金銀花中有機(jī)磷類農(nóng)藥測定方法建立及殘留狀況調(diào)查△

顧炎，薛健，金紅宇，馬雙成

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；2.中國食品藥品檢定研究院，北京 100050)

金銀花中有機(jī)磷類農(nóng)藥測定方法建立及殘留狀況調(diào)查△

顧炎1，薛健1，金紅宇2，馬雙成2

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京100193；2.中國食品藥品檢定研究院，北京100050)

目的：了解金銀花中有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留狀況，并在此基礎(chǔ)上提出具有針對性的監(jiān)管建議。方法：建立了GC-FPD同時(shí)測定54種有機(jī)磷類農(nóng)藥的方法，并對60個(gè)批次的金銀花樣品進(jìn)行測定，對測定結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果：60個(gè)批次的樣品共有23個(gè)檢出含有有機(jī)磷類農(nóng)藥；方法涉及的54種有機(jī)磷類農(nóng)藥，共檢出敵敵畏、馬拉硫磷、毒死蜱和水胺硫磷4種。檢出率最高的為毒死蜱(38.3%)，其余的3種農(nóng)藥均只有個(gè)別樣品有檢出。毒死蜱的檢出濃度也相對較高。結(jié)論：金銀花中多數(shù)有機(jī)磷類農(nóng)藥的總體檢出率不高，但毒死蜱檢出率較高，且檢出濃度也相對較大，需要重點(diǎn)監(jiān)控。

金銀花；有機(jī)磷農(nóng)藥；中藥材；殘留狀況；GC-FPD

有機(jī)磷農(nóng)藥是一類高毒殺蟲劑，目前該類農(nóng)藥中毒已成為嚴(yán)重的健康問題之一，每年導(dǎo)致的死亡人數(shù)約20萬[1]。但是由于其具有廉價(jià)、高效以及低生物累積性等優(yōu)點(diǎn)，仍有不少種類被廣泛應(yīng)用[2]。為保障安全，該類農(nóng)藥的使用規(guī)范和殘留控制顯得尤為重要。

金銀花種植過程中蟲害嚴(yán)重，有機(jī)磷類殺蟲劑的使用較為普遍，近年來金銀花農(nóng)藥殘留測定的報(bào)道中也時(shí)有該類農(nóng)藥檢出[3-5]。但是，目前大部分報(bào)道中涉及的樣品量都比較少，對金銀花中有機(jī)磷類農(nóng)藥的殘留狀況很難有全面的認(rèn)識。為進(jìn)一步了解金銀花中有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留狀況，本研究建立了測定金銀花中54種有機(jī)磷農(nóng)藥的方法，對金銀花中有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留狀況進(jìn)行了調(diào)查分析，并在此基礎(chǔ)上提出具有針對性的監(jiān)管建議。

1 儀器與材料

1.1儀器

6890型氣相色譜分析儀(配備火焰光度檢測器)(美國Agilent公司)、HP-5(30m×0.32mm，0.25μm)色譜柱(美國Agilent公司)、自動進(jìn)樣器G4513A(美國Agilent公司)、PL203/01型電子天平(瑞士梅特勒公司)、WH-1型渦旋混合儀(上海滬西分析儀器廠)、LABOROTA4000/4型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(德國海道夫公司)、Feb-80型離心沉淀器(金壇市醫(yī)療儀器廠)、SGK-5LB型低噪音空氣泵(北京東方精華苑科技有限公司)。

