正交試驗法優選鮮切太白黃精酒蒸炮制工藝△

孫靜，宋藝君，王昌利，張祺嘉鈺，張欣，張小飛，蘇卓

(陜西中醫藥大學，陜西 咸陽 712046)

·中藥工業·

正交試驗法優選鮮切太白黃精酒蒸炮制工藝△

孫靜，宋藝君*，王昌利，張祺嘉鈺，張欣，張小飛，蘇卓

(陜西中醫藥大學，陜西 咸陽 712046)

目的：優選鮮切太白黃精的最佳酒蒸工藝。方法：以黃精多糖、水浸出物、醇浸出物和外觀性狀為指標，采用正交試驗法考察蒸制時間、加酒量、潤制時間、燜制時間4個因素，優選鮮切太白黃精炮制工藝。結果：鮮切太白黃精最佳酒蒸工藝為取黃精，加30%黃酒，潤制6 h，蒸制14 h，燜制6 h，取出，切4 mm厚片，干燥。結論：優選得到的鮮切太白黃精酒蒸炮制工藝穩定，可為其產地加工炮制一體化技術提供試驗依據。

太白黃精；多糖；正交試驗

黃精為百合科植物滇黃精PolygonatumkingianumColl.et Hemsl.、黃精PolygonatumsibiricumRed.或多花黃精PolygonatumcyrtonemaHua的干燥根莖。按形狀不同，習稱“大黃精”“雞頭黃精”“姜形黃精”。黃精具補氣養陰、健脾、潤肺、益腎的功能[1]，主要含有多糖、甾體皂苷、蒽醌、氨基酸等成分。生黃精具有麻味，刺人咽喉，蒸后補脾、潤肺、益腎的功能增強，并可除去麻味，同時外觀顏色也由淡黃色或黃棕色變為棕褐色至黑色。黃精酒制可以助其藥勢，使其滋而不膩，更好發揮補益作用，故臨床上多選用酒黃精。

傳統酒黃精是采用黃精干燥根莖作為原料來炮制，本課題研究黃精產地加工炮制一體化技術，故采用新鮮黃精直接切片后酒蒸。本研究在前期預實驗和文獻查閱的基礎上，采用L9(34)正交試驗，考察蒸制時間、加酒量、潤制時間、燜制時間4個因素，優選新鮮黃精的最佳酒蒸工藝，為黃精產地加工炮制一體化技術提供試驗依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

U-3010紫外可見分光光度儀(日本日立公司)；Sartorius 電子天平(1/10 萬，德國)；ST-803型切片機(瑞安市賽特機電有限公司)；KQ-400KDE型高功率數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DHG-9140電熱恒溫鼓風干燥箱(上海一恒科技有限公司)。

1.2 試藥

雞頭黃精藥材采自陜西太白山，經陜西中醫藥大學藥學院王繼濤教授鑒定為百合科植物黃精PolygonatumsibiricumRed.的新鮮根莖。新鮮黃精除去須根，搶水洗，稍晾，切厚片，酒蒸。

葡萄糖對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110833-200904)；黃酒(浙江紹興縣第三酒廠，批號20141202)；硫酸、0.2%蒽酮-硫酸試液、乙醇等試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 黃精多糖的測定

2.1.1 對照品溶液的制備 取經105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品33 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL中含無水葡萄糖0.33 mg)。

2.1.2 供試品溶液的制備 取60 ℃干燥至恒重的本品細粉約0.25 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過。殘渣用80%熱乙醇洗滌3次，每次10 mL，將殘渣及濾紙置燒瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過。殘渣及燒瓶用熱水洗滌4次，每次10 mL，合并濾液與洗液，放冷，轉移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取1 mL置10 mL具塞干燥試管中，照按2.1.3項下方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中含無水葡萄糖的重量(mg)，計算即得。

