碳化硅量子點(diǎn)熒光標(biāo)記串珠鐮刀菌及其活體示蹤

朱彥敏，宋月鵬，柳洪潔，高東升，尹承苗，毛志泉

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)機(jī)械與電子工程學(xué)院，山東省園藝機(jī)械與裝備重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，泰安　271018;2. 齊魯理工學(xué)院機(jī)電工程學(xué)院，濟(jì)南　250200；3.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，泰安　271018;4.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝科學(xué)與工程學(xué)院，泰安　271018)

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碳化硅量子點(diǎn)熒光標(biāo)記串珠鐮刀菌及其活體示蹤

朱彥敏1,2，宋月鵬1，柳洪潔3，高東升4，尹承苗4，毛志泉4

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)機(jī)械與電子工程學(xué)院，山東省園藝機(jī)械與裝備重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，泰安271018;2. 齊魯理工學(xué)院機(jī)電工程學(xué)院，濟(jì)南250200；3.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，泰安271018;4.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝科學(xué)與工程學(xué)院，泰安271018)

采用SiC量子點(diǎn)熒光標(biāo)記與示蹤技術(shù)，對(duì)串珠鐮刀菌活體細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記并實(shí)現(xiàn)了長(zhǎng)時(shí)程熒光成像示蹤，結(jié)果表明，碳化硅量子點(diǎn)標(biāo)記的串珠鐮刀菌活體細(xì)胞具有可調(diào)諧的熒光顏色，這是與其光學(xué)特性所決定的，即在不同激發(fā)光波長(zhǎng)下呈現(xiàn)不同的熒光顏色；SiC量子點(diǎn)通過網(wǎng)格蛋白依賴的內(nèi)吞方式進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi)部，實(shí)現(xiàn)了對(duì)串珠鐮刀菌的穩(wěn)定標(biāo)記；同時(shí)這種標(biāo)記由于量子點(diǎn)表面官能團(tuán)與活體細(xì)胞的化學(xué)鍵耦合而顯示出較強(qiáng)的抗漂白能力。

碳化硅量子點(diǎn)； 串珠鐮刀菌； 熒光調(diào)諧性； 抗光漂白性； 長(zhǎng)時(shí)程熒光成像

1　引　言

串珠鐮刀菌是一種世界范圍廣泛分布的土傳真菌，具有寄主專化性，較強(qiáng)的寄生或腐生能力。該菌可以從根部危害植物，引起維管束病害，致使寄主植物枯萎，造成植物枯萎病[1-4]。該病在植株整個(gè)生長(zhǎng)期均可發(fā)生，且蔓延相當(dāng)快，從零星發(fā)生到大面積發(fā)病只要2～3年時(shí)間，導(dǎo)致農(nóng)作物和經(jīng)濟(jì)作物大面積減產(chǎn)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，被稱為植物“癌癥”[5-8]。如郟縣2013年煙草根莖類病害鑒定結(jié)果統(tǒng)計(jì)得鐮刀菌根腐病占總病害的63.8%，香蕉枯萎病每年給我國(guó)的香蕉產(chǎn)業(yè)造成的直接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)50億元，防治難度大，被稱為“蕉癌”。

目前防治枯萎病的主要方法有培育抗病品種、使用化學(xué)藥劑、利用農(nóng)業(yè)措施和施用生防菌劑等，但由于枯病屬于土傳病害，細(xì)胞生物學(xué)致病機(jī)制不清楚，故多年來(lái)防治效果不堪理想[4-7]。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的活體細(xì)胞動(dòng)態(tài)示蹤技術(shù)有望解決上述問題，但對(duì)熒光標(biāo)記材料提出了較高要求。最新研究發(fā)現(xiàn)，SiC量子點(diǎn)是一種寬禁帶半導(dǎo)體材料，具有優(yōu)良的光學(xué)特性[9-12]，在成型過程中即可在表面形成多種親有機(jī)物官能團(tuán)，生物相容性良好，宋月鵬等利用SiC量子點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了尖孢鐮刀菌活體細(xì)胞穩(wěn)定的熒光標(biāo)記與長(zhǎng)時(shí)程成像[12]，這為串珠鐮刀菌熒光標(biāo)記與活體示蹤提供了一個(gè)成功范例。

