二氫楊梅素的抑菌性能研究及其與苯甲酸鈉的比較

熊偉，李雄輝，王慧賓，袁菊如，王金昌

（江西省科學院應用化學研究所，江西南昌 330096）

二氫楊梅素的抑菌性能研究及其與苯甲酸鈉的比較

熊偉，李雄輝，王慧賓，袁菊如，王金昌

（江西省科學院應用化學研究所，江西南昌 330096）

對二氫楊梅素的抑菌性能進行初步研究，結果表明：二氫楊梅素對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、副傷寒沙門氏菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌和白色念珠菌6種菌均有一定的抑制作用，二氫楊梅素對各菌的最低抑菌濃度（M IC）分別為0.625、0.313、0.625、0.313、1.250m g/m L和0.313m g/m L，最低殺菌濃度（M BC）分別為2.5、2.5、2.5、2.5、10.0m g/m L和2.5m g/m L。同時，對二氫楊梅素與苯甲酸鈉的抑菌和殺菌效果進行對比，結果表明：二氫楊梅素對大腸桿菌、副傷寒沙門氏菌、白色念珠菌3種菌的抑菌和殺菌效果要明顯高于苯甲酸鈉，而對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌3種菌的抑菌和殺菌效果則與苯甲酸鈉相當。

二氫楊梅素；抑菌；最小抑菌濃度；最小殺菌濃度

藤茶，學名顯齒蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata)，為葡萄科蛇葡萄屬（Ampelopsis）的一種野生木質落葉藤本植物，主要分布于我國湖南、湖北、云南、貴州、廣東、廣西和福建等省區。藤茶具有抑菌、降血脂、降血壓、抗氧化、降血糖、保肝護肝以及減輕乙醇中毒等功效[1-7]，研究表明，藤茶中發揮藥理作用的主要化學成分為黃酮類化合物[8，9]，而二氫楊梅素則為藤茶中的主要黃酮類成分。本文系統研究了二氫楊梅素對常見6種致病菌的抑制作用，得出其最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC），并與傳統抗菌藥苯甲酸鈉進行了抑菌效果對比，為新型食品天然防腐劑的進一步研究與開發提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

二氫楊梅素，實驗室自提并純化，經HPLC檢測純度為95%以上；苯甲酸鈉，分析純,中國醫藥（集團）上海化學試劑公司。

1.2 供試菌種

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大腸桿菌（Escherichia coli）、副傷寒沙門氏菌（Salmonella paratyphi）、綠膿桿菌（Pseu-domonas aeruginosa）、枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）和白色念珠菌（Candida albicans），以上菌種均由江西省科學院微生物研究所提供。

1.3 實驗儀器

JM-10002天平（余姚市紀銘稱重校驗設備公司）；NC202-9電熱型恒溫干燥箱（江西電熱設備廠）；恒溫培養箱（常州中捷實驗儀器制造有限公司）；手提式高壓蒸汽滅菌鍋（嘉興中新醫療儀器有限公司）；超凈工作臺（蘇州蘇潔凈化設備公司）。

1.4 培養基

本實驗采用LB培養基，培養基的制備方法為：酵母提取物5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，瓊脂20g，定容于1 000mL，采用氫氧化鈉調結pH值為7.4～7.6，分裝，121℃條件下滅菌20min，備用。

1.5 菌懸液的制備

將供試菌種移入相對應的試管斜面培養基，于37℃下培養18～24h，用接種環挑取少許菌體，放入裝有無菌水的試管內，振動搖勻，制成菌懸液。采用比濁法計數，調整菌懸液濃度，使其含菌數約為107 個/mL，備用。

1.6 抑菌實驗

1.6.1 濾紙片法測定抑菌作用

取直徑為6mm的濾紙片放入配好的濃度為10%的二氫楊梅素溶液中浸泡6h，取出置于真空干燥箱中滅菌干燥。將各種供試菌懸液取0.2mL分別注入直徑為120mm的無菌培養皿中培養，再倒入20.0mL LB培養基，混勻后冷卻成含菌平板，然后用無菌鑷子夾取含浸出液的濾紙片貼在含菌平板上，每皿貼6片，每菌重復3次，細菌培養箱中37℃培養24h后，測定濾紙片周圍抑菌圈直徑大小，比較抑菌效果。

1.6.2 最低抑菌濃度（MIC）的測定

用LB培養基以二倍稀釋法分別稀釋二氫楊梅素，濃度分別為20.000、10.000、5.000、2.500、1.250、0.625、0.313mg/mL和0.156mg/mL，然后分別接種金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、副傷寒沙門氏菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌和白色念珠菌的過夜培養液200μL，于細菌培養箱中37℃下培養24h，觀察生長現象，取沒有細菌生長的最低濃度為MIC。

1.6.3 最低殺菌濃度（MBC）的測定

將上述濃度大于MIC的各管培養液，用直徑4mm的接種環，劃線接種于LB培養基上，在37℃的生化培養箱中培養24h后，觀察有無細菌生長，凡無細菌生長的藥物最低濃度管，即為藥物對該菌種的最低殺菌濃度MBC。

