銀杏葉提取物聯合奧美沙坦酯治療原發性高血壓的療效及其對血清蛋白表達的影響

徐靜雯，王　楠（1.山東中醫藥大學臨床醫學院，濟南　250011；2.山東省醫學科學院附屬醫院心血管內科，濟南　25001；.山東省腫瘤醫院外科九病區，濟南　250112）

銀杏葉提取物聯合奧美沙坦酯治療原發性高血壓的療效及其對血清蛋白表達的影響

徐靜雯1，2＊，王楠3（1.山東中醫藥大學臨床醫學院，濟南250011；2.山東省醫學科學院附屬醫院心血管內科，濟南250031；3.山東省腫瘤醫院外科九病區，濟南250112）

目的：觀察銀杏葉提取物聯合奧美沙坦酯治療原發性高血壓的臨床療效與安全性，并探討其對血清蛋白表達的影響。方法：選取98例原發性高血壓患者，按照隨機數字表法分為觀察A組和觀察B組，各49例；納入40名健康志愿者為對照組。觀察A組患者給予奧美沙坦酯片20～40 mg，po，qd；觀察B組患者給予奧美沙坦酯片20～40 mg，po，qd+銀杏葉提取物片40～80 mg，po，bid，療程均為4周。觀察3組受試者血壓[收縮壓（SBP）和舒張壓（DBP）]、中醫證候評分、2-DE圖譜的重復性和分辨率、蛋白質差異表達點、差異表達蛋白質的相關信息和觀察組患者的不良反應發生情況。結果：治療后，觀察組患者SBP、DBP、中醫證候評分均明顯低于治療前，且治療后4周明顯低于治療后2周，觀察B組明顯低于觀察A組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。觀察B組患者治療后的蛋白質差異表達點的重復性和分辨率明顯優于觀察A組。觀察組治療前15個蛋白質點表達下調，治療后均表現為不同程度上調，且觀察B組較觀察A組更接近對照組水平；6個蛋白質點表達上調，治療后均表現為不同程度下調，且觀察B組較觀察A組更接近對照組水平；共鑒定出11個蛋白質點。觀察A組和觀察B組患者不良反應發生率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。結論：銀杏葉提取物聯合奧美沙坦酯治療原發性高血壓對患者的血清蛋白表達影響較大，具有較理想的降壓、控壓效果，且安全性較高。

銀杏葉提取物；奧美沙坦酯；原發性高血壓；血清蛋白表達

隨著生活水平的提升及生活節奏的加快，我國居民高血壓發病率呈逐年遞增趨勢[1]，逐漸成為威脅居民健康安全的常見疾病，受到社會及臨床的關注。原發性高血壓患者血壓升高的確切病因不明，其患者占高血壓群體的90%以上[2]。國內外針對原發性高血壓發病機制的研究較多，部分學者就原發性高血壓的動物組織或血清蛋白質組學特征進行了分析[3]，研究對象以大鼠為主，研究方向多為中醫證候的表達差異，而較少針對藥物或中藥材提取物對原發性高血壓患者血清蛋白質組學的影響進行研究。鑒于此，本研究以原發性高血壓患者和健康受試者為研究對象，觀察了銀杏葉提取物聯合奧美沙坦酯治療原發性高血壓的臨床療效及其對血清蛋白表達的影響。

1　資料與方法

1.1納入、排除與脫落標準

觀察組患者納入標準：（1）符合《中國高血壓防治指南2010》[4]中原發性高血壓相關診斷標準及相關治療適應證者；（2）治療依從性好。

排除標準：（1）有相關藥物禁忌證者；（2）入組前30 d使用過其他藥物者；（3）繼發性高血壓患者；（4）合并冠心病、腦梗死等嚴重器質性病變、肝功能與腎功能不全、凝血功能障礙或惡性腫瘤患者；（5）合并精神疾病或意識障礙者；（6）年齡≥80歲或＜18歲的患者；（7）孕期或哺乳期婦女。