1.2試劑

分析純乙腈、甲苯(北京化工廠)；色譜純丙酮(FisherScientific)；甲胺磷、敵敵畏、敵百蟲、速滅磷、蟲螨畏、滅線磷、治暝磷、甲拌磷、甲基乙拌磷、巴胺磷、特丁硫磷、內(nèi)吸磷、殺螟腈、地蟲硫磷、甲基對氧磷、氯唑磷、乙嘧硫磷、除線磷、甲基毒死蜱、甲基對硫磷、甲基立枯磷、對氧磷、皮蠅磷、殺螟松、馬拉硫磷、倍硫磷、毒死蜱、對硫磷、水胺硫磷、溴硫磷、嘧啶磷、異柳磷、稻豐散、喹硫磷、殺撲磷、乙基溴硫磷、殺蟲畏、苯線磷、碘硫磷、丙溴磷、蟲螨磷、.豐索磷、乙硫磷、三唑磷、三硫磷、敵瘟磷、噠嗪硫磷、亞胺硫磷、苯硫磷、伏殺磷 、谷硫磷、硫丙磷、乙基谷硫磷、蠅毒磷標(biāo)準(zhǔn)品(100μg·mL-1，農(nóng)業(yè)部環(huán)保所)；石墨化碳/氨基固相萃取柱[500mg，500mg·(6mL)-1，SUPELCO]。

1.3樣品

金銀花樣品信息及對應(yīng)序號如表1所示。

表1 金銀花樣品信息

注：“/”表示產(chǎn)地不確定。

2 方法

2.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制

取54種農(nóng)藥濃度為100μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)品各0.5mL，置于50mL容量瓶中，加丙酮定容至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為1000ng·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液適量，用空白提取液定量稀釋至所需濃度，搖勻，即得工作農(nóng)藥基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2樣品制備

樣品粉碎，過三號篩。準(zhǔn)確稱定1.0g金銀花樣品于10mL具塞試管中，加入乙腈5mL，渦旋提取5min，3500r·min-1離心15min，取出上清液于梨形瓶中，再用乙腈5mL提取一次，合并提取液，減壓濃縮至約1mL。

固定好石墨化碳/氨基固相萃取柱，用5mL乙腈-甲苯(3∶1)溶液預(yù)淋洗，當(dāng)液面到達(dá)柱面頂部時(shí)，將上述濃縮液加入柱中，用1mL左右乙腈洗滌3次，洗滌液加入固相萃取柱。用20mL乙腈-甲苯(3∶1)溶液洗脫，梨形瓶收集淋洗液，減壓濃縮至近干，取出到刻度試管中，加丙酮定容至1mL，進(jìn)入GC-FPD進(jìn)行分析。

2.3儀器條件

色譜柱：HP-5(30m×0.32mm，0.25μm)，DB-1701(30m×0.32mm，0.25μm)輔助定性；進(jìn)樣口溫度：250℃，不分流進(jìn)樣。檢測器溫度：250℃，氫氣流量：75mL·min-1，空氣流量：60mL·min-1；載氣為氮?dú)猓愣▔毫Γ?.71psi，進(jìn)樣量1μL。升溫程序：初始溫度100℃，以5℃·min-1升到190℃，以2℃·min-1升到200℃，以10℃·min-1升到250℃，保持14min。該條件下分離效果最好，1μg·mL-1對照品氣相HP-5及DB-1701柱色譜圖如圖1所示。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1線性關(guān)系 取1000ng·mL-154種有機(jī)磷類農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，分別配制出50、100、200、500、1000ng·mL-1的基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行GC-FPD的測定。進(jìn)樣后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以峰面積為縱坐標(biāo)，試樣濃度(ng·mL-1)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸計(jì)算。

2.4.2精密度和靈敏度 取200ng·mL-1基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，測得各農(nóng)藥的RSD值。根據(jù)各農(nóng)藥的信噪比，以信噪比(S/N)為3測得54種農(nóng)藥檢出限(LOD)；以信噪比(S/N)為10測得方法的定量限。

2.4.3加樣回收試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取金銀花樣品1.0g，分別添加0.1、0.4、1mL質(zhì)量濃度為500ng·mL-1的農(nóng)藥對照品溶液，揮干溶劑，制成50、200、500ng·g-13個(gè)添加水平樣品(每個(gè)水平3個(gè)平行)，按照2.2、2.3中的步驟進(jìn)行測定。樣品本底色譜圖如圖1所示，加樣回收結(jié)果如表2所示。

