中透藝春蘭根狀莖的組培快繁及藝向培養研究

邢海　孫葉芳　鄭琪

摘要 以中透藝春蘭根狀莖為材料，研究培養基和外源激素對根狀莖增殖、分化的影響，同時探討光照及不同根狀莖材料對藝向穩定的影響。結果表明：3/4MS培養最適宜根狀莖的增殖；TDZ 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L和6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L的組合對根狀莖的增殖效果較好；6-BA 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L的組合最有利于根狀莖的分化，芽分化率達到97.7%。2 000 lx的光照強度最有利于中透藝春蘭的根狀莖的出苗率和出藝率；選取整條為淡黃色的根狀莖作為材料，能較好地保證葉藝的走向。

關鍵詞 春蘭；根狀莖；增殖；分化；葉藝

中圖分類號 S682.31 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）08-0139-02

Abstract To establish the effects of different media and plant growth regulator treatments on proliferation and differentiation of rhizome，together with effects of different light radiation and rhizome material on directional art stability，rhizome of Cymbidium goeringii `Zhung tou yi' were chose as material.The results showed that 3/4MS was the best basic media for proliferation of rhizome，and the best proliferation effect was found by adding TDZ 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L or 6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L.The combination of 6-BA 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L was good for differentiation of rhizome （97.7%）.Light intensity of 2 000 lx was good for rate of plantlets and rate of leaf art.Moreover，the usage of material from pure light yellow rhizome ensured tendency of leaf art.

Key words Cymbidium goeringii；rhizome；multiplication；differentiation；leaf art

中透藝是藝從頭部而上，由中骨擴散至兩邊，藝的部分不再有青線條，是蘭藝精品的代表之一[1]。一株藝蘭從花籽至最高藝向的境界，至少需經過5～15年或更長的時間。而常規情況下種子不完全，極難萌發，如果沿用傳統的分株繁殖法，繁殖系數又極低，致使許多珍惜品種無法大量繁殖以滿足市場需求。春蘭根狀莖是中國蘭繼代增殖的有利階段，也是快速繁殖提高增殖系數的關鍵。由于蘭花葉面上出現的那些美麗的縞藝性狀，不具有較高的遺傳穩定性，通常情況下，組培苗在受到培養環境的影響下，藝向具有不穩定性。中國蘭[2-4]、雜交蘭[5-8]和線藝蘭[9]的組織培養已有報道，但對中透藝春蘭的組培特別是中透藝的藝向培養研究尚未見報道。鑒于此，本研究將以梅瓣芽變后產生的中透藝春蘭根狀莖為材料，探討培養基和外源激素對根狀莖增殖、分化的影響，同時探討光照及不同根狀莖材料對藝向穩定的影響，以期為中透藝春蘭的培育及工廠化提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料為梅瓣芽變后產生的中透藝根狀莖，選擇生長一致、大小相似的有藝色出現的淡黃色根狀莖進行試驗。

1.2 試驗方法

1.2.1 不同培養基對根狀莖增殖與生長的影響。將根狀莖接種在MS、3/4MS、1/2MS、1/4MS、B5和W培養基上，進行固體培養的試驗，各培養基均加入6 g/L瓊脂粉，30 g/L蔗糖，培養基pH值調節至5.8，各處理重復3次，每個處理接種10瓶，每瓶處理接種10個根狀莖，置于25 ℃，光照12 h/d、 2 000 lx下培養。60 d后統計根狀莖增殖倍數（增殖倍數=新長出的根狀莖數/接種根狀莖數）、平均長度和直徑。

1.2.2 不同激素濃度組合對根狀莖增殖與生長的影響。將大小相似的根狀莖平放于添加以下植物生長調節劑組合的3/4MS（固體）培養基中：①6-BA 2.0 mg/L；②6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L；③6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L；④TDZ 0.5 mg/L；⑤TDZ 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L；⑥TDZ 0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L。所有培養基均添加50 mL/L椰乳，各處理重復3次，每個處理接種20瓶，每瓶接種8個根狀莖，培養60 d后統計根狀莖增殖倍數、平均長度及觀察生長特征等。

1.2.3 不同激素濃度組合對根狀莖分化的影響。將長度超過10 mm，直徑超過1 mm以上，且生長粗壯的根狀莖接種在3/4MS培養基上，并添加不同濃度組合的6-BA與IBA以促進分化（6-BA 0.1 mg/L+IBA 0.1 mg/L、6-BA 0.1 mg/L+IBA 1.0 mg/L、6-BA 0.1 mg/L+IBA 2.0 mg/L、6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L、6-BA 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L、6-BA 1.0 mg/L+IBA 2.0 mg/L、6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L、6-BA 2.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L、6-BA 2.0 mg/L+IBA 2.0 mg/L）。所有培養基均添加50 mL/L椰乳，各處理重復3次，每個處理接種20瓶，每瓶接種8個根狀莖，培養60 d后統計出芽數和成苗數。