基于此，本文利用活體細(xì)胞SiC量子點(diǎn)熒光標(biāo)記與長(zhǎng)時(shí)程成像技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)串珠鐮刀菌活體細(xì)胞的熒光標(biāo)記，對(duì)標(biāo)記穩(wěn)定性、光學(xué)漂白性及活體示蹤進(jìn)行研究，為快速、準(zhǔn)確、方便地實(shí)時(shí)檢測(cè)串珠鐮刀菌在生態(tài)環(huán)境中的動(dòng)態(tài)變化和根際定殖，揭示致病菌的致病機(jī)制，進(jìn)而研發(fā)抗病新品種、新型農(nóng)藥等防治方法提供直觀依據(jù)。

2　實(shí)　驗(yàn)

2.1試劑與儀器

采用自蔓延燃燒合成的均質(zhì)納米β-SiC(100～500 nm)。腐蝕劑為40%的氫氟酸、65%的濃硝酸、分析純硫酸、土豆、葡萄糖、瓊脂粉。儀器：電熱鼓風(fēng)干燥器(DGL-2004型)、超聲波分散儀(KQ5200E型)、臺(tái)式高速離心機(jī)(TGL-16C型)、恒溫培養(yǎng)箱(HZQ-F-160A)、超凈工作臺(tái)(W-CJ-2-FJ)、回轉(zhuǎn)式恒溫調(diào)速柜(HYG-Ш)、高壓滅菌鍋(LX-C50L)、日本JEM-2100型電子透鏡、F-4600型熒光分光光度計(jì)、Fourier變換紅外線光譜(FTIR)分析儀、日本奧林巴斯 IX-71 型熒光顯微鏡、leica SP-2激光共聚焦熒光顯微鏡。

2.2碳化硅量子點(diǎn)的制備及結(jié)構(gòu)性能特征

采用專利技術(shù)(ZL201210208382.8)制備出碳化硅量子點(diǎn)水相溶液，濃度為0.03～0.06 mol/L，量子點(diǎn)呈近球狀，直徑為2～5 nm，pH值為6.4～6.8，特征激發(fā)波長(zhǎng)為340 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為450 nm。

2.3培養(yǎng)基的制備

原材料：土豆、葡萄糖、瓊脂粉。培養(yǎng)基的制備步驟：把土豆洗凈、去皮、切碎，稱取200 g，放入1000 mL水，煮30 min，過濾，在濾液里加入20 g葡萄糖，制備固體培養(yǎng)基還需加入15 g瓊脂粉。把濾液平均分裝到9個(gè)250 mL的錐形瓶?jī)?nèi)，放入高壓滅菌鍋里(121 ℃)滅菌30 min。

2.4活體細(xì)胞培養(yǎng)及SiC量子點(diǎn)熒光標(biāo)記

串珠鐮刀菌菌種來(lái)源于中國(guó)普通微生物菌種保藏中心，具體培養(yǎng)方法為：將保藏于生化培養(yǎng)箱內(nèi)的斜面菌種刮取2環(huán)在無(wú)菌條件下接種至準(zhǔn)備好的平面培養(yǎng)基上進(jìn)行活化，放到恒溫培養(yǎng)箱(28 ℃)中培養(yǎng)4 d。把活化后的菌種刮取6環(huán)接種到制備好的液體培養(yǎng)基里，把培養(yǎng)基放到回轉(zhuǎn)式恒溫調(diào)速柜內(nèi)(28 ℃，200 r/min)培養(yǎng)2 d。

在培養(yǎng)基中加入體積分?jǐn)?shù)為10%的SiC量子點(diǎn)水相溶液。把培養(yǎng)基放到回轉(zhuǎn)式恒溫調(diào)速柜內(nèi)(28 ℃，200 r/min)培養(yǎng)2～10 d，定期取樣，在日本奧林巴斯 IX-71 型熒光顯微鏡及l(fā)eica SP-2激光共聚焦熒光顯微鏡下觀察串珠鐮刀菌活體細(xì)胞形貌。

