市售關黃柏藥材質(zhì)量及微量元素特征分析△

黃少雄，張志鵬，陳瑤，張昭

(中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所 中草藥物質(zhì)基礎與資源利用教育部重點實驗室，北京 100193)

市售關黃柏藥材質(zhì)量及微量元素特征分析△

黃少雄，張志鵬，陳瑤，張昭*

(中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所 中草藥物質(zhì)基礎與資源利用教育部重點實驗室，北京 100193)

目的：明確目前市售關黃柏藥材質(zhì)量是否因來源變化而產(chǎn)生變化。方法：采用高效液相色譜法(HPLC)分別檢測野生、市售關黃柏樣品中鹽酸黃柏堿、木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿等5種生物堿成分的含量，利用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法(ICP-AES)測定關黃柏樣品中鈣(Ca)、銅(Cu)、鐵(Fe)、鉀(K)、鎂(Mg)、錳(Mn)、鈉(Na)、磷(P)、硫(S)、鋅(Zn)等10種微量元素含量，并對兩組藥材進行比較。結果：野生關黃柏與市售關黃柏生物堿含量無明顯差異，鈣(Ca)、鐵(Fe)、鉀(K)、鎂(Mg)、錳(Mn)、硫(S)等微量元素含量存在差異，部分市售關黃柏S含量較高。結論：野生與市售關黃柏質(zhì)量不能等同。

關黃柏；藥材質(zhì)量；生物堿；微量元素

關黃柏為蕓香科植物黃檗PhellodendronamurenseRupr.除去粗皮后的干燥樹皮，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡等作用[1]。臨床上主要用于治療濕熱瀉痢、黃疸、帶下、熱淋、痔漏、盜汗、遺精、骨蒸勞熱、風疹瘙癢等病癥[2]。關黃柏作為藥材流通中的大宗藥材，其需求量大且應用廣泛，是眾多新藥、特藥、中成藥的成分，如牛黃上清丸、三黃片、知柏地黃丸等[3]。歷來，關黃柏藥材主要來源于東北三省的野生資源，20世紀后半葉野生資源在歷經(jīng)長年嚴重破壞后近于衰竭，1999年黃檗被列為國家二級瀕危植物[4]。近年來，關黃柏需求量逐年攀升，2013年已由2001年的300 t上升至2000 t左右，然而國內(nèi)產(chǎn)量逐年銳減，2013年已由2000年的8000 t下降至350 t左右[5]，且政府加大對野生黃檗的保護力度，東北三省已很少有關黃柏進入市場。本課題組于2013—2015年間對東北各大產(chǎn)區(qū)34個地點進行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)在政府強力保護及法律法規(guī)制約下，關黃柏各基層流通渠道已形成藥農(nóng)不敢采、藥販無處收，鄉(xiāng)鎮(zhèn)縣收購站無貨源的局面。另一方面，關黃柏人工栽培發(fā)展滯后，其生長周期長，需10～15年才可剝皮利用，且種植效益低，低于種糧及其他林木，少有農(nóng)戶種植[5-6]。因此，在市場需求持續(xù)攀升、國內(nèi)產(chǎn)地無貨可供的局面下，我國每年大量進口關黃柏，甚至目前市場上流通的關黃柏幾乎完全依賴于國外資源[6-7]。綜上可知，市售關黃柏的傳統(tǒng)產(chǎn)地已經(jīng)發(fā)生了改變。研究表明，產(chǎn)地是影響中藥材質(zhì)量的重要因素，面對關黃柏傳統(tǒng)產(chǎn)地的改變，有必要對目前市售藥材的質(zhì)量進行了解，并與傳統(tǒng)國產(chǎn)藥材(東北野生關黃柏)質(zhì)量進行比較評價。

關黃柏的化學成分主要有生物堿、檸檬苦素、酚酸類、三萜類、木脂素類以及香豆素類等，生物堿類成分是關黃柏的主要藥效成分之一[8]。2015版《中華人民共和國藥典》將鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀等生物堿成分作為關黃柏含量測定成分。現(xiàn)代研究表明，微量元素是中藥藥效物質(zhì)基礎之一，會影響藥物的療效，對中藥的質(zhì)量控制有重要作用，且可以通過合理的數(shù)據(jù)處理對中藥進行鑒別[9-11]。本實驗利用高效液相色譜法測定國產(chǎn)野生及市售關黃柏藥材中鹽酸黃柏堿、木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿等5種生物堿成分含量；利用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法測定鈣(Ca)、銅(Cu)、鐵(Fe)、鉀(K)、鎂(Mg)、錳(Mn)、鈉(Na)、磷(P)、硫(S)、鋅(Zn)10種微量元素成分含量，并對兩類不同來源的藥材進行比較分析。研究旨在評估市售關黃柏藥材質(zhì)量及微量元素特征，及藥材來源變化對藥材質(zhì)量的影響，以期為中成藥生產(chǎn)及臨床用藥提供必要的質(zhì)量及安全保障。