脫落標準：隨訪期失聯者。

1.2研究對象

選取2013年6月－2015年1月于山東省醫學科學院附屬醫院就診的98例原發性高血壓患者，按照隨機數字表法分為觀察A組和觀察B組，各49例；納入40名健康志愿者為對照組。3組受試者的性別比、年齡及觀察A組與觀察B組患者的病程、高血壓分級和入組血壓[收縮壓（SBP）和舒張壓（DBP）]等基本資料比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性，詳見表1。本研究方案經醫院醫學倫理委員會審核通過，受試者均知情同意并簽署知情同意書。

表1　3組受試者基本資料比較（±s）Tab 1　Comparison of subject’s general information among 3groups（±s）

表1　3組受試者基本資料比較（±s）Tab 1　Comparison of subject’s general information among 3groups（±s）

注：1 mm Hg=0.133 kPa；與對照組比較，＊P＜0.05Note：1 mm Hg=0.133 kPa；vs.control group，＊P＜0.05

DBP 102.8±4.5＊102.6±4.6＊75.5±3.6組別觀察A組觀察B組對照組n 高血壓分級，例女49 49 40性別，例男28 29 23 21 20 17年齡，歲45.8±3.3 45.6±3.5 45.1±3.6病程，年6.9±2.1 6.7±2.2Ⅰ級1 0Ⅱ級2 2Ⅲ級1 7 112117入組血壓，mmHg SBP 135.8±7.1＊135.5±7.2＊113.6±4.0

1.3治療方法

觀察組患者均參考《中國高血壓防治指南2010》[4]中相關治療要求予以低鹽、少脂肪的飲食指導、戒煙酒和加強運動等干預方案；觀察A組患者給予奧美沙坦酯片[第一三共制藥（上海）有限公司，批準文號：國藥準字H20060371，規格：20 mg] 20～40 mg，po，qd；觀察B組患者給予奧美沙坦酯片20～40 mg，po，qd+銀杏葉提取物片（德國Dr.Willmar Schwabe GmbH &Co.KG，注冊證號：H20140768，規格：40 mg）40～80 mg，po，bid。療程均為4周。

1.4觀察指標

（1）檢測3組受試者的SBP和DBP，血壓正常值為SBP≤120 mm Hg，DBP≤80 mm Hg；（2）采用中醫證候評分對觀察組患者癥狀進行評估，包括頭痛、心悸、失眠、腰酸腿軟、耳鳴和眩暈等6項內容，均采用4級評分法（0～3分），無癥狀為0分，嚴重癥狀為3分，總分為0～18分，得分越高則癥狀越嚴重；（3）隨機抽取3組受試者各5例的晨起空腹肘前靜脈血（對照組取1次，觀察組治療前后各取1次），常規分離血清后使用2-DE技術分離蛋白質，凝膠染色后使用掃描儀測定受試者血清樣本雙向凝膠圖譜，分析2-DE圖譜的重復性和分辨率；（4）采用Imagemaster凝膠圖像分析軟件尋找蛋白質差異表達點；（5）獲取差異表達蛋白質的相關信息；（6）記錄觀察組患者的不良反應發生情況。

1.5蛋白質差異表達點評估標準[5]

觀察組同對照組蛋白質斑點灰度值的比值＞2或＜0.5的點為蛋白質差異表達點。

1.6統計學方法

采用SPSS 19.0統計軟件對數據進行統計分析。計量資料以±s表示，采用t檢驗；計數資料以率表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.13組受試者治療前后血壓比較

治療前，觀察組患者SBP和DBP水平均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；治療后，觀察組患者SBP和DBP水平均明顯低于治療前，且治療后4周明顯低于治療后2周，觀察B組明顯低于觀察A組，差異均有統計學意義（P＜0.05），詳見表2。

表2　3組受試者治療前后血壓比較（±s ，mm Hg）Tab 2　Comparison of blood pressure among 3 groups（±s，mm Hg）

