畬藥擱公扭根的質量標準研究

王偉影，毛菊華

(麗水市食品藥品檢驗所，浙江 麗水 323000)

畬藥擱公扭根的質量標準研究

王偉影，毛菊華*

(麗水市食品藥品檢驗所，浙江 麗水 323000)

目的：完善畬藥“擱公扭根”的質量標準。方法：運用顯微鑒別法、高效液相色譜法分別對擱公扭根的粉末顯微特征、指標性成分(沒食子酸)進行測定；參照《中華人民共和國藥典》2010版附錄相關方法對擱公扭根水分、總灰分和醇溶性浸出物進行測定。結果：擱公扭根粉末顯微特征明顯；沒食子酸的線性范圍為3.881～38.81 μg·mL-1(r=0.999 7)，平均加樣回收率為99.47%(n=6)，RSD=1.22%。14批擱公扭根樣品的測定結果表明，沒食子酸的含量為0.28%～1.46%，水分、總灰分和醇溶性浸出物分別為5.0%～10.2%、1.4%～3.6%和14.4%～41.8%。結論：研究所得方法簡便、準確，可用于擱公扭根的質量控制。

畬藥；擱公扭根；質量標準；沒食子酸；高效液相色譜法

畬藥擱公扭根為薔薇科植物掌葉覆盆子RubuschingiiHu的干燥根及根莖[1]，主要分布于浙江、江蘇、安徽、江西和福建等華東地區，多生長于低海拔至中海拔的林緣、山坡、灌叢、路邊和溝邊等土壤較濕潤地段。畬醫常以掌葉覆盆子根入藥，名為“擱公扭根”，認為其可祛風止痛、明目退翳、和胃止嘔，主要用于結核性瘺管，結核病所致的脊柱壓迫癥等，在畬醫中應用較為廣泛[1-2]。《浙江省中藥炮制規范》2005年版以畬藥名“擱公扭根”收載該品種，但無具體檢驗項目[3]。筆者從鑒別(粉末顯微特征)、檢查(水分、總灰分)、含量測定(高效液相色譜)方面系統地研究擱公扭根的質控方法，以期收入新版《浙江省炮制規范》，有效評價擱公扭根的質量。

1 儀器與材料

1.1 儀器

OLYMPUS系統顯微鏡(奧林巴斯公司)；Memmert UNE400自然對流烘箱(德國Memmert有限公司)；程控箱式電爐SXL-1008(上海精宏實驗設備有限公司)；Agilent 1260高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；二極管陣列檢測器(美國安捷倫公司)；Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)(美國安捷倫公司)；XS105DU電子天平(瑞士梅特勒公司)；水浴鍋(上海梅香儀器公司)。

1.2 試藥

沒食子酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110831-200803，含量：90.1%)；乙腈和磷酸為色譜純(Merck)，水為娃哈哈純凈水。

擱公扭根藥材：自行采集4批樣品，經本所李水福主任中藥師鑒定為薔薇科植物掌葉覆盆子RubuschingiiHu的根及根莖，干燥，分別粉碎，過二號篩，備用。樣品信息見表1。

表1 擱公扭根藥材樣品信息

2 方法與結果

2.1 顯微鑒別

2.1.1 方法 取適量藥材粉末過五號篩后按粉末制片法制作粉末片，在顯微鏡下觀察和照相。

2.1.2 結果 本品粉末黃白色至淺棕色。淀粉粒甚多，單粒類球形、三角狀卵形或不規則形，直徑 3～18 μm，臍點點狀、裂縫狀或人字狀；復粒2～8分粒組成。石細胞單個或成群散在，類方形、類圓形或長橢圓形。具緣紋孔導管散在。纖維較多，有的含黑色分泌物。木栓細胞長方形，壁呈連珠狀增厚。見圖1。

注：1.淀粉粒；2.木栓細胞；3.緣紋孔導管；4.石細胞；5.纖維。圖1 擱公扭根藥材顯微鑒別圖

2.2 檢查

2.2.1 水分的測定 取各批次擱公扭根2～4 g，平行2份，各精密稱定，照《中華人民共和國藥典》(《中國藥典》)2010年版一部附錄ⅨH 水分測定第一法進行測定。結果見表2。