3　結(jié)果與討論

3.1串珠鐮刀菌碳化硅量子點(diǎn)熒光標(biāo)記與全色熒光發(fā)射調(diào)諧

碳化硅量子點(diǎn)具有優(yōu)良的光學(xué)特性和生物相容性，是一種潛在的活體細(xì)胞熒光標(biāo)記材料，2008年，法國(guó)里昂納米技術(shù)實(shí)驗(yàn)室(Institut des Nanotechnologies de Lyon，INL)的Botsoa首次報(bào)道了3C-SiC量子點(diǎn)對(duì)活體細(xì)胞熒光標(biāo)記的研究成果，引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注，納米科技網(wǎng)站認(rèn)為該研究成果是解決量子點(diǎn)細(xì)胞毒性的一個(gè)巨大飛躍。

Wang等研究結(jié)果表明，SiC量子點(diǎn)可以實(shí)現(xiàn)全色熒光發(fā)射，其激發(fā)光波長(zhǎng)為320～500 nm，而其熒光發(fā)射波長(zhǎng)可遍布整個(gè)可見光區(qū)(360～760 nm)，呈現(xiàn)顯著紅移現(xiàn)象，這對(duì)于活體細(xì)胞有效檢出率具有重要意義[13]。

將培養(yǎng)8 d的串珠鐮刀菌液滴到載玻片上，置于共聚焦顯微鏡下觀察，如圖1所示。

圖1　碳化硅量子點(diǎn)標(biāo)記的串珠鐮刀菌在不同激發(fā)光下的熒光成像(a)360 nm;(b)420nm;(c)520nmFig.1　Fusarium moniliforme fluorescence imaging for excitation can be changed with SiC QDs

圖1中顯示，SiC量子點(diǎn)串珠鐮刀菌熒光標(biāo)記活體細(xì)胞在不同激發(fā)光波長(zhǎng)下顯現(xiàn)出不同的顏色，如在320 nm波長(zhǎng)激發(fā)下其熒光顏色呈藍(lán)色熒光，420 nm時(shí)呈綠色熒光，而在520 nm時(shí)則發(fā)出紅色熒光。此外，還應(yīng)看到活體細(xì)胞在320 nm激發(fā)光下的熒光強(qiáng)度最大。

這種現(xiàn)象取決于制備的SiC量子點(diǎn)的光學(xué)特性，圖2為SiC量子點(diǎn)的光致發(fā)光(Photoluminescence，PL)特性光譜。

圖2　SiC量子點(diǎn)的光致發(fā)光圖譜Fig.2　PL emission spectra of SiC QDs

圖2中顯示，激發(fā)光波長(zhǎng)由320 nm增加到380 nm時(shí)，其發(fā)射光波PL峰值由410 nm紅移到440 nm，在340 nm激發(fā)光波長(zhǎng)下，光強(qiáng)最強(qiáng)。SiC量子點(diǎn)在320～380 nm激發(fā)光下，其發(fā)射波長(zhǎng)在437.5～475 nm之間，該波段屬于藍(lán)光范圍，故SiC量子點(diǎn)標(biāo)記的串珠鐮刀菌活體細(xì)胞發(fā)出藍(lán)色熒光；SiC量子點(diǎn)在420 nm波激發(fā)下的發(fā)射波峰值在512 nm附近，該波段屬于綠光范圍，故串珠鐮刀菌發(fā)出綠色熒光；隨著激發(fā)光波長(zhǎng)的增加，量子點(diǎn)的發(fā)射波長(zhǎng)將紅移到紅色范圍，使串珠鐮刀菌發(fā)出紅色熒光。

由于SiC量子點(diǎn)在不同波長(zhǎng)光激發(fā)下，發(fā)射的熒光波長(zhǎng)隨之變化，因此呈現(xiàn)熒光顏色的可調(diào)諧，這樣能夠?qū)崿F(xiàn)所標(biāo)記的活體細(xì)胞的熒光發(fā)射顏色調(diào)諧，這對(duì)于提高有自發(fā)熒光特性的微生物或器官檢出率具有重要意義，如霉菌等，其自發(fā)熒光發(fā)射波長(zhǎng)基本在500～530 nm，若采用FITC等熒光染料，激發(fā)光波長(zhǎng)一般在470～485 nm，檢出率較低。由于SiC量子點(diǎn)具有全色熒光發(fā)射調(diào)諧特性，可以通過調(diào)整激發(fā)光波長(zhǎng)，避開這些微生物體的自發(fā)熒光發(fā)射區(qū)，根據(jù)自發(fā)熒光微生物長(zhǎng)時(shí)間照射會(huì)發(fā)生光漂白特點(diǎn)，采用PCR等技術(shù)，極為方便快速的進(jìn)行鑒別。