表2　3組受試者治療前后血壓比較（±s ，mm Hg）Tab 2　Comparison of blood pressure among 3 groups（±s，mm Hg）

注：與對照組治療前比較，＊P＜0.05；與同組治療前比較，#P＜0.05；與同組治療后2周比較，&P＜0.05；與同時期觀察A組比較，ΔP＜0.05Note：vs.control group before treatment，＊P＜0.05；vs.before treat-? ment in the same group，#P＜0.05；vs.2 weeks after treatment in the same group，&P＜0.05；vs.observation groupAat the same time，ΔP＜0.05

DBP 102.8±4.5＊96.4±3.1#85.1±3.0#&102.6±4.6＊88.9±3.3#Δ80.2±3.0#&Δ75.5±3.6組別觀察A組n 49觀察B組49對照組40時期治療前治療后2周治療后4周治療前治療后2周治療后4周治療前SBP 135.8±7.1＊122.8±6.2#117.2±4.1#&135.5±7.2＊117.5±5.1#Δ113.3±4.1#&Δ113.6±4.0

2.2觀察A、B組患者治療前后中醫證候評分比較

治療前，觀察A組和觀察B組患者中醫證候評分比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后，兩組患者中醫證候評分均明顯降低，且治療后4周明顯低于治療后2周，觀察B組低于觀察A組，差異均有統計學意義（P＜0.05），詳見表3。

表3　觀察A、B組患者治療前后中醫證候評分比較（±s ，分）Tab 3　Comparison of TCM symptom score of observation group A and observation group B before and after treatmen（t±s ，score）

表3　觀察A、B組患者治療前后中醫證候評分比較（±s ，分）Tab 3　Comparison of TCM symptom score of observation group A and observation group B before and after treatmen（t±s ，score）

注：與治療前比較，＊P＜0.05；與治療后2周比較，#P＜0.05Note：vs.before treatment，＊P＜0.05；vs.2 weeks after treatment，#P＜0.05

治療后4周6.5±1.2＊#4.3±1.1＊#9.460 ＜0.001組別觀察A組觀察B組n 49 49 t P治療前15.2±2.1 15.1±2.2 0.230 0.819治療后2周8.4±2.0＊6.2±2.0＊5.445 ＜0.001

2.32-DE圖譜的重復性和分辨率

使用18 cm固相pH梯度（Immobilized pH Gradient，IPG）膠條對血清蛋白行2-DE檢測，凝膠染色圖像顯示蛋白質表達點分布清晰；對照組、觀察A組和觀察B組各5例受試者（共25份樣本，其中對照組5份，觀察A組和觀察B組治療前和治療后4周各5份）的雙向電泳結果顯示，2-DE圖譜相似度較高。在同一樣本凝膠間匹配各個蛋白質表達點，經Imagemaster凝膠圖像分析軟件檢測，背景消減后，將其中一塊有大量分辨率高、質量好的蛋白質表達點膠作為參考膠，進行蛋白質點匹配；將重復性好、制備穩定的樣本用于蛋白質異常表達點的分析。3組受試者的血清蛋白質2-DE圖譜見圖1。由圖1可見，觀察B組患者治療后的蛋白質異常表達點的重復性和分辨率明顯優于觀察A組。

圖1　3組受試者的血清蛋白質2-DE圖譜A.對照組；B.觀察A組治療前；C.觀察A組治療后；D.觀察B組治療前；E.觀察B組治療后Fig 1　2-DE spectrum of serum protein of subjects in 3groups A.control group；B.observation group A before treatment；C.observation group A after treatment；D.observation group B before treatment；E.observation group B after treatment

2.4蛋白質差異表達點

將同組的5張電泳圖凝膠擬合為1張平均膠，行多組間的比較匹配；經人工校對后尋找到23個蛋白質差異表達點。與對照組比較，觀察組治療前15個蛋白質點表達下調（觀察A組7個、觀察B組8個），治療后均表現為不同程度上調，且觀察B組較觀察A組更接近對照組水平；6個蛋白質點表達上調（觀察A組、觀察B組各3個），治療后均表現為不同程度下調，且觀察B組較觀察A組更接近對照組水平（見圖2）；新出現2個蛋白質點（觀察A組、觀察B組各1個）。