2.5樣品測定

按照2.2、2.3中的步驟，對60份樣品進(jìn)行測定。并對陽性結(jié)果進(jìn)行GC-MS確認(rèn)。

注：A.對照品 HP-5色譜圖；B.對照品DB-1701色譜圖；C.樣品本底圖；1.甲胺磷 2.敵敵畏 3.敵百蟲 4.速滅磷 5.蟲螨畏 6.滅線磷 7.治暝磷 8.甲拌磷 9.甲基乙拌磷 10.巴胺磷 11.特丁硫磷 12.內(nèi)吸磷 13.殺螟腈 14.地蟲硫磷15.甲基對氧磷16.氯唑磷17.乙嘧硫磷18.除線磷19.甲基毒死蜱 20.甲基對硫磷21.甲基立枯磷22.對氧磷 23.皮蠅磷24.殺螟松25.馬拉硫磷26.倍硫磷27.毒死蜱 28.對硫磷29水胺硫磷30.溴硫磷31.嘧啶磷32.異柳磷33.稻豐散 34.喹硫磷35.殺撲磷36.乙基溴硫磷37.殺蟲畏38苯線磷39.碘硫磷40.丙溴磷41.蟲螨磷42.豐索磷43.乙硫磷44.三唑磷45.三硫磷46.敵瘟磷47.噠嗪硫磷48.亞胺硫磷49.苯硫磷50.伏殺磷 51.谷硫磷52.硫丙磷53.乙基谷硫磷54.蠅毒磷。圖1 1 μg·mL-1 54種有機(jī)磷類農(nóng)藥對照品HP-5/DB-1701色譜圖與樣品本底色譜圖

農(nóng)藥名稱50ng·g-1200ng·g-1500ng·g-1回收率RSD回收率RSD回收率RSD甲胺磷78.36.789.92.878.33.8敵敵畏67.34.071.20.762.93.8敵百蟲92.65.988.57.089.72.1速滅磷69.37.292.12.689.23.3蟲螨畏96.73.189.52.891.62.1滅線磷97.26.892.22.890.93.1治暝磷98.110.891.03.792.41.5甲拌磷95.48.285.55.789.51.3甲基乙拌磷86.99.770.29.981.51.7巴胺磷+特丁硫磷97.511.590.64.591.41.7內(nèi)吸磷+殺螟腈97.711.891.23.493.01.4地蟲硫磷93.412.291.53.592.21.7甲基對氧磷93.09.992.65.790.53.3氯唑磷93.512.593.04.293.71.6乙嘧硫磷98.28.292.15.491.40.8除線磷103.513.990.23.392.41.5甲基毒死蜱+甲基對硫磷96.611.292.34.992.91.6甲基立枯磷97.48.293.64.793.22.5對氧磷+皮蠅磷100.29.092.64.792.52.0殺螟松96.11.694.02.792.71.7馬拉硫磷98.86.996.33.892.51.4倍硫磷89.49.087.27.291.81.1毒死蜱+對硫磷99.412.793.93.991.81.5水胺硫磷98.711.091.73.193.11.9溴硫磷91.89.492.12.393.02.1嘧啶磷97.713.092.82.592.41.7異柳磷100.28.391.95.690.71.8稻豐散+喹硫磷98.313.191.83.592.31.9殺撲磷94.410.890.63.292.91.5乙基溴硫磷94.67.091.92.991.42.0殺蟲畏107.26.794.83.890.42.4苯線磷89.910.087.59.089.24.2碘硫磷102.714.390.24.989.51.6丙溴磷92.86.691.87.189.30.5蟲螨磷98.714.495.03.694.11.9豐索磷96.910.791.04.893.01.4乙硫磷96.59.490.03.592.81.5三唑磷99.08.790.83.895.91.7三硫磷90.814.090.93.397.51.9敵瘟磷93.19.689.30.392.83.4噠嗪硫磷101.410.588.71.392.33.2亞胺硫磷93.47.088.66.491.50.3苯硫磷91.210.489.72.891.71.6伏殺磷+谷硫磷100.49.989.52.592.51.5硫丙磷107.38.6103.02.193.04.1乙基谷硫磷86.47.779.97.593.22.1蠅毒磷97.14.8101.62.492.01.4

