高效液相色譜法測定葡萄中8種氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留

周嘉誠　陳楠　黎小鵬

摘要 使用高效液相色譜法測定葡萄中8種氨基甲酸酯農(nóng)藥（涕滅威亞砜、涕滅威砜、涕滅威、滅多威、克百威、3-羥基克百威、速滅威和仲丁威）的殘留量。樣品前處理采用乙腈提取、氨基柱凈化，C18色譜柱分離、高效液相色譜儀-柱后衍生-FLD檢測器分析檢測，結(jié)果表明：8種氨基甲酸酯農(nóng)藥在30 min內(nèi)得到良好的分離，線性相關(guān)系數(shù)r2為0.999 75～0.999 93，檢測限達(dá)2.5～7.1 μg/kg，當(dāng)添加水平為0.5 mg/kg時，回收率范圍為82.0% ～101.2%。該方法快速靈敏，操作簡單且效果顯著。

關(guān)鍵詞 葡萄；高效液相色譜法；氨基甲酸酯農(nóng)藥；殘留量

中圖分類號 S481+.8 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）08-0117-02

Abstract Investigated a method for determination of 8 carbamate pesticides residue （including：Aldicarb sulfoxide，Aldicarb sulfone，aldicarb，meth-omyl，carbofuran，3-hydroxy g Budweiser，Tsumacide and Bassa） in grape by high performance liquid chromatography（HPLC）.Using acetonitrile to extract，Amino to purify，C18 column to separate and detecting in HPLC-FLD detector.The results showed that 8 carbamate pesticides had fine separated in 30 minutes，the linearly dependent coefficient r2 was between 0.999 75 and 0.999 93，detection limit was 2.5～7.1 μg/kg and the recovery range was 82.0%～101.2% when add level was 0.5 mg/kg.The method was rapid and sensitive，the operation was simple and the effect was remarkable.

Key wors grape；high performance liquid chormatography；carbamate pesticide；residue

葡萄，俗名草龍珠、賜紫櫻桃、菩提子、蒲陶、山葫蘆，是世界上分布最廣的果樹作物，作為著名水果，可生食或制葡萄干，或釀酒，釀酒后的酒腳還可提取酒食酸等。我國葡萄生產(chǎn)發(fā)展十分迅速，截至2013年，我國葡萄栽培面積已達(dá)71.464萬hm2，葡萄產(chǎn)量達(dá)到1 155萬t，產(chǎn)量穩(wěn)居世界首位[1]。然而，葡萄的農(nóng)藥殘留一直是制約產(chǎn)業(yè)鏈發(fā)展的重要因素，雖然國內(nèi)專家指出多年來鮮食葡萄及其產(chǎn)品葡萄酒均未發(fā)生過農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題，但葡萄市場卻依然遭遇著消費(fèi)者的信任危機(jī)。究其原因，是當(dāng)前國內(nèi)葡萄的種植多為散戶種植，對葡萄的田間管理不規(guī)范，導(dǎo)致殺蟲劑、殺菌劑等農(nóng)藥過量使用，尤其是在葡萄4個月的生長周期內(nèi)，農(nóng)戶大致會噴7～8種農(nóng)藥，從而導(dǎo)致葡萄果實(shí)中農(nóng)藥殘留過高，并牽連到葡萄酒等多種行業(yè)的農(nóng)藥殘留問題，給我國葡萄產(chǎn)業(yè)鏈的質(zhì)量安全帶來重重隱患[2]。

當(dāng)前，已有不少著作提出了關(guān)于葡萄中農(nóng)藥多殘留檢測的方法[3-4]，歸納起來，農(nóng)藥殘留的檢測方法主要集中在氣相色譜法（GC）、液相色譜法（LC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）等[5]。本文采用乙腈提取，固相萃取凈化，濃縮定容后儀器檢測，使用高效液相色譜-柱后衍生-熒光檢測法（HPLC）同時測定8種氨基甲酸酯農(nóng)藥，該方法主要特點(diǎn)是前處理步驟簡單，且靈敏度高，分析效果顯著。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260型高效液相色譜儀，配有FLD檢測器，柱后衍生系統(tǒng)（Pickering公司），百分之一天平[奧豪斯儀器（上海）有限公司]，IKA T18勻漿機(jī)（IKA公司），圓周式震蕩搖床（IKA公司），臺式冷凍高速離心機(jī)（上海安戈儀器有限公司），氮吹儀（Organomation公司），Autoscience固相萃取儀（天津奧特賽斯儀器有限公司），Poxwar漩渦混合器（蘇州珀西爾實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

前處理所使用的乙腈、氯化鈉、甲醇、二氯甲烷為分析純，其中氯化鈉為廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，其余均為天津市富宇精細(xì)化工有限公司生產(chǎn)；最終定容的甲醇為色譜純，賽默飛世爾科技（中國）有限公司生產(chǎn)；氨基固相萃取小柱（500 mg 6 mL），安捷倫公司生產(chǎn)；0.2 ？滋m尼龍濾膜，天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司生產(chǎn)；柱后衍生試劑氫氧化鈉溶液、OPA稀釋溶液、鄰苯二甲醛和巰基乙醇均為Pickering公司生產(chǎn)。