圖2　平均膠圖A、D.對照組；B.觀察A組治療后下調的蛋白質點；C.觀察B組治療后下調的蛋白質點；E.觀察A組治療后上調的蛋白質點；F.觀察B組治療后上調的蛋白質點Fig 2　Mean gel photographA，D.control group；B.observation group A down-regulated protein points after treatment；C.observation group B down-regulated protein points after treatment；E.observation group A up-regulated protein points after treatment；F.observation group B up-regulated protein points after treatment

2.5差異表達蛋白質的相關信息

結合美國國立生物技術信息中心（NCBI）數據庫，判斷本研究中蛋白質點的性質，可鑒定出的11個蛋白質點分別為E3泛素連接酶、鋅指蛋白、角蛋白、人血清轉鐵蛋白、白蛋白同工酶、血紅蛋白、結合珠蛋白2、載脂蛋白A1、血紅素結合蛋白、PR02044和線粒體膜蛋白。

2.6不良反應

觀察A組和觀察B組患者不良反應發生率比較，差異無統計學意義（P＞0.05），詳見表4。表4 觀察A組和觀察B組不良反應發生情況比較[例（%）]

Tab 4Comparison of the occurrence of ADR between observation groupAand observation group B[case（%）]

組別觀察A組觀察B組n 背痛　腹瀉　頭痛　咽炎　高血糖　肌酸磷酸激酶升高49 49 1 0 2 0 1 2 1 0 1 0 1 0 χ2　P合計7（14.3）2（4.1）3.059 0.080

3　討論

高血壓被臨床認定為心、腦血管相關疾病的主要獨立危險因素，隨著相關研究及認知的不斷深入，臨床對高血壓的診斷標準也在不斷調整，針對不同分級患者選擇不同治療手段成為學者們探究的熱點。原發性高血壓作為高血壓發病率最高的分型之一，其發病機制尚未完全明確。

由一個細胞或者組織的基因組所表達的全部相應的蛋白質稱為蛋白質組，蛋白質組學作為一門新興的學科由此誕生，其在疾病研究、治療和新藥開發中得到廣泛應用[6]。早期的蛋白質組學研究范圍僅局限于蛋白質表達，現已發展至將病理分析與基因分析相結合，通過了解機體心血管系統蛋白質的變化情況，掌握有效信息，為其臨床診療提供新的依據，開辟新的途徑[7-8]。

目前，針對高血壓模型動物組織的蛋白質組學研究較多[8]，原發性高血壓患者血清蛋白表達情況的研究較少。本研究將銀杏葉提取物對原發性高血壓患者血清蛋白表達的影響作為重點，經比較可見原發性高血壓患者與健康受試者蛋白質表達點的差異，而多數患者在接受對癥治療后，蛋白質差異表達點呈不同程度的下調或上調，且大致接近健康受試者水平，提示奧美沙坦酯片和/或銀杏葉提取物片對原發性高血壓患者的血清蛋白表達影響較大，其中觀察B組患者較觀察A組更接近對照組水平，表明聯合用藥方案對血清蛋白表達的影響效果更明顯。

