復方刺五加硫胺片質(zhì)量標準提高研究

趙萬隆，王少敏

(1.上海市青浦食品藥品檢驗所，上海 201700；2.上海市食品藥品檢驗所，上海 201203)

復方刺五加硫胺片質(zhì)量標準提高研究

趙萬隆1*，王少敏2

(1.上海市青浦食品藥品檢驗所，上海201700；2.上海市食品藥品檢驗所，上海201203)

目的：提高復方刺五加硫胺片的質(zhì)量控制標準。方法：采用薄層色譜法以異嗪皮啶為對照物質(zhì)對制劑中的刺五加浸膏進行鑒別，用高效液相色譜法測定制劑中紫丁香苷的含量。結(jié)果：薄層色譜斑點清晰，空白樣品無干擾；紫丁香苷的進樣量在0.05～10μg線性關(guān)系良好，r=1.000，3個水平的平均回收率為100.47%(n=9)，RSD為2.9%。結(jié)論：建立的方法操作簡便、專屬性強、準確可靠，可有效控制復方刺五加硫胺片的質(zhì)量。

復方刺五加硫胺片；質(zhì)量標準；紫丁香苷；異嗪皮啶

復方刺五加硫胺片原收載于國家藥品監(jiān)督管理局《國家藥品標準》(化學藥品地方標準上升國家標準第十冊)，由刺五加浸膏、維生素B1、甘油磷酸鈉和甘油磷酸鐵等制成，為機體功能調(diào)節(jié)藥。原標準僅有化學反應鑒別，無含量測定項。為了能更好地控制本品質(zhì)量，本文建立了以異嗪皮啶為對照物質(zhì)的刺五加浸膏的薄層色譜鑒別方法和紫丁香苷的高效液相色譜含量測定法，該方法操作簡便、準確可靠、專屬性強，能夠更好地控制該制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1儀器

Agilent1100Series高效液相色譜儀，包括G1314AVWD檢測器、AgilentChemStation色譜數(shù)據(jù)工作站、AgilentZobaxTC-C18(4.6mm×150mm，5μm)；AR-2140電子分析天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]；ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠)。

1.2試藥

硅膠G預制板(煙臺化學工業(yè)有限公司)；紫丁香苷對照品、異嗪皮啶對照品、刺五加對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為111574-200201，110837-200203，120991-200405)；甲醇為色譜純(MERCK公司)；其余試劑均為分析純[中國醫(yī)藥(集團)上海化學試劑公司]；復方刺五加硫胺片供試品(上海信誼萬象藥業(yè)股份有限公司，批號分別為090101，090102，090103)。

2 方法和結(jié)果

2.1薄層色譜鑒別

取本品3片，除去糖衣，研細，加甲醇20mL，超聲處理10min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取刺五加對照藥材4g，同法制成對照藥材溶液。再取異嗪皮啶對照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.2mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。另取不含刺五加浸膏的樣品同法制得陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015版四部通則0502)試驗，吸取上述4種溶液各2μL分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(6∶2∶1)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，其Rf值為0.71，而陰性對照溶液無此斑點。色譜圖見圖1。

注：1.陰性供試品；2.供試品(批號090101)；3.供試品(批號090102)；4.供試品(批號090103)；5.刺五加對照藥材；6.異嗪皮啶對照品。圖1 復方刺五加硫胺片TLC圖

2.2含量測定

2.2.1色譜條件 色譜柱：AgilentZobaxTC-C18(150mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-0.1%磷酸(15∶85)；檢測波長：265nm；流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃；進樣量：10μL。在此色譜條件下，供試品、紫丁香苷對照品及陰性對照溶液色譜圖見圖2。

注：A.紫丁香苷對照品；B.復方刺五加硫胺片供試品；C.陰性供試品。圖2 復方刺五加硫胺片中紫丁香苷含量測定HPLC圖

2.2.2供試品溶液的制備 取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細，取相當于4片的量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇20mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率：500W；頻率：59kHz)20min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3對照品溶液的制備 取紫丁香苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.1mg·mL-1的溶液，即得。

2.2.4陰性對照溶液的制備 按復方刺五加硫胺片的制備工藝制備不含刺五加浸膏的樣品，制成陰性對照溶液。

2.2.5線性關(guān)系考察 精密稱取紫丁香苷對照品適量，加50%甲醇制成質(zhì)量濃度為500μg·mL-1的對照品儲備液；再精密吸取該儲備液適量，加50%甲醇制成50μg·mL-1的對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液1、2、5、10μL和對照品儲備液2、5、10、20μL注入液相色譜儀，記錄峰面積。以進樣量X(μg)為橫坐標，峰面積Y為縱坐標，進行回歸分析，得方程Y=2186.3X+14.7，r=1.000，進樣量與峰面積線性關(guān)系良好，線性范圍為0.05～10μg(n=8)。

2.2.6精密度試驗 精密吸取質(zhì)量濃度為50μg·mL-1紫丁香苷對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，測定的峰面積的RSD為0.31%，表明精密度良好。

2.2.7穩(wěn)定性試驗 取批號090102的供試品溶液，分別在放置0、1、3、6、11、18、45h后按2.2.1項下色譜條件測定，結(jié)果紫丁香苷峰面積的RSD為0.47%，表明供試品溶液在45h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8重復性試驗 取批號090102的供試品，按2.2.2項下方法制得供試品溶液，共6份，按2.2.1項下色譜條件測定，計算供試品中紫丁香苷的含量，結(jié)果其RSD為1.1%，表明方法重復性良好。