3.2碳化硅量子點(diǎn)熒光標(biāo)記串珠鐮刀菌活體細(xì)胞光漂白性

傳統(tǒng)熒光標(biāo)記材料(羅丹明類、有機(jī)染料類)的光漂白是制約活體細(xì)胞動(dòng)態(tài)示蹤的主要原因，在激發(fā)光照及細(xì)胞微環(huán)境共同作用下，這些熒光材料會(huì)發(fā)生分解致使熒光強(qiáng)度急劇衰減而形成光漂白。而SiC量子點(diǎn)是一種以共價(jià)鍵結(jié)合的惰性陶瓷材料，受細(xì)胞微環(huán)境影響較小，光學(xué)性能優(yōu)良且物化特性極為穩(wěn)定，激發(fā)光長(zhǎng)時(shí)間照射也不易光漂白。

將SiC量子點(diǎn)標(biāo)記的串珠鐮刀菌活體細(xì)胞培養(yǎng)8 d后，置于熒光顯微鏡下觀察，激發(fā)光波長(zhǎng)為320 nm，光照時(shí)長(zhǎng)分別為0、10、30 min，其結(jié)果如圖3所示。

圖3　SiC量子點(diǎn)標(biāo)記的串珠鐮刀菌在不同光照時(shí)間下的熒光成像(a)0 min;(b)10 min;(c)30 minFig.3　Fluorescent imaging with SiC QDs for living cells of Fusarium moniliforme for different irradiation time

圖4　(a)SiC晶體模型,(b)SiC量子點(diǎn)模型,(c)SiC量子點(diǎn)與蛋白質(zhì)耦合模型Fig.4　Model for silicon carbide crystals(a),silicon carbide quantum Dots (b),and coupling of SiC QDs and protein(c)

由圖3可以看出，標(biāo)記的活體細(xì)胞在320 nm激發(fā)光下發(fā)出明亮的藍(lán)色熒光，而照射10 min后串珠鐮刀菌的熒光強(qiáng)度稍有減弱，如圖3a、b所示。但是隨著照射時(shí)間的延長(zhǎng)(約30 min)串珠鐮刀菌仍然發(fā)出明亮的藍(lán)色熒光，并且熒光強(qiáng)度基本不變，見圖3c所示。這說(shuō)明SiC量子點(diǎn)在細(xì)胞微環(huán)境及長(zhǎng)時(shí)間強(qiáng)激發(fā)光照射下，不易發(fā)生光漂白，也不易被串珠鐮刀菌微環(huán)境所淬滅，這是傳統(tǒng)有機(jī)熒光染料及綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)。早在2008年，Jiyang Fan等研究了SiC量子點(diǎn)與PI染料對(duì)hFOB細(xì)胞標(biāo)記后相對(duì)熒光強(qiáng)度隨時(shí)間的變化關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，激發(fā)光照15 min后PI染料標(biāo)記的細(xì)胞出現(xiàn)淬滅，而SiC量子點(diǎn)標(biāo)記的細(xì)胞熒光強(qiáng)度幾乎沒有任何變化[14]，如圖3d所示。

傳統(tǒng)熒光標(biāo)記材料與目標(biāo)標(biāo)記物結(jié)合方式也影響其光漂白性能，對(duì)于SiC量子點(diǎn)熒光標(biāo)記材料，眾多研究結(jié)果表明[15-18]，在其成型過程中，即可在表面一步法形成COO-，OH-及HS-等親有機(jī)物基團(tuán)，利用Fourier變換紅外線光譜(FTIR)分析儀對(duì)量子點(diǎn)表面物化特性檢測(cè)結(jié)果證明了這一點(diǎn)，因此SiC量子點(diǎn)空間結(jié)構(gòu)及其表面物化特性如圖4(a)、(b)所示。