銀杏葉歸心、肺經，性甘、苦、澀，味平，主治以瘀血阻絡、胸痹心痛為主證的疾病，如中風、肺虛咳喘、高血脂癥等[9]；現代醫學認為，其還可在痢疾、精神緊張、呼吸道疾病和緩解胃部疼痛等方面可發揮積極作用[10]。劉琛等[11]研究顯示，銀杏葉在改善缺血性腦血管疾病、治療高血壓病早期腎損害[12]和減輕心肌損傷等方面具有積極影響。除銀杏葉提取物對原發性高血壓患者血清蛋白表達的影響外，本研究還就其控壓效果、癥狀改善效果和用藥安全性展開分析，發現給予奧美沙坦酯片聯合銀杏葉提取物片方案的觀察B組患者SBP和DBP調節效果，頭痛、心悸、失眠、腰酸腿軟、耳鳴、眩暈等中醫證候改善情況均明顯優于單用奧美沙坦酯片的觀察A組，與劉安平等[13]研究結論基本一致。在化學藥治療基礎上聯合銀杏葉提取物可發揮其活血化瘀、通絡止痛、斂肺平喘、化濁降脂的功效，從而調節血脂水平，改善血液微循環，通過抑制血小板凝集、促進血流動力學恢復，以達到降壓、穩壓和降低相關心腦血管疾病發生風險的目的。張英鋒等[14]研究指出，銀杏葉可擴張血管，通過加快血流速度以降低血壓水平。銀杏黃酮具有誘導體外培養心肌細胞表達血紅素氧合酶1的作用[15]，能以此加強機體細胞的抗損傷能力，提高細胞存活率，抑制心肌細胞凋亡，降低心血管疾病發生率，改善患者預后。現代藥理研究證實，銀杏葉提取物可在抗衰老、抗癡呆、抗氧化、調經和改善性功能等方面發揮積極作用[16]，而銀杏葉中富含的銀杏黃酮則具有緩解視網膜病變、調節視功能的功效[17]，可用于高血壓視網膜病變、老年黃斑病變等多種視功能疾病的臨床治療，有助于促進患者病情轉歸，提高其預后水平。

本研究結果顯示，觀察B組患者不良反應發生率低，僅有2例患者出現頭痛癥狀，表明該聯合用藥方案安全性較高。

綜上所述，奧美沙坦酯聯合銀杏葉提取物對原發性高血壓患者的血清蛋白表達影響較大，具有較理想的降壓、控壓效果，且安全性較高。本研究受樣本量的限制，并未將原發性高血壓之外的疾病列為研究對象，僅針對奧美沙坦酯聯合銀杏葉提取物對原發性高血壓患者的臨床療效及血清蛋白表達的影響展開討論，故難以對其在其他疾病中的臨床應用價值予以評估，可擴大樣本量并排除相關干擾因素后將其作為后續研究課題予以進一步探究。

[1]趙曉云，路永剛，趙海利，等.河北省51 239體檢人群高血壓流行病學分析[J].中國老年學雜志，2013，33（19）：4 818.

[2]劉文斌.社區老年人高血壓流行病學調查[J].中國全科醫學，2011，14（3）：300.

[3]褚瑜光，石潔，胡元會，等.高血壓病中醫肝膽濕熱證患者血清蛋白質組學研究[J].中國中西醫結合雜志，2010，30 （1）：37.

[4]中國高血壓防治指南修訂委員會.中國高血壓防治指南2010[J].中華心血管病雜志，2011，39（7）：579.

[5]Muraoka S，Kume H，Watanabe S，et al.Strategy for SRM-based verification of biomarker candidates discovered by iTRAQ method in limited breast cancer tissue samples[J]. Proteome Res，2012，11（8）：4 201.

[6]齊連芬，胡元會，褚瑜光，等.自發性高血壓大鼠血清蛋白質組學分析[J].中華老年心腦血管病雜志，2010，12（7）：607.

[7]許靜怡，陳超翔，韓錦艷，等.線粒體蛋白質組學研究進展[J].分析化學，2015，43（9）：1 257.

[8]范榮，何峰，王楊，等.平肝潛陽方藥對自發性高血壓大鼠血管組織蛋白質表達譜的影響[J].中西醫結合學報，2011，9（6）：643.

[9]劉穎.銀杏葉制劑的藥理作用及臨床研究概述[J].中醫藥信息，2011，28（4）：145.

[10]何健.銀杏葉的研究進展[J].中國藥房，2011，22（15）：1 434.

[11]劉琛，白向榮，王育琴.銀杏葉提取物注射液治療老年缺血性腦血管病的療效與安全性的系統評價[J].中國藥房，2014，25（8）：691.