1 材料與儀器

1.1材料

實驗所用8份野生關黃柏樣品于2014年8—9月分別采集于遼寧省撫順市馬圈子鄉(xiāng)(Y1)、遼寧省新賓縣葦子峪鎮(zhèn)(Y2)、吉林省通化縣三棵樹鎮(zhèn)(Y3)、吉林省樺甸縣紅石鎮(zhèn)(Y4)、吉林省安圖縣永清鎮(zhèn)(Y5)、吉林省蛟河市龍鳳鄉(xiāng)(Y6)、黑龍江省海倫市紅光農(nóng)場(Y7)、黑龍江省海林縣三部落林場(Y8)；8份市售關黃柏樣品于2015年9月分別在醫(yī)院、藥店、藥材市場等地購買，來源為：河南本草國藥館(S1)、張仲景大藥房(S2)、河南省醫(yī)藥超市(S3)、保定眾惠堂(S4)、亳州中藥材市場(S5)、安國中藥材市場(S6)、北京西苑醫(yī)院(S7)、北京大學第三醫(yī)院(S8)。所有樣品經(jīng)中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所張昭研究員鑒定為關黃柏，憑證標本保存于中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所。

1.2儀器與試劑

儀器：高效液相色譜儀(Waters2695)，二極管陣列紫外檢測器(Waters2996)，AgilentZORBAXSB-C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(IRISIntrepidIIXSP，美國Thermo公司)。

試劑：鹽酸黃柏堿、木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿對照品(天津馬克生物技術有限公司)，全定量分析標準溶液混標1(K-7664，Mn-2576，Na-5895，P-1782，S-1820)、全定量分析標準溶液混標2(Cu-3247，F(xiàn)e-2599，Mg-2852，Zn-2138)、全定量分析標準溶液混標3(Ca-1840)(均購自上海甄準生物科技有限公司)，甲醇、乙腈(色譜純，Honeywell)，乙酸(色譜純，天津光復精細化工研究所)，乙酸銨(分析純，西隴化工股份有限公司)，硝酸(MOS級，德國默克)，高氯酸(優(yōu)質(zhì)級，德國默克)，超純水(≥18.2mΩ，Milli-QDirect8型水純化系統(tǒng))。

2 方法

2.1測定方法

鹽酸黃柏堿、木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量采用高效液相色譜法進行測定，色譜條件及方法參考文獻[12]；Ca、Cu、Fe、K、Mg、Mn、Na、P、S、Zn等10種微量元素含量采用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法測定，具體方法參考文獻[13]。

2.2數(shù)據(jù)分析方法

運用SPSS21.0及GraphPadPrism5.01軟件，進行成組t檢驗或非參秩和檢驗。參考文獻[14]，將實驗所測微量元素按原子序數(shù)排序，Ca的含量縮小100倍，K的含量縮小10倍，Cu的含量擴大100倍，F(xiàn)e、Mn、Zn的含量擴大10倍，使各元素含量至同一數(shù)量級，分別繪制各樣品微量元素含量分布曲線。

3 結果與分析

3.1生物堿含量測定

經(jīng)檢測，各樣品中鹽酸黃柏堿、木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量見表1。根據(jù)《中華人民共和國藥典》(《中國藥典》)2015年版規(guī)定，關黃柏干燥品中鹽酸小檗堿含量不得少于0.60%，鹽酸巴馬汀含量不得少于0.30%。各樣品中鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀的含量均高于規(guī)定值，符合《中國藥典》標準。根據(jù)實驗數(shù)據(jù)，分別對野生、市售樣品中5種生物堿及生物堿總量進行統(tǒng)計學分析，如圖1。結果顯示5種生物堿及總量P值均>0.05，說明野生、市售關黃柏樣品在生物堿各組分及總量含量上無統(tǒng)計學差異。

表1 關黃柏中5種生物堿成分含量 (%)