涕滅威亞砜、涕滅威砜、涕滅威、滅多威、克百威、3-羥基克百威、速滅威和仲丁威8種氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品均由農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所生產(chǎn)，濃度均為1 000 mg/L，使用前用甲醇（色譜純）稀釋成所需濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品的前處理。按NY/T 789-2004[6]的標(biāo)準(zhǔn)于中山市三鄉(xiāng)鎮(zhèn)農(nóng)場抽取葡萄樣品，取全果，經(jīng)混勻粉碎后制成待測樣。

取25.0 g混勻粉碎后的樣品置于100 mL離心管中，加入50 mL乙腈，用高速勻漿機(jī)勻漿2 min，加入7 g氯化鈉，用圓周式震蕩搖床劇烈震蕩3 min，置于離心機(jī)以8 000 r/min離心5 min。

吸取10.00 mL上清液（乙腈相）到15 mL試管中，將試管置于氮吹儀在50 ℃下氮吹至近干，用2 mL甲醇+二氯甲烷（1+99）溶解殘?jiān)齼艋?/p>

取氨基柱置于固相萃取儀，用4.0 mL甲醇+二氯甲烷（1+99）活化氨基固相萃取小柱后，倒入上述待凈化液并收集洗脫液，用3 mL甲醇+二氯甲烷（1+99）清洗待凈化液試管后過柱，并重復(fù)1次。擠干固相萃取小柱，洗脫液于50 ℃氮吹至近干，用色譜純甲醇+水（1：1）準(zhǔn)確定容至2.5 mL，在混合器上混勻后，用0.2 ？滋m濾膜過濾，供高效液相色譜儀分析檢測。

1.2.2 儀器條件。Pickering C18液相色譜柱，4.6×250 mm，5 μm；流動相組成：甲醇、水，梯度洗脫（表1）；流速：1.200 mL/min；柱溫：42 ℃；進(jìn)樣量：10.0 μL；定量方法：外標(biāo)法；檢測器：熒光檢測器；檢測器波長：激發(fā)波長330 nm，發(fā)射波長465 nm；柱后衍生系統(tǒng)：流速0.3 mL/min，水解溫度100 ℃，衍生溫度為室溫。

2 結(jié)果與分析

2.1 8種氨基甲酸酯農(nóng)藥的液相色譜圖

根據(jù)既能使待測農(nóng)藥完全分離，又能節(jié)約分析時間提高分析效率的原則[7]，優(yōu)化儀器條件。按照1.2.2描述的儀器條件進(jìn)行測定，得到8種氨基甲酸酯農(nóng)藥的液相色譜圖（圖1）。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍及檢出限

試驗(yàn)前取甲醇（色譜純）配制成的8種氨基甲酸酯類農(nóng)藥（涕滅威亞砜、涕滅威砜、涕滅威、滅多威、克百威、3-羥基克百威、速滅威和仲丁威）混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用甲醇（色譜純）分別稀釋成0.01、0.02、0.05、0.10、0.50 mg/L 5個濃度點(diǎn)作校正曲線混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，并按照1.2.2的儀器條件進(jìn)行測定。

以3倍信噪比表示檢出限，以各色譜峰的面積為縱坐標(biāo)，各標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度作橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的線性范圍、檢出限、線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)r2如表2所示。可以看出，8種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在0.01～0.50 mg/L的線性范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r2均大于0.999 7。

2.3 方法回收率及精密度

以1.2.1的樣品前處理方法，1.2.2的儀器分析條件，取經(jīng)檢驗(yàn)確證不含有待測農(nóng)藥的葡萄樣品，并使用8種氨基甲酸酯農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液以0.5 mg/kg的添加水平進(jìn)行回收率和檢測精密度的分析試驗(yàn)，試驗(yàn)把葡萄樣品分成6個平行樣品進(jìn)行測定，經(jīng)檢測8種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的回收率達(dá)到82.0%～101.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.8%～6.5%之間。以上數(shù)據(jù)表明，本文所用前處理方法和儀器分析方法可以得到良好的回收率和精密度，具有很好的檢測能力。

3 結(jié)論

葡萄中8種氨基甲酸酯農(nóng)藥（涕滅威亞砜、涕滅威砜、涕滅威、滅多威、克百威、3-羥基克百威、速滅威和仲丁威）的殘留量，以乙腈提取、氨基柱凈化作為樣品前處理方法，使用高效液相色譜儀-熒光檢測器測定C18柱分離后的衍生物，當(dāng)添加水平為0.5 mg/kg時，樣品回收率達(dá)到82.0%～101.2%，線性相關(guān)系數(shù)r2為0.999 75～0.999 93，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.8%～6.5%之間，并且檢測限可達(dá)到2.5～7.1 μg/kg。此方法步驟簡便，操作簡單，并可達(dá)到良好的分析效果，可以用于對葡萄中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的定量檢測。

4 參考文獻(xiàn)

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