2.1.3 線性關系考察 精密量取對照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分別置10 mL具塞刻度試管中，各加水至2.0 mL，搖勻。在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，搖勻，放冷后置水浴中保溫10 min，取出，立即置冰水浴中冷卻10 min，取出，以相應試劑為空白。照紫外-可見分光光度法(通則0401)，在582 nm波長處測定吸光度。以濃度(X)為橫坐標，吸光度(Y)為縱坐標作圖，得回歸方程：Y=7.518 1X+0.163 3，r=0.999 5。線性范圍為0.016 2～0.195 0 mg。

2.1.4 精密度試驗 取同一供試品溶液，按2.1.3項下方法顯色后測定，重復測定6次，記錄吸光度。結果吸光度RSD=0.04%，表明本方法精密度良好。

2.1.5 重復性試驗 取同一樣品6份，每份0.25 g，精密稱定，按2.1.2項下方法制成供試品溶液，每份吸取1 mL，按2.1.3項下方法顯色后測定，記錄吸光度。結果RSD=2.10%，表明本方法重復性良好。

2.1.6 穩定性試驗 取同一供試品溶液，按2.1.3項下方法顯色后，分別在0、10、20、30、40 min時測定吸光度。結果RSD=0.48%，表明供試品溶液在40 min內基本穩定。

2.1.7 加樣回收率試驗 取已知黃精多糖含量的樣品6份，每份0.25 g，精密稱定，分別加入一定量葡萄糖對照品溶液，按照2.1.2項下方法制備并測定，計算回收率為98.69%，RSD=1.03%，表明本法回收率良好。結果見表1。

表1 加樣回收率試驗

2.2 水溶性浸出物測定

取供試品約2 g，精密稱定，置250 mL錐形瓶中，精密加水100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量(%)。

2.3 醇溶性浸出物測定

取供試品約2 g，精密稱定，置250 mL的錐形瓶中，精密加稀乙醇100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過。精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。以干燥品計算供試品中醇溶性浸出物的含量(%)。

2.4 外觀性狀評分標準

參照2015版《中華人民共和國藥典》一部黃精性狀項下規定，確定評分。黑色，計1.0分；棕褐色，計0.8分；棕色，計0.5分。嚼之黏性足，微有酒香氣，計1.0分；嚼之有黏性，酒香氣若有若無，計0.8分；嚼之無黏性，無酒香氣，計0.5分。味甜、無口舌麻木感，計1.0分；稍甜、稍有口舌麻木感，計0.8分；甜味淡、有口舌麻木感，計0.5分。

2.5 酒蒸太白黃精正交試驗

在單因素考察和文獻查閱的基礎上，采用L9(34)正交試驗考察蒸制時間(A)、加酒量(B)、潤制時間(C)、燜制時間(D)4個因素，每個因素3個水平，以飲片外觀性狀、多糖、浸出物的綜合評分為評價指標，優選太白黃精酒蒸工藝。因素水平見表2。

表2 因素水平表

綜合評分標準：為客觀反映酒蒸黃精工藝中各因素對黃精質量的影響，本試驗將外觀性狀及黃精功能相關成分(黃精多糖)以及浸出物含量作為評價指標，采用綜合評分法評定。因黃精多糖是黃精的主要有效成分，且為2015版《中華人民共和國藥典》一部規定的黃精的指標成分，又因外觀性狀、浸出物含量也對黃精的質量評價具有重要意義，因而暫定綜合評分=(外觀性狀評分/最高外觀性狀評分)×20+(黃精多糖含量/黃精多糖最高含量)×50+(水浸出物含量/水浸出物最高含量)×15+(醇浸出物含量/醇浸出物最高含量)×15。結果分別見表3和表4。

由極差R值分析可知，各因素作用主次順序為A>D>B>C，蒸制時間影響最大，燜制時間次之，其次是加酒量，最后是潤制時間。最佳工藝為A2B3C1D2。方差分析結果顯示，P值均小于0.01，4個因素均為主要影響因素。因而初步認為最佳炮制工藝：取黃精，加30%黃酒潤6 h，蒸10 h，燜6 h，取出，切4 mm厚片，干燥。

表3 正交試驗設計表及結果(n=2)