注：A.鹽酸黃柏堿；B.木蘭花堿；C.鹽酸藥根堿；D.鹽酸巴馬汀；E.鹽酸小檗堿；F.生物堿總和。圖1 野生與市售關黃柏中5種生物堿及總量分析

3.2微量元素含量測定

關黃柏樣品中Ca、Cu、Fe、K、Mg、Mn、Na、P、S、Zn10種微量元素含量測定結果見表2，分別繪制野生、市售關黃柏微量元素含量分布曲線，如圖2。由圖2可知，各野生關黃柏樣品中微量元素含量較為穩(wěn)定，市售關黃柏樣品之間微量元素含量存在差異，其中S2、S7、S8等樣品中S含量與野生關黃柏樣品處于一個水平，約為600mg·kg-1；S1、S3、S4、S5、S6等樣品中S含量偏高，最高值2570mg·kg-1(S3)比市售樣品最低值660mg·kg-1(S2)高出近3倍。分別對野生、市售樣品中10種微量元素含量進行統(tǒng)計學分析，如圖3。結果顯示，Ca、Fe、K、Mg、Mn、S6種元素含量存在差異。

表2 關黃柏中10種微量元素含量 /mg·kg-1

注：A.野生關黃柏；B.市售關黃柏。圖2 關黃柏樣品微量元素含量分布曲線

注：A.Ca；B.Cu；C.Fe；D.K；E.Mg；F.Mn；G.Na；H.P；I.S；J.Zn。圖3 野生與市售關黃柏中10種微量元素分析

4 討論

研究表明中藥材質(zhì)量對中藥的臨床效果有直接影響[15]，因此關黃柏質(zhì)量是否因來源的變化而發(fā)生改變亟待研究。本實驗以鹽酸黃柏堿、木蘭花堿、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿等5種生物堿成分為指標性成分，對野生及市售關黃柏樣品進行對比，結果表明，盡管不同來源的野生、市售關黃柏樣品中生物堿含量不盡相同，但均能達到《中國藥典》標準，且無統(tǒng)計學差異。結果表明雖然目前市售關黃柏藥材來源發(fā)生改變，但其生物堿含量與我國野生關黃柏等同。

微量元素是一切中藥的基本成分，是中藥有效藥成分的核心組分[16]。實驗結果表明，野生、市售樣品Ca、Fe、K、Mg、Mn、S等6種微量元素存在差異，說明市售關黃柏微量元素含量與野生不能等同，與其他研究者提供的大樣本野生關黃柏微量元素數(shù)據(jù)的比較支持了這一結論[17]。根據(jù)圖2可看出，市售樣品S、Fe、Cu、Zn含量差別可達數(shù)倍，一定程度上說明，目前市場上流通的關黃柏微量元素含量特征不穩(wěn)定。單秀明等[18]測定了市場流通中的100類中藥材二氧化硫殘留量，其中黃柏為601mg·kg-1，超出國家食品藥品監(jiān)督管理總局規(guī)定的150mg·kg-1的限度。本實驗中部分市售關黃柏S含量較高，平均高出野生關黃柏1700mg·kg-1，推測這些市售關黃柏樣品在藥材貯藏過程中采用了硫熏防蟲的方法。硫含量超標可能危害患者身體健康，建議有關部門加強關黃柏在加工、儲存、流通等環(huán)節(jié)的監(jiān)管，保證大眾用藥安全。

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AnalysisofQualityandTraceElementsCharacteristicinCommerciallyAvailableCortexPhellodendriAmurensis

HUANGShaoxiong，ZHANGZhipeng，CHENYao，ZHANGZhao*

(KeyLaboratoryofBioactiveSubstancesandResourcesUtilizationofChineseHerbalMedicine，MinistryofEducation/InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalSciences，PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193,China)

Objective：To clear whether the quality of the current commercially available Cortex Phellodendri Amurensis would change along with the change of sources.Methods：The collected wild and commercially available herbs were used as test materials，and the content of phellodendrine chloride，magnoflorine，jatrorrhizine hydrochloride，palmatine hydrochloride and berberine hydrochloride were determined by HPLC.Besides，the content of Ca，Cu，F(xiàn)e，K，Mg，Mn，Na，P，S，Zn were also determined by ICP-AES.Results：There were no significant differences between wild and commercially available Cortex Phellodendri Amurensis in the content of five alkaloids，but the content of Ca，F(xiàn)e，K，Mg，Mn，S showed differences.Furthermore，commercially available Cortex Phellodendri Amurensis partially owned high content of S.Conclusion：The quality of wild and commercially available Cortex Phellodendri Amurensis is unequal.

Cortex Phellodendri Amurensis；medicinal material quality；alkaloid；trace element

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.9.013

2016-01-23)

國家自然科學基金(81473305)

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張昭，研究員，研究方向：藥用植物資源保護；Tel：(010)62899773，E-mail：zhangzhao1962@tom.com