這種化學(xué)鍵耦合結(jié)構(gòu)，不僅可以提高活體細(xì)胞熒光標(biāo)記的穩(wěn)定性，同時(shí)也大大提高了SiC量子點(diǎn)熒光標(biāo)記活體細(xì)胞的抗光漂白性能。

3.3碳化硅量子點(diǎn)熒光標(biāo)記串珠鐮刀菌活體示蹤

對(duì)SiC量子點(diǎn)標(biāo)記的串珠鐮刀菌培養(yǎng)2、4、6、8 d進(jìn)行熒光成像，結(jié)果如圖5所示。

圖5　串珠鐮刀菌活體細(xì)胞SiC量子點(diǎn)長(zhǎng)時(shí)程熒光成像(a)培養(yǎng)2 d；(b)培養(yǎng)4 d；(c)培養(yǎng)6 d；(d)培養(yǎng)8 dFig.5　Long-term-distance fluorescent imaging with SiC QDs for living cells of Fusarium moniliforme 2 days cultivating; 4 days cultivating; 6 days cultivating; 8 days cultivating

由圖5可以看出，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，串珠鐮刀菌細(xì)胞形貌發(fā)生較大變化，初期呈現(xiàn)分生孢子，碳化硅量子點(diǎn)主要標(biāo)記于孢子的細(xì)胞膜處，當(dāng)受到320 nm光照激發(fā)后，該處發(fā)出明亮的藍(lán)色熒光，如圖5a。

眾所周知，細(xì)胞膜表面有蛋白質(zhì)分子，量子點(diǎn)與蛋白質(zhì)耦合成復(fù)合體，且復(fù)合體中的蛋白質(zhì)仍然具有生物活性，可以和細(xì)胞表面的受體結(jié)合。復(fù)合體與細(xì)胞膜表面的受體結(jié)合后可以激活細(xì)胞膜上的磷脂激酶，刺激激酶活性，提高磷脂的局部濃度，產(chǎn)生足夠的與網(wǎng)格蛋白依賴的內(nèi)吞有關(guān)的蛋白結(jié)合膜位點(diǎn)，進(jìn)而使量子點(diǎn)通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證明了這一點(diǎn)，標(biāo)記2 d后用緩沖液對(duì)串珠鐮刀菌進(jìn)行多次細(xì)胞清洗(>3次)，在熒光顯微鏡下仍然有較強(qiáng)的熒光出現(xiàn)在細(xì)胞膜處，可見SiC量子點(diǎn)進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi)部形成了穩(wěn)定標(biāo)記。

培養(yǎng)4 d后，孢子開始分生出菌絲，在此過程中碳化硅量子點(diǎn)經(jīng)內(nèi)吞作用進(jìn)入鐮刀菌菌絲內(nèi)部，在活體細(xì)胞內(nèi)部形成強(qiáng)烈的熒光效應(yīng)，見圖5b。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，串珠鐮刀菌最后生長(zhǎng)成為團(tuán)絮狀菌絲，并且不斷內(nèi)吞碳化硅量子點(diǎn)，菌絲內(nèi)部的熒光強(qiáng)度越來(lái)越強(qiáng)，對(duì)菌絲形成穩(wěn)定的標(biāo)記，見圖5c、d,與文獻(xiàn)[12]研究結(jié)果相似。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)SiC量子點(diǎn)標(biāo)記后的串珠鐮刀菌的細(xì)胞形貌、發(fā)展模式及生長(zhǎng)規(guī)律并未發(fā)現(xiàn)明顯差別，說(shuō)明SiC量子點(diǎn)不會(huì)對(duì)活體細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生影響，體現(xiàn)了SiC量子點(diǎn)無(wú)細(xì)胞毒性或細(xì)胞毒性較小，Sahu[19]、Bluet[20]及Song[12]等進(jìn)行的SiC量子點(diǎn)毒性試驗(yàn)也證明了這一點(diǎn)。同時(shí)，Bluet等認(rèn)為SiC量子點(diǎn)細(xì)胞毒性小的主要原因是由于量子點(diǎn)表面物化特性比較簡(jiǎn)單，且量子點(diǎn)在活體細(xì)胞內(nèi)分布均勻[20]。SiC量子點(diǎn)無(wú)細(xì)胞毒性或細(xì)胞毒性小為活體細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)程熒光成像方面奠定了生物學(xué)基礎(chǔ)[12]。