2.2.9加樣回收率試驗 取批號090102的供試品20片，除去糖衣，精密稱定，研細，精密稱取相當于2片的量，共9份，分別精密加入質(zhì)量濃度為1.296mg·mL-1的紫丁香苷對照品溶液0.60、0.75、0.90mL，然后按2.2.2項下方法制得供試品溶液，按2.2.1項下色譜條件測定含量，計算，結(jié)果紫丁香苷的平均加樣回收率為100.47%，RSD為2.9%。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

2.2.10 系統(tǒng)適用性試驗 由于不同廠家不同型號的色譜柱存在填料及性能上的差異，為考察該方法的可行性及適用性，對Agilent Zobax TC-C18(Agilent公司，150 mm×4.6 mm，5 μm)、Kromasil C18(Akzo Nobel公司，150 mm×4.6 mm，5 μm)、Waters Symmetry C18(Waters公司，150 mm×4.6 mm，5 μm)3種色譜柱進行了比較。結(jié)果顯示，3種色譜柱得到的供試品色譜均具有與紫丁香苷對照品保留時間一致的色譜峰，3個色譜峰的拖尾因子分別為1.08、1.26和1.08，理論塔板數(shù)分別為5200、5595、6648，且分離度較好，表明該方法系統(tǒng)適用性良好。

2.2.11 樣品測定 按照上述測定方法，分別對3批樣品進行測定，結(jié)果樣品中紫丁香苷的含量分別為0.46 mg/片(批號090101)、0.45 mg/片(批號090102)、0.47 mg/片(批號090103)。

3 討論

3.1薄層色譜條件的優(yōu)化

在刺五加浸膏的薄層色譜鑒別中，分別考察了供試品的取樣量，供試品溶液、對照藥材及對照品溶液的點樣量，不同類型的硅膠G薄層板以及不同的展開溫濕度條件對色譜行為的影響。結(jié)果顯示，當供試品的取樣量為1g，點樣量為2μL時，所得到的薄層色譜斑點清晰、大小適中；不同類型的硅膠G預制板(煙臺化學工業(yè)有限公司)和硅膠G高效板(DC-FertigplattenNano-Durasil-20，德國MN)均可獲得滿意的分離效果；不同溫濕度(4、20℃，RH20%、RH75%)條件下的色譜分離效果均較好，說明溫濕度對該方法的影響較小。

3.2含量測定方法的優(yōu)化

3.2.1供試品溶液制備方法的優(yōu)化 采用單因素考察法對制備供試品溶液用的溶劑及其體積、提取時間進行了優(yōu)化。當考察某個因素時，其他兩個因素水平固定不變(50%甲醇，20mL，20min)。取約4片重的粉末，按供試品溶液的制備方法處理樣品，每個試驗平行2份。首先考察了不同溶劑(30%、50%、80%甲醇、甲醇)對紫丁香苷提取效率的影響。結(jié)果顯示，30%甲醇提取效率最高，50%甲醇與之接近，80%次之，甲醇最低。表明30%甲醇和50%甲醇均可將紫丁香苷完全提取出來，但50%甲醇得到的色譜圖中干擾峰較少，故選擇50%甲醇作為提取溶劑。

不同提取溶劑體積(10、20、30、45mL)的考察結(jié)果表明，20mL甲醇已達到最高提取效率。

不同超聲處理時間(10、20、30、45min)的考察結(jié)果表明，處理20min時樣品中的紫丁香苷已提取完全，繼續(xù)增加時間紫丁香苷的提取效率沒有增加。因此，確定的供試品溶液的制備方法為取相當于4片重的量，加入50%甲醇20mL，超聲處理20min。結(jié)果見圖3。

圖3 不同提取溶劑及體積、提取時間對樣品中紫丁香苷含量的影響

3.2.2液相色譜條件的優(yōu)化 紫外光譜掃描圖顯示，紫丁香苷在225、265nm處有最大吸收。因225nm接近末端吸收，故選擇265nm為檢測波長。考察了不同流動相系統(tǒng)對紫丁香苷色譜峰的分離效果，結(jié)果顯示，甲醇-水(80∶20)得到的紫丁香苷的色譜峰對稱性稍差，且分離度差，而甲醇-0.1%磷酸溶液(85∶15)系統(tǒng)得到的色譜峰對稱，且與其他色譜峰分離良好，保留時間適中，故選擇其作為流動相。

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QualityStandardofFufangCiwujiaLiuanTablets

ZHAOWanlong1*，WANGShaomin2

(1.ShanghaiQingpuFoodandDruginspectionoffice，Shanghai201700，China；2.ShanghaiFoodandDruginspectionoffice，Shanghai201203，China)

Objective：To improve the quality standard of Fufang Ciwujia Liuan tablets.Methods：The principal bioactive constituent of isofraxidin in Acanthopanax Extract was analyzed qualitatively by TLC，and the contents of syringing in Acanthopanax Extract were determined by HPLC.Results：The spots on TLC chromatograms were clear and accurate.The linear ranges of syringing was0.05～10μg，the average recoveries at3levels was100.47% (RSD=2.9%).Conclusion：The methods are convenient，reliable and accurate for the quality control of Fufang Ciwujia Liuan tablets.

Fufang Ciwujia Liuan tablets；quality standard；syringin；isofraxidin

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.9.026

2015-12-28)

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趙萬隆，主管藥師，研究方向：中藥分析及其質(zhì)量控制；E-mail：somebodyjob@163.com