[12]劉世梅.中藥治療高血壓并發癥的研究進展[C]//中華中醫藥學會2012中醫藥慢性病防控暨中醫藥防治高血壓、高血脂、高血糖學術交流會論文集.北京：中華中醫藥學會，2012：291-295.

[13]劉安平，周金彩，龍紅萍，等.銀杏葉片聯合倍他樂克片對改善高血壓患者生活質量的研究[J].中南藥學，2010，8 （2）：95.

[14]張英鋒，王燕革，馬子川，等.銀杏葉提取物活性成分的簡介[J].化學教育，2011，32（7）：3.

[15]萬冬宇，黃維義，劉全未，等.銀杏葉提取物抗動脈粥樣硬化的實驗研究[J].現代預防醫學，2012，39（15）：3 908.

[16]劉輝輝，劉滇軍，田少江，等.銀杏葉膠囊降低糖尿病腎病患者血漿腦鈉肽水平并降低心血管事件的發生概率[J].中國醫師進修雜志，2011，34（25）：7.

[17]王淑梅.銀杏二萜研究進展[J].河北醫藥，2015，37（9）：1 401.

（編輯：陶婷婷）

Clinical Efficacy of Ginkgo biloba Extract Combined with Olmesartan Medoxomil in the Treatment of Essential Hypertension and Its Effect on the Expression of Serum Protein

XU Jingwen1，2，WANG Nan3（1.Clinical Medical College，Shandong TCM University，Jinan 250011，China；2. Dept.of Cardiovascular Medicine，the Affiliated Hospital of Shandong Academy of Medical Sciences，Jinan 250031，China；3.Surgical Ward 9，Shandong Provincial Tumor Hospital，Jinan 250112，China）

OBJECTIVE：To observe clinical efficacy and safety of Ginkgo biloba extract combined with olmesartan medoxomil in the treatment of essential hypertension，and to discuss its effect on the expression of serum protein.METHODS：98 patients with essential hypertension were selected and randomly divided into observation group A and observation group B，with 49 cases in each group；40 healthy volunteers were included in control group.Observation group A was given Olmesartan medoxomil tablet 20-40 mg，po，qd；observation group B was given Olmesartan medoxomil tablet 20-40 mg，po，qd+Extract of G.biloba leaves tablet 40-80 mg，po，bid.Treatment course lasted for 4 weeks.Blood pressure（SBP and DBP），TCM symptom score，the repetitiveness and resolution ratio of 2-DE spectrum，protein differentiation expression point，related information of differentiation expression protein in 3 groups and ADR of observation group were observed.RESULTS：After treatment，SBP，DBP and TCM symptom score of observation group were significantly lower than before；those indexes after 4 weeks of treatment were significantly lower than those after 2 weeks after treatment；the observation group B was significantly lower than the observation group A，with statistical significance（P＜0.05）.The repetitiveness and resolution ratio of protein differentiation expression point in observation group B were significantly better than in observation group A after treatment.The expression of 15 protein points in observation group downregulated before treatment，and up-regulated after treatment to different extents；the observation group B was closer to control group，compared to observation group A.The expression of 6 protein points up-regulated，and then down-regulated to different extent after treatment；the observation group B was closer to control group，compared to observation group A.A total of 11 protein points were identified.There was no statistical significance in the incidence of ADR between observation group A and observation group B（P＞0.05）.CONCLUSIONS：G.biloba extract combined with olmesartan medoxomil greatly influences the expression of serum protein in patients with essential hypertension and shows good antihypertensive and pressure-control effects with good safety.

Ginkgo biloba extract；Olmesartan medoxomil；Essential hypertension；Serum protein expression

R544文獻標志碼A

1001-0408（2016）23-3257-04

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.23.31

＊中醫師，博士研究生。研究方向：中醫藥治療心系疾病。電話：0531-67626412。E-mail：773808510@qq.com

2016-01-08

2016-06-30）