2.2.2 總灰分的測定 取各批次擱公扭根2 g，平行2份，各精密稱定，照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅨK 總灰分測定法進行測定。結果見表2。

2.3 浸出物的測定

取各批次擱公扭根2～4 g，平行2份，各精密稱定，以50%乙醇為溶劑，照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅨA醇溶性浸出物測定法項下的熱浸法測定。結果見表2。

表2 擱公扭根藥材水分、總灰分、浸出物檢查結果

2.4 含量測定(高效液相色譜法)

2.4.1 色譜條件和系統適用性試驗 色譜柱為Agilent SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)(美國安捷倫公司)；甲醇-0.4%磷酸(5∶95)為流動相，流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測波長：273 nm；自動進樣，進樣量均為5 μL，理論板數按沒食子酸計不低于3000。對照品溶液和供試品溶液的色譜圖見圖2。在該色譜條件下，沒食子酸與其他成分無干擾，理論塔板數均在5000以上，具有良好的分離效果。

注：A.沒食子酸對照品；B.供試品。圖2 擱公扭根藥材及對照品HPLC圖

2.4.2 對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品適量，加甲醇制成38.81 μg·mL-1(折算后)的溶液，作為儲備液。

2.4.3 供試品溶液的制備 取樣品粉末約0.3 g，精密稱定，精密加入4.2%鹽酸溶液50 mL，稱定重量，加熱回流提取3 h，取出放冷，以4.2%鹽酸溶液補足減失的重量，濾過，精密量取續濾液2 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，濾液即為供試品溶液。

2.4.4 線性關系考察 精密吸取上述儲備液適量，分別制成沒食子酸質量濃度為3.881、7.762、15.52、23.29、31.05、38.81 μg·mL-1的對照品溶液，各精密吸取5 μL，按2.4.1項下色譜條件進行測定，以峰面積(Y)對濃度(X)進行線性回歸，回歸方程為Y=17.5478X-4.934 4(r=0.999 7)，表明沒食子酸在3.881～38.81 μg·mL-1與峰面積呈良好的線性關系。

2.4.5 精密度試驗 取對照品溶液，按2.4.1項下色譜條件連續進樣5次，計算沒食子酸峰面積的RSD=1.04%(n=5)，結果顯示精密度良好。

2.4.6 重復性試驗 取同一批擱公扭根(編號：GGNG-1)，共6份，照2.4.3項下方法制備供試品溶液，按2.4.1項下色譜條件測定，計算沒食子酸的質量分數為0.68%，RSD=1.40%(n=6)。

2.4.7 穩定性試驗 取2.4.6項下供試品溶液，分別在0、4、8、12、24 h時進樣測定，結果沒食子酸峰面積的RSD=0.37%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.4.8 加樣回收率試驗 取已知含量的擱公扭根(編號：GGNG-1)6份，各約0.15 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入沒食子酸對照品溶液(1.015 6 mg·mL-1)1.0 mL，再分別精密加入甲醇49.0 mL，按2.4.3項下方法制備供試品溶液，按2.4.1項下色譜條件測定，計算擱公扭根的含量，計算回收率，結果見表3。

表3 擱公扭根中沒食子酸加樣回收率試驗(n=6)

注：沒食子酸對照品加入量均為1.015 6 mg。

2.4.9 樣品含量測定 取不同編號的擱公扭根，平行2份，按2.4.3項下方法制備供試品溶液，按2.4.1項下色譜條件測定，按干燥品計算沒食子酸的含量，結果見表4。

表4 擱公扭根中沒食子酸的含量測定(n=2)

3 討論

3.1 浸出物的測定

擱公扭根中含黃酮苷、萜類及有機酸類物質，極性相對較大，筆者考察了甲醇(純甲醇，70%甲醇、50%甲醇水溶液)、乙醇(95%乙醇、70%乙醇、50%乙醇水溶液)等溶劑系統，結果顯示以50%乙醇為溶劑，熱浸法提取所得浸出物含量最高。

