽性組酸棗仁湯低劑量組酸棗仁湯中劑量組酸棗仁湯高劑量組劑量，g/（kg·d）2×10-35 10 15 Glu 0.28±0.06 0.59±0.14＊0.46±0.10＊#0.49±0.08＊#0.40±0.06＊#Δ0.35±0.05＊#Δ

3.3各組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量測定結果

與正常組比較，模型組各給藥組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量均減少（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量增加（P＜0.05）；與陽性組比較，酸棗仁湯中、高劑量組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量增加（P＜0.05）。各組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量測定結果見表3。

表3　各組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量測定結果（±s，n=10）Tab 3　The contents of IL-1β and 5-HT in hypothalamus of rats in each group（±s，n=10）

表3　各組大鼠下丘腦中IL-1β、5-HT含量測定結果（±s，n=10）Tab 3　The contents of IL-1β and 5-HT in hypothalamus of rats in each group（±s，n=10）

注：與正常組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與陽性組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal group，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05；vs. positive group，ΔP＜0.05

5-HT，ng/g 315.42±25.23 228.94±14.35＊259.89±16.42＊#254.48±19.48＊#276.39±15.40＊#Δ293.56±17.65＊#Δ組別正常組模型組陽性組酸棗仁湯低劑量組酸棗仁湯中劑量組酸棗仁湯高劑量組劑量，g/（kg·d）2×10-35 10 15 IL-1β，pg/ml 180.45±15.45 108.49±12.89＊143.29±15.69＊#140.39±16.42＊#156.32±18.32＊#Δ168.49±14.26＊#Δ

4　討論

中醫學認為失眠屬“不得眠”“不寐”等范疇；中醫理論認為該病實證多因邪熱擾心引起，虛證多因心失所養、陰血不足引起，故而肝血虛所致的失眠較為常見［7-8］。酸棗仁湯中酸棗仁具有養血補肝、寧心安神的作用，茯苓寧心安神，知母滋陰潤燥、清熱除煩，川芎調肝血而疏肝氣，甘草調和諸藥，故該方為治療失眠的一劑良方。艾司唑侖片是常用的一種抗失眠藥物，具有較強的鎮靜催眠作用。夏路風等［9］報道，其治療失眠癥患者的總有效率達91.83%，故筆者在本實驗中選其作為陽性對照藥物。

Morris水迷宮是一種通過強迫實驗動物游泳來學習尋找隱藏于水中平臺的操作過程，是世界上公認的較為客觀的學習記憶能力的評價方法。在本實驗中，與正常組比較，模型組大鼠的學習記憶能力明顯減弱，具體表現為避潛伏期延長、穿過原平臺位置的次數減少、原象限游泳時間百分比降低，結果表明本實驗造模成功。與模型組比較，酸棗仁湯各劑量組大鼠逃避潛伏期縮短、穿過原平臺位置的次數增加、原象限游泳時間百分比升高，提示給藥后大鼠的學習記憶得到了改善。

神經遞質是機體信息傳遞的物質基礎，同時還參與機體很多生理、病理過程，具有調節睡眠的作用［10］。機體中樞神經興奮和抑制功能失調與失眠有密切關系，其中Glu和GABA是哺乳動物中樞神經系統的重要神經遞質［6］。Glu作為興奮性氨基酸，能夠引起覺醒增多、總睡眠時間與慢波睡眠減少［11］。GABA是一種抑制性神經遞質，廣泛分布于外周神經系統和中樞神經系統，對哺乳動物中樞神經系統具有普遍的抑制作用［12］。本研究結果顯示，與模型組比較，酸棗仁湯各劑量組大鼠腦內Glu、GABA含量均顯著減少，且隨著給藥劑量的增加腦內Glu、GABA含量減少越明顯。近年研究發現，細胞因子可作用于中樞神經系統參與睡眠的調節。大鼠下丘腦中的IL-1表達存在晝夜規律，表達高峰相與睡眠高反抑制，通過外源性補充IL-1后能夠延長大鼠的快速動眼睡眠時間。5-HT神經元胞體主要集中于中縫核群，中縫核頭部的5-HT能神經元能夠參與維持和產生非快速動眼睡眠，并且5-HT神經元在覺醒時興奮性最高，興奮5-HT能神經元能夠使覺醒時間延長。本研究結果顯示，與模型組比較，酸棗仁湯各劑量組大鼠腦內IL-1β、5-HT含量均顯著增加（P＜0.05）。

綜上所述，酸棗仁湯可明顯改善老年失眠模型大鼠的學習記憶能力，其機制可能與降低腦內Glu、GABA含量，減輕Glu、GABA參與的遲發性神經元損傷，增加下丘腦IL-1β、5-HT含量有關。但其更多的可能作用機制還有待進一步研究。

［1］游秋云.老年失眠的中醫發病機制及防治探討［J］.時珍國醫國藥，2010，21（11）：2 966.