3 結(jié)果與討論

3.1測定方法的適用性

本研究建立的測定方法選擇乙腈作為提取溶劑，主要是考慮到乙腈對有機(jī)磷類農(nóng)藥溶解性良好[6]，且對色素等成分溶出少，可以減小凈化的難度。提取方式選擇渦旋提取離心分離，不僅耗費(fèi)的溶劑量少，且縮短了前處理時(shí)間，降低了花費(fèi)的同時(shí)，也提高了測定效率。為了簡化測定，樣品凈化則采用操作簡便、且適用性廣的固相萃取法，考慮到有機(jī)磷極性以及金銀花色素含量較高的特點(diǎn)，選擇了石墨化碳-氨基固相萃取柱[7-8]。

本方法涉及的多數(shù)農(nóng)藥種類在50～500ng·mL-1線性良好，定量限小于50ng·mL-1，精密度(以RSD計(jì))均小于5%。50、200、500ng·g-13個(gè)添加水平的平均回收率分別為94.8%、90.6%、90.9%，RSD均小于15%，且整個(gè)方法操作便捷、耗時(shí)較短，適用于金銀花中有機(jī)磷類農(nóng)藥的殘留測定，符合本研究對測定方法的需求。

3.2金銀花有機(jī)磷農(nóng)藥殘留狀況

河南和山東不僅是金銀花的道地產(chǎn)區(qū)，也是金銀花的主產(chǎn)地，根據(jù)中藥材天地網(wǎng)給出的數(shù)據(jù)，2015年這兩個(gè)地區(qū)金銀花產(chǎn)量占到全國總產(chǎn)量一半以上[9]，從市場上購買的金銀花產(chǎn)地也主要集中在這兩個(gè)地區(qū)。

60個(gè)批次的樣品共有23個(gè)檢出含有有機(jī)磷類農(nóng)藥，其中1個(gè)批次樣品同時(shí)檢出3種，3個(gè)檢出2種，其余均只檢出1種。方法涉及的54種有機(jī)磷類農(nóng)藥，共檢出敵敵畏、馬拉硫磷、毒死蜱和水胺硫磷4種，檢出的最大值分別為0.353、0.383、0.504、0.031μg·g-1。檢出率最高的為毒死蜱(38.3%)，其余的3種農(nóng)藥均只有個(gè)別樣品有檢出。被檢出的4種有機(jī)磷農(nóng)藥，馬拉硫磷為低毒，毒死蜱和敵敵畏為中毒，而水胺硫磷為高毒[10]。其中毒性最高的水胺硫磷僅有1個(gè)樣品有檢出，且檢出濃度較低。而檢出率高的毒死蜱，其檢出濃度也相對較高。

3.3金銀花有機(jī)磷農(nóng)藥監(jiān)管建議

根據(jù)農(nóng)業(yè)部1586號和2032號公告，水胺硫磷和毒死蜱分別在柑橘和蔬菜上禁止使用，但在中藥材上的使用均未有明確的限制。與之相對的，這4種農(nóng)藥都未在金銀花上進(jìn)行登記，也沒有在金銀花上的安全使用研究報(bào)道。樣品中有檢出的種類，很大可能是在金銀花的實(shí)際生產(chǎn)過程中有使用的。為確保使用安全，有必要對這4種有機(jī)磷類農(nóng)藥在金銀花上的殘留動態(tài)等進(jìn)行研究，并在研究基礎(chǔ)上給出安全使用建議。

