HPLC法快速測定竹涼席中的羅丹明B

盧桂英 程水連 何建國 宋艷春

（湖南省益陽市產商品質量監督檢驗所，湖南 益陽 413000）

HPLC法快速測定竹涼席中的羅丹明B

盧桂英 程水連 何建國 宋艷春

（湖南省益陽市產商品質量監督檢驗所，湖南 益陽 413000）

建立了快速測定竹涼席中染色劑羅丹明B的含量的方法。以甲醇水溶液超聲提取，用高效液相色譜法（熒光檢測器）測定，峰面積外標法定量，在優化條件下，羅丹明B的質量濃度在0.5～100.0ng/mL范圍內與色譜峰面積呈現良好的線性關系，線性相關系數r=0.9999，檢出限為3.0ng/L，加標回收率為87.0%～100.2%，得到羅丹明B的質量濃度和保留時間的相對標準偏差分別為1.24%和0.05%。該方法樣品處理簡單、快速，適用于竹涼席中羅丹明B的日常檢測。

羅丹明B；高效液相色譜法；熒光檢測器；竹涼席

羅丹明B，又稱玫瑰紅B，或堿性玫瑰精，俗稱花粉紅，是一種具有鮮桃紅色的人工合成染料。羅丹明B在溶液中有強烈的熒光，用作實驗室中細胞熒光染色劑及有色玻璃、特色煙花爆竹等行業。本研究建立了一種準確、靈敏的檢測竹涼席中的羅丹明B含量的方法，該方法樣品前處理簡單、羅丹明B的色譜峰形好、定量結果具有很好的重現性、精密度，該方法有著重要的實際應用價值。

1.試驗部分

1.1儀器和試劑

WH-400超聲清洗器（濟寧萬和超聲電子設備有限公司）；LC-MS2020液相色譜儀，帶熒光檢測器，（日本島津公司）；LP502A型分析天平，感量0.0001g，（常熟市百靈天平儀器有限公司）；中草藥粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；標準篩100目；0.45μm有機微孔濾膜；超純水器（艾柯公司）。

1.2方法

1.2.1標準曲線各濃度溶液的配制

標準溶液的配置：精密稱取羅丹明B0.0500g置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并準確定容至刻度，搖勻，配成質量濃度為0.5mg/mL的羅丹明B標準儲備液。標準工作液的配制：用流動相將上述標準液稀釋為0.5ng/mL，1.0ng/mL，5.0ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，的工作液。此工作液現配現用。

1.2.2樣品的制備

取烘干至恒重的竹涼席塊切小，放入中草藥粉碎機中粉碎，過60目的分子篩，取混合均勻的樣品2g，放入100mL的容量瓶中，加色譜純甲醇至刻度，超聲提取30min，靜置5min后，取上清液過0.45μm有機微孔濾膜后，用液相色譜儀測定。

1.2.3色譜分析條件

色譜柱：C18，柱長150mm，內徑4.6mm，粒度5μm；柱溫：35℃。

進樣量：10μL；流速：1.0mL/min；流動相：甲醇和水（比例為60：40）。

熒光條件：激發波長（Ex）550nm，發射波長（Em）580nm。

2.結果與討論

2.1檢測器及檢測波長的選擇

因羅丹明B的甲醇溶液有強烈的熒光，相比紫外檢測器，熒光檢測器的靈敏度更高，而熒光檢測器相比于質譜檢測器，價格更優惠，實驗室使用更普及些，因此選用熒光檢測器作為高效液相的檢測器測定羅丹明B；通過對羅丹明B的標準溶液進行光譜掃描可知，羅丹明B在550nm處吸收峰最大，因此將選定為550nm為激發波長（Ex），580nm為發射波長（Em）。

2.2樣品提取條件的選擇

羅丹明B是酸堿兩性化合物，易溶于水、甲醇、乙腈等。其中甲醇溶液呈現玫瑰紅色，有強烈的熒光，故選用純的甲醇提出。因羅丹明B是易溶的物質，而且超聲提取是最簡單快捷的提取方法，所需要時間短，溶劑量少而且提取完全，因此采用超聲提取法。超聲提取后，樣品溶液直接進液相色譜分析，待測組分的損失少，回收率也很高。

表1　精密度試驗結果

表2　回收試驗結果（n=6）

2.3色譜條件的選擇

根據羅丹明B的性質采用反相液相色譜法，C18，（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱進行分離，該色譜柱由于粒徑小，比表面積大，柱效顯著提高，色譜分析比較理想。流動相選擇：分別嘗試了不同比例的甲醇-水溶液進行洗脫，并嘗試了梯度洗脫方式，發現當甲醇與水的比例為60∶40，進行等度洗脫時，峰形很好，如圖1和圖2所示，圖1為羅丹明B標準色譜圖，出峰時間為13.157min。圖2為樣品的色譜圖，出峰時間為13.170min。因此選擇了甲醇-水為60∶40的體系作為流動相，等度洗脫方式。

2.4線性方程及檢出限

用羅丹明B標準儲備溶進行稀釋，配置以下濃度的羅丹明B工作液：0.5ng/mL，1.0ng/mL，5.0ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，6個水平的工作液。對每個工作濃度液分別平行測定3次，以羅丹明B標準溶液的質量濃度為橫坐標（X），以各個濃度水平的色譜峰峰面積為縱坐標（Y）進行線性擬合。結果表明，羅丹明B標準溶液的質量濃度在0.5～100ng/mL范圍內與相應色譜峰峰面積呈現良好的線性關系，線性方程為Y=47540X+6123（r=0.9999）。

同等色譜條件下進行空白試驗，對空白樣平行測定10次，計算相應的標準偏差，以空白的標準偏差的3倍值除以線性方程的斜率，得方法的檢出限為3.0ng/g.

2.5精密度試驗

對20.0ng/mL的羅丹明B標準溶液進行8次平行測定，測定結果列于表1.并計算8次結果的相對標準偏差，得到羅丹明B的質量濃度和保留時間的相對標準偏差分別為1.24%和0.05%，表明該方法精密度良好。

2.6回收試驗

采用沒有用羅丹明B染色的竹涼席中添加羅丹明B標準溶液的方法進行回收試驗。準確稱取相同的空白涼席試樣5份，分別加入5.0ng/mL，10.0ng/mL，20.0ng/mL， 30.0ng/mL，50.0ng/mL5個不同水平的羅丹明B標準溶液，進行與樣品相同的提取處理和測定，回收試驗結果見表2。由表2可知，在添加質量濃度為5.0～50.0ng/mL時羅丹明B的回收率為87.0%～100.2%，相對標準偏差在0.81%～1.21%之間。

結語

研究通過高效液相色譜法測定染色竹涼席中的羅丹明B含量的結果表明，該方法：前處理簡單快速、靈敏度高、準確性好、可操作性強，能滿足于竹涼席中非法添加染色劑羅丹明B冒充碳化竹涼席的日常檢測。

［1］陳國珍，黃賢智，鄭朱梓，等.熒光分析法（第二版）［M］.北京：北京科學出版社，1990：69.

［2］盧士英，鄒明強.食品中常見的非食用色素的危害與檢測［J］.中國儀器儀表，2009（8）：45-50.

O657

A