1.6.4 二氫楊梅素與苯甲酸鈉的抑菌效果對比

在上述實驗的條件下，使用同樣濃度的苯甲酸鈉進行抑菌實驗，得出其最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC），并與二氫楊梅素抑菌效果進行對比。

2 結果與分析

2.1 二氫楊梅素的抑菌效果

二氫楊梅素對各實驗菌株的抑菌效果見表1。從表1可以看出，二氫楊梅素對各實驗菌株均有一定的抑制作用，但對綠膿桿菌、大腸桿菌的抑制作用較強，其次是白色念珠菌、金黃色葡萄球菌、副傷寒沙門氏菌，而對枯草芽胞桿菌的抑制作用較弱。

表1 二氫楊梅素的抑菌效果

2.2 最低抑菌濃度（MIC）

由表2可以看出，隨著二氫楊梅素溶液濃度的增加，二氫楊梅素對各實驗菌株的抑菌作用也逐漸增強。二氫楊梅素對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、副傷寒沙門氏菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌和白色念珠菌的最低抑菌濃度（MIC）分別為：0.625、0.313、0.625、0.313、1.250mg/mL和0.313mg/mL，可見二氫楊梅素在較低濃度下有較明顯的抑菌作用。

表2 二氫楊梅素的最低抑菌濃度（MIC）

2.3 最低殺菌濃度（MBC）

由表3可以看出，二氫楊梅素對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、副傷寒沙門氏菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌、白色念珠菌最低殺菌濃度（MBC）分別為：2.5、2.5、2.5、2.5、10.0mg/mL和2.5mg/mL。可見，二氫楊梅素對枯草芽胞桿菌的殺菌效果較弱，對其他菌株的殺菌效果則較好。

2.4 二氫楊梅素與苯甲酸鈉的抑菌效果對比

從表4二氫楊梅素與苯甲酸鈉的抑菌效果對比可以看出，二氫楊梅素對大腸桿菌、副傷寒沙門氏菌、白色念珠菌3種菌的抑菌和殺菌效果要明顯比苯甲酸鈉強，而金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌3種菌的抑菌和殺菌效果則與苯甲酸鈉相當。綜合來看，二氫楊梅素較苯甲酸鈉表現出更強的抑菌和殺菌效果。

表3 二氫楊梅素的最低殺菌濃度（MBC）

表4 二氫楊梅素與苯甲酸鈉的抑菌效果對比

3 結論

1）二氫楊梅素的抑菌實驗可以看出，其對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、副傷寒沙門氏菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌和白色念珠菌均有一定的抑制效果。2）二氫楊梅素對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、副傷寒沙門氏菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌和白色念珠菌的最低抑菌濃度（MIC）分別為：0.625、0.313、0.625、0.313、1.250mg/mL和0.313mg/mL；最低殺菌濃度（MBC）分別為：2.5、2.5、2.5、2.5、10.0mg/mL和2.5mg/mL。二氫楊梅素與苯甲酸鈉的抑菌和殺菌效果對比可以看出：二氫楊梅素對大腸桿菌、副傷寒沙門氏菌、白色念珠菌3種菌的抑菌和殺菌效果要明顯比苯甲酸鈉強，而金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌3種菌的抑菌和殺菌效果則與苯甲酸鈉相當。綜合來看，二氫楊梅素較苯甲酸鈉表現出更強的抑菌和殺菌效果。3）二氫楊梅素作為一種天然提取物，基于它對常見病菌的抑制作用，可用于天然食品防腐劑和藥用資源的開發，以保障藥品的綠色和安全。

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Study on Antimicrobial Activity of Dihydromyricetin and Comparision with Sudium Benzoate

Xiong Wei, Li Xiong-hui, Wang Hui-bin, Yuan Ju-ru, Wang Jin-chang
(Institute of Applied Chemistry，Jiangxi Academy of Sciences，Jiangxi Nanchang 330096)

Antimicrobial activity of dihydromyricetin were investigated.The results indicated as follows: the dihydromyricetin exhibited variable inhibitory effects against Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella paratyphi, Pseu-domonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Candida albicans.The minimal inhibitory concentration (MIC) of the dihydromyricetin to each strain was deretmined as 0.625, 0.313, 0.625, 0.313, 1.250, 0.313 mg/mL, The minimal bactericidal concentration (MBC) of the dihydromyricetin to each strain was deretmined as 2.5, 2.5, 2.5, 2.5, 10.0, 2.5 mg/mL.The inhibitory effects of dihydromyricetin were compared with sudium benzoate at the same time, the results indicated as follows: dihydromyricetin had stronger inhibitory effects than sudium benzoate against Escherichia coli, Salmonella paratyphi, Candida albicans and had the equivalent inhibitory effects against Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus sabtilis.

Dihydromyricetin; antimicrobial; The minimal inhibitory concentration; The minimal bacteriocidal concentration

TQ91

A

2096-0387（2016）01-0012-03

國家自然科學基金項目（項目編號31260400）；江西省自然科學基金項目（項目編號20122BAB214003）；江西省科技支撐計劃項目（項目編號20132BBG70045）。

熊偉（1982-），男，碩士研究生，副研究員，研究方向：天然產物提取分離與分子修飾。