由此可見，SiC量子點(diǎn)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)不同時(shí)期串珠鐮刀菌的長(zhǎng)時(shí)程穩(wěn)定熒光成像與示蹤，這對(duì)于該菌生長(zhǎng)及調(diào)控規(guī)律、侵染過程等方面的研究提供了材料和技術(shù)支持。對(duì)研究串珠鐮刀菌與寄主之間的互作機(jī)制，發(fā)展新型防治措施具有重要意義。

4　結(jié)　論

采用SiC量子點(diǎn)熒光標(biāo)記與示蹤技術(shù)，對(duì)串珠鐮刀菌活體細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記并實(shí)現(xiàn)了長(zhǎng)時(shí)程熒光成像示蹤，結(jié)果表明，碳化硅量子點(diǎn)標(biāo)記的串珠鐮刀菌活體細(xì)胞具有可調(diào)諧的熒光顏色，在320 nm、420 nm、520 nm激發(fā)光照射下依次呈現(xiàn)藍(lán)色、綠色、紅色熒光，對(duì)于活體細(xì)胞有效檢出率具有重要意義；SiC量子點(diǎn)通過網(wǎng)格蛋白依賴的內(nèi)吞方式進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi)部，實(shí)現(xiàn)了對(duì)串珠鐮刀菌的穩(wěn)定標(biāo)記；同時(shí)由于碳化硅屬于惰性材料且其表面官能團(tuán)與活體細(xì)胞通過化學(xué)鍵耦合，故標(biāo)記客體在激發(fā)光的長(zhǎng)時(shí)間照射下(約30 min)不易淬滅具有較強(qiáng)的抗光漂白性。這為串珠鐮刀菌侵染機(jī)制及其防治方法的研究提供理論依據(jù)與技術(shù)支持。

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Fluorescence Labeling and Tracing in Vivo for the Living Cells of Fusarium Moniliforme with Silicon Carbide Quantum Dots

ZHUYan-min1,2,SONGYue-peng1,LIUHong-jie3,GAODong-sheng4,YINCheng-miao4,MAOZhi-quan4

(1.Mechanical and Electronic Engineering College,Shandong Provincial Key Laboratory of Horticultural Machineries and Equipments Shandong Agricultural University,Shandong Agricultural University,Tai'an 271018,China;2.School of Mechanic and Electronic Engineering,Qilu Institute of Technology, Ji'nan 250200,China;3.Animal science and Technology College,Shandong Agricultural University,Tai'an 271018,China;4.Horticulture Science and Engineering College,Shandong Agricultural University, Tai'an 271018, China)

Living cells ofFurariummoniliformewere stably labeled and long-term-distance traced by fluorescent imaging with SiC Quantum Dots(SiC-QDs). The results indicated thatFurariummoniliformeliving cells labeled by SiC-QDs have a tunable fluorescent color, which is determined by SiC-QDs optical properties that different fluorescent colors are exhibited corresponding to the different exciting wavelength. Through the clathrin-dependent endocytosis way, SiC-QDs can enter into the interior of living cells and the stable fluorescent marker are so achieved. The marker exhibits strong anti-bleaching due to chemical coupling between quantum dots surface functional groups and living cells.

silicon carbide quantum dots(SiC-QDs);Furariummoniliforme;tunable fluorescent colors;resistance to photobleaching;Long-term-distance fluorescent imaging

山東省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2014GGX102012)；山東省博士后創(chuàng)新基金(201203101)；中國(guó)博士后科學(xué)基金(2013M53163)；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系-水果創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)專項(xiàng)；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系-果品創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)專項(xiàng)(SDAIT-06-12)

朱彥敏 (1987-)，女，碩士研究生.主要從事納米功能材料的制備及應(yīng)用.

宋月鵬，副教授.

TU528

A

1001-1625(2016)05-1596-06