3.2 含量測定

經研究發現華東覆盆子根中含有大量的沒食子酸，現代藥理研究表明，沒食子酸具有抗炎、抗氧化、抑菌、誘導細胞凋亡等功能[4]。筆者以沒食子酸含量為指標，在參考有關資料[5-7]基礎上考察了超聲和加熱回流兩種提取方法，發現回流提取得到的沒食子酸含量較高，故筆者采用加熱回流提取法。在加熱回流的基礎上，考察了50%甲醇、70%乙醇和3%鹽酸等水溶液對沒食子酸的提取能力，結果顯示3%鹽酸水溶液提取的沒食子酸含量最高。在選取鹽酸水溶液為提取溶劑的基礎上，考察鹽酸水溶液的質量分數(4.2%、6.4%、8.5%)、用量(25、50、80 mL)、以及提取時間(1、2、3 h)對測定結果的影響，根據結果選擇以4.2%鹽酸水溶液50 mL、加熱回流3 h為樣品提取方法。

3.3 限度標準制定建議

實驗收集不同產地不同采收時間的擱公扭根共14批，樣品有一定的代表性，水分、總灰分、浸出物、含量測定的結果分別為5.0%～10.2%、1.4%～3.6%、14.4%～41.8%和0.28%～1.46%。根據測定結果，結合《中國藥典》中已有的同類藥材的標準、《中國藥典》附錄藥材和飲片檢定通則及國家藥品標準(中藥)研究制定技術要求，建議規定擱公扭根的水分不得多于12.0%；總灰分不得多于4.0%；以干燥品計算醇溶性浸出物不得少于15.0%；以干燥品計算沒食子酸不得少于0.40%。

[1] 雷后興，李水福.中國畬族醫藥學[M].北京：中國中醫藥出版社，2007：307-308.

[2] 朱美曉，鄢連和，吳婷，等.浙江地方標準收載的畬族特有品種研究現狀[J].中國藥業，2013，22(9)：4-6.

[3] 浙江省食品藥品監督管理局.浙江省中藥炮制規范[S].北京：科學技術出版社，2005：353.

[4] 高雅，李驊，王四旺，等.沒食子酸的藥理作用及其藥物代謝動力學研究進展[J].西北藥學雜志，2014，29(4)：435-438.

[5] 藍海，李龍星，肖培云.紫地榆中沒食子酸的提取工藝研究[J].中成藥，2009，31(9)：1456-1457.

[6] 邱亮，于華忠，劉建蘭，等.茶條槭葉沒食子酸的提取工藝優化及其穩定性研究[J].湖南農業科學，2012(9)：85-88.

[7] 樂佳美，熊筱娟，畢寶寶，等.RP-HPLC測定不同產地白蘞藥材中沒食子酸的含量[J].安徽農業科學，2015，43(4)：108-110.

StudyonQualityStandardofTraditionalSheMedicine"Gegongniugen"

WANGWeiying，MAOJuhua*

(LishuiInstituteforFoodandDrugControl，Lishui323000，China)

Objective：To improve the quality standard of traditional she medicine—Ge gongniugen.Methods：The microscopical characteristics were identified by microscopical method，and index ingredient (Gallic acid) were determined by HPLC.The water content，total ash and ethanol-soluble extractives were determined according to the method in appendix of "pharmacopoeia of people’s republic of china".Results：Characteristics of microscopical identification of Ge gongniugen were obviously.A good linearity of psoralen was at 3.881～38.81 μg·mL-1(r=0.999 7)，and the average recovery rate was 99.47% (n=6)，RSD=1.22%.The content of gallic acid in 14 batches of Ge gongniugen was in the range of 0.28%-1.46%.The results of water content，total ash and ethanol-soluble extractives were in the range of 5.0%-10.2%，1.4%-3.6% and 14.4%-41.8%，respectively.Conclusion：This method is simple，accurate，applicable for the quality control of Ge gongniugen.

Traditional She medicine；Ge gongniugen；quality standard；gallic acid；HPLC

2015-06-29)

麗水市科技局項目(2012CXTD09-05)；麗水市科技局項目(2012CXTD11-03)；麗水市科技局項目(2014JYZB04)

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毛菊華，主管中藥師，碩士，研究方向：中藥與天然藥物活性成分質量評價與研究；E-mail：maomaotou198712@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.5.011