表4 方差分析表

注：F0.01(2，9)=8.02。

2.6 驗證試驗

按照上述最佳的炮制工藝，取黃精10 kg，平行制備3份黃精樣品。取樣測定蒸制品中黃精多糖的含量、浸出物含量，并對外觀性狀進行評分。見表5。

表5 酒黃精最佳炮制工藝驗證試驗

結果表明，確定的工藝操作簡便，合理可控。

3 討論

黃精由于含有大量的粘液質和糖分，在炮制過程中，除了一般的潔凈處理外，要防止用水浸泡，以防有效成分流失。因此，藥材的軟化以燜潤為宜。不管采用何種輔料炮制，都必須使輔料全部被吸盡，內無干心，以便最大限度地發揮藥物的治療作用[2]。

外觀質量評價是傳統意義上的中藥飲片質量標準，同時是目前單一化學成分和化學部位不能替代的評價標準[3]，因此將其作為正交試驗的指標之一。黃精多糖是黃精的主要藥效成分，具有延緩衰老、降血糖、降血脂、調節免疫、防止動脈粥樣硬化、抗腫瘤等藥理作用[4-8]，故將其作為評價指標之一。

本試驗僅從外觀性狀、化學成分和浸出物的角度優選太白黃精酒蒸炮制工藝，在以后的研究中，還應該采用聯合化學成分、指紋圖譜、藥效等多指標來綜合評價炮制工藝，以便更好地適用于臨床。

[1] 國家藥典委員會.《中華人民共和國藥典》：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015.

[2] 萬鳳英，顧元貴.對中藥黃精炮制歷史沿革的探討[J].時珍國醫國藥，1996，7(1)：46-48.

[3] 李群，王瑾，張會敏.正交試驗法優選桑白皮蜜炙工藝[J].中草藥，2013，44(3)：286-290.

[4] 賀?；ǎ瑮钤?，王爽，等.不同蒸制方法和時間對黃精中多糖含量的影響[J].中藥材，2009，32(6)：861-862.

[5] 張瑩，鐘凌云.炮制對黃精化學成分和藥理作用影響研究[J].江西中醫學院學報，2010，22(4)：77-79.

[6] 徐兵兵，于勇杰，吳帆，等.黃精多糖研究綜述[J].中國野生植物資源，2015，34(4)：38-46.

[7] 李麗，田麗娜，任振興，等.黃精多糖的結構分析及功能活性研究進展[J].中國實驗方劑學雜志，2015，21(15)：231-234.

[8] 時曉娟，李朋收，魏穎，等.黃精多糖提取工藝及藥理作用研究進展[J].中醫藥導報，2015，21(23)：103-105.

OptimizationofWine-steamingProcessingTechnologyofFreshCutTaiBaiPolygonatiRhizomabyOrthogonalDesign

SUNJing，SONGYijun*，WANGChangli，ZHANGQijiayu，ZHANGXin，ZHANGXiaofei，SUZhuo

(ShaanxiUniversityofChineseMedicine，Xianyang712046，China)

Objective：To optimize the best wine-steaming processing for Tai Bai Polygonati Rhizoma.Methods：The orthogonal test was used to investigate the effects of steaming time，wine volume，infiltration time，stuffy time on the polysaccharide，water extract，alcohol extract and appearance，the process was optimized accordingly.Results：The optimal wine-steaming process for Polygonati Rhizoma was as follows：Polygonati Rhizoma was subjected to covered moistening 6 h with 30% yellow wine，steaming 14 h，stewing 6 h，and then taken out，cut into 4 mm thick slices，and dried.Conclusion：The optimized wine-steaming process of Polygonati Rhizoma is stable，it can provide the experimental basis for its origin processing and integration technology.

Tai Bai Polygonati Rhizoma；polysaccharide；orthogonal test

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.4.022

2015-07-24)

陜西省教育廳重點實驗室科研計劃項目(No.14JS023)

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宋藝君，講師，研究方向：中藥飲片規范化研究；E-mail：songyijun200506@126.com