1.2.4 不同光照強度對根狀莖藝向穩定的影響。選取整條都為淡黃色的根狀莖接種于3/4MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L+50 mL/L椰乳的培養基上，分別在光照強度為1 000、2 000、3 000 lx下培養，各處理重復3次，每個處理接種10瓶，每瓶接種8個根狀莖，培養60 d后統計分化后的出苗數和出藝苗數。

1.2.5 不同葉藝根狀莖材料對藝向穩定的影響。選取整條綠色的、黃中帶綠的、整條淡黃色的根狀莖接種于3/4MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L+50 mL/L椰乳的培養基上，各處理重復3次，每個處理接種10瓶，每瓶接種8個根狀莖，培養60 d后統計分化后的出苗數。

2 結果與分析

2.1 培養基種類對根狀莖增殖與生長的影響

由表1可以看出，B5培養基增殖較快，但試驗觀察，隨著培養時間的增長，植株長勢變弱，褐化明顯，這也與石樂娟等[9]的研究一致。3/4 MS培養基的增殖系數為3.87，根狀莖直徑較為粗壯，長勢最好，W培養基增殖系數最低，只有1.43，且根狀莖細長。綜合考慮，在中透藝春蘭的組培中應選用3/4 MS培養基較為適宜。

2.2 不同激素濃度組合對根狀莖增殖與生長的影響

由表2可以看出，單獨添加6-BA和TDZ均對根狀莖的增殖有明顯促進作用，但TDZ的增殖倍數要比BA略高。同樣的，在相同濃度6-BA時，添加TDZ比添加NAA更能促進根狀莖的生長和增殖，這可能是由于TDZ兼具生長素和細胞分裂素的作用。TDZ 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L和6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L的組合均有利于根狀莖的增殖，增殖系數分別為9.87和8.93，且根狀莖粗壯，生長快。且在6-BA濃度達到2.0時，根狀莖均出現褐化現象，故宜選用上述組合對對中透藝春蘭根狀莖進行培養[10]。

2.3 不同激素濃度組合對根狀莖分化的影響

研究發現，隨著培養時間的增長，根狀莖出芽數和成苗數都呈上升趨勢，其中6-BA濃度為2.0 mg/L的3個組合的根狀莖和分化出的幼苗有褐化現象。由表3可以看出，添加6-BA和NAA都能使根狀莖發芽并成苗，而隨著6-BA和NAA濃度上升，出芽數和成苗數反而下降[11]。培養60 d后，6-BA 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L的組合芽分化率達到97.7%，成苗數為336株。石樂娟等[9]發現線藝春蘭萌發獨立的芽成苗率極高，而本研究中，觀察到不管是叢生狀不定芽還是萌發獨立的芽都能發育成苗，這可能是由于國蘭品種不同，根狀莖發育成苗的特性也不盡相同。

2.4 不同光照強度對根狀莖藝向穩定的影響

線藝蘭花因受到外界環境因素（如光照、雷擊）的刺激，導致其產生變異，葉片上出現黃、白色線條或斑紋等藝象[12-13]。研究發現，光照對中透藝春蘭根狀莖的出苗率和葉藝苗的遺傳穩定性均有一定的影響。由表4可以看出，相比于1 000 lx和3 000 lx，2 000 lx的光照下，根狀莖的出苗率和出藝率都是最好的，過低和過高的光照強度，均不利于中透藝春蘭的藝向穩定。

2.5 不同根狀莖材料對藝向穩定的影響

由表5可以看出，不同根狀莖材料對中透藝春蘭的藝向走向影響非常大，當選取整條淡黃色根狀莖時，出藝率高達89.8%，而整條為綠色根狀莖的出藝率則為0，這說明根狀莖沒有藝，分化出的小苗也很難出現藝。在黃綠兼有的根狀莖分化出的小苗中，帶藝的基本為根狀莖材料只帶稍許綠色的。

3 討論與結論

（1）石樂娟等[9]、潘銀萍等[5]和鄭立明等[10]的研究報道研究發現，在1/2MS培養基上，春蘭的根狀莖生長最為合適，而本試驗中3/4MS培養基最為適宜，這可能與春蘭品種有關，不同的春蘭品種對培養基的適應要求不同。

（2）在NAA或者TDZ濃度相同時，低濃度的6-BA更能促進根狀莖的增殖和生長，且根狀莖都為嫩黃或深綠色，而高濃度6-BA反而使根狀莖生長受阻，并出現褐化現象。這與潘銀萍等[5]的報道中當6-BA濃度大于2.0 mg/L時嚴重抑制春蘭的增殖且出現褐化現象一致。同樣，高濃度的6-BA和NAA不利于根狀莖的分化，抑制了生長，這與張菊野等[11]的研究結果是相似的。

（3）本研究中，2 000 lx的光照強度最適合根狀莖分化和藝向穩定。在蘭株葉片的細胞里，除了含有葉綠素、葉黃素、胡蘿卜素外，還有白色體等，其中有些質體是可以相互轉化的，或者可以通過轉化才能生成。中透藝春蘭中，橙黃色的胡蘿卜素與白色體在細