［2］鄒艷群，楊曉蘇，藺芳菊，等.失眠模型大鼠腦干γ-氨基丁酸轉運體-1表達的變化［J］.國際神經病學神經外科學雜志，2013，40（1）：14.

［3］周艷麗，葉險峰.針刺不同腧穴對失眠模型大鼠腦內細胞因子IL-1、TNF-α含量影響的實驗研究［J］.中國中醫基礎醫學雜志，2012，17（4）：419.

［4］游秋云，王平，黃攀攀，等.酸棗仁湯對老年失眠證候模型大鼠腦皮質超微結構及星形膠質細胞表達的影響［J］.中華行為醫學與腦科學雜志，2010，19（9）：827.

［5］徐智，吳國明，錢桂生，等.大鼠衰老模型的初步建立［J］.第四軍醫大學學報，2003，25（4）：312.

［6］蔣潔，趙百孝，哈略，等.不同波形電針對PCPA致失眠大鼠下丘腦5-HT和Glu、GABA含量的影響［J］.上海針灸雜志，2015，12（7）：678.

［7］侯桂平.酸棗仁湯合交泰丸治療老年失眠癥臨床觀察［J］.山西中醫，2013，29（10）：10.

［8］王燕，張崗強，張楠，等.肝膽兩益湯對失眠模型大鼠不同腦區中單胺類神經遞質的影響［J］.中國藥物應用與監測，2015，12（4）：215.

［9］夏路風，李六水，張琪，等.舒眠膠囊與艾司唑侖治療失眠癥的臨床療效比較［J］.安徽醫藥，2015，19（2）：367.

［10］涂星，郜紅利，盧映，等.熒光高效液相色譜法測定3種失眠模型大鼠腦組織氨基酸類神經遞質的含量［J］.中國實驗動物學報，2013，21（5）：74.

［11］游秋云，王平，吳麗麗，等.舒郁安神方對老年肝郁失眠證候模型大鼠學習記憶及腦組織谷氨酸、γ-氨基丁酸含量的影響［J］.中國老年學雜志，2011，31（6）：1 006.

［12］王冰梅，于江波，王永彬，等.安神補腦軟膠囊對老年失眠模型大鼠下丘腦5-羥色胺1a、5-羥色胺2a、γ-氨基丁酸表達量的影響［J］.中國老年學雜志，2015，35（17）：4 784.

（編輯：林靜）

Effects of Suanzaoren Decoction on Learning and Memory Ability and Brain Neurotransmitters Content of Senile Insomnia Model Rats

GUO Jie1，YIN Xiaogang2
（1.Outpatient Department，the First Affiliated Hospital of Nanyang Medical College，Henan Nanyang 473000，China；2.Dept.of Neurology，the First Affiliated Hospital of Nanyang Medical College，Henan Nanyang 473000，China）

OBJECTIVE：To study the effects of Suanzaoren decoction on learning and memory ability and brain neurotransmitters content of senile insomnia model rats.METHODS：Rats were randomly divided into normal group，model group，positive group［Estazolam tablet，2×10-3g/（kg·d）］and Suanzaoren decoction low-dose，middle-dose and high-dose groups［5，10，15 g/（kg·d）］，with 10 rats in each group.Except for normal group，those groups were given D-galactose ih on the back+sleep deprivation to induce senile insomnia model.6 weeks after modeling，treatment groups were given relevant medicine intragastrically for one week，and normal group and model group were given normal saline intragastrically.The escape latency，the percentage of swimming time and the time of original platform crossing were observed，and the contents of Glu and GABA in cerebral tissue were determined as well as the contents of IL-1β and 5-HT in hypothalamus.RESULTS：Compared with normal group，escape latency of rats prolonged and the contents of IL-1β and 5-HT in hypothalamus decreased，while the percentage of swimming time of original platform quadirant，the time of original platform crossing and the contents of Glu and GABA in cerebral tissue increased （P＜0.05）.Compared with model group，above index of treatment groups improved significantly，with statistical significance（P＜0.05）.Compared with positive group，the changes of above index were more significant in Suanzaoren decoction middle-dose and high-dose groups，with statistical significance（P＜0.05）.CONCLUSIONS：Suanzaoren decoction could markedly enhance the learning and memory ability of senile insomnia model rats，and reduce neurotransmitters content and relieve the delayed neuronal damage which led by Glu and GABA.

Suanzaoren decoction；Senile insomnia model rats；Learning and memory ability；Neurotransmitter

R285

A

1001-0408（2016）22-3085-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.22.18

＊主治中醫師。研究方向：神經內科。E-mail：nywx@163.com

副主任醫師，碩士。研究方向：神經內科。電話：0377-63328308

2016-01-16

2016-06-25）