此外，目前國內(nèi)尚未有這幾種農(nóng)藥在中藥材上的最大殘留限量的規(guī)定，而沒有明確限量規(guī)定對實(shí)際監(jiān)控是極大的阻礙。因此，農(nóng)藥在中藥材上的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的制定十分迫切。對金銀花而言，尤其是檢出率和檢出濃度都比較高的毒死蜱，更是標(biāo)準(zhǔn)制定工作中需要優(yōu)先考慮的。

[1] 趙敏，陳良宏，張志剛，等.有機(jī)磷農(nóng)藥中毒機(jī)制和治療新進(jìn)展[J].中國實(shí)用內(nèi)科雜志，2014，34(11)：1064-1068.

[2] 王志超，康志嬌，史雪巖，等.有機(jī)磷類殺蟲劑代謝機(jī)制研究進(jìn)展[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2015，17(1)：1-14.

[3] 戴博，金紅宇，張華峰，等.GC-MS法測定金銀花中12種有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留量[J].中國藥師，2010，13(11)：1539-1541.

[4] 鄭雙雙，高新花，劉珂.金銀花等3種中藥材中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的測定[J].煙臺大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)與工程版，2013，26(1)：69-73.

[5] 金紅宇，王瑩，蘭鈞，等.氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定金銀花中192種農(nóng)藥多殘留[J].中國藥學(xué)雜志，2012(8)：613-619.

[6] 李家春，伍靜玲，秦建平，等.基于QuEChERS法-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的5種中藥材中35種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的快速分析[J].藥物分析雜志，2016，36(1)：122-128.

[7] 王均，曹淑瑞，張雷，等.果實(shí)類中藥材中20種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的同時(shí)測定[J].分析測試學(xué)報(bào)，2013，32(11)：1309-1315.

[8]YiX，HuaQ，LuY.DeterminationoforganophosphoruspesticideresiduesintherootsofPlatycodongrandiflorumbysolid-phaseextractionandgaschromatographywithflamephotometricdetection[J].JournalofAOACInternational，2006，89(1)：225-231.

[9] 李凌. 金銀花2015年產(chǎn)量數(shù)據(jù)[EB/OL].中藥材天地網(wǎng)(2015-08-20).http://www.zyctd.com/zixun/205/220808.html

[10] 高希武，郭艷春，王恒亮，等.新編實(shí)用農(nóng)藥手冊[M].鄭州：中原農(nóng)民出版社，2002：66，92，108，127.

MethodofDeterminationforOrganophosphorusPesticidesandResiduesInvestigateinHoneysuckle

GUYan1，XUEJian1*，JINHongyu2，MAShuangcheng2

(1.InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalScience&PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China；2.NationalInstitutesforFoodandDrugControl，Beijing100050，China)

Objective：To give some targeted suggestions for supervision and management on the basis of residual dynamics of organophosphorus pesticides in Honeysuckle.Methods：A method of determination for54organophosphorus pesticides in Honeysuckle by GC-FPD was established and60samples collected were tested.Results：23of samples had detectable residues and a total of4pesticides were identified which were dichlorvos，malathion，chlorpyrifos and isocarbophos.Chlorpyrifos had the highest detectable rate (38.8%)，while the other three ones were rarely detected.Besides，the concentration of chlorpyrifos was also relatively higher than that of the others.Conclusion：The detectable rates of organophosphorus pesticides in Honeysuckle were low generally，but both the detectable rate and concentration of chlorpyrifos were comparatively high.Therefore，more attention should be payed to chlorpyrifos in the supervisory process.

Honeysuckle；organophosphorus；traditional Chinese medicine；residual dynamics；GC-FPD

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.9.014

2016-02-29)

“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)(2014ZX09304307-002)

*

薛健，研究員，研究方向：中藥有效成分分析及農(nóng)藥殘留重金屬研究；Tel：(010)57833097，E-mail：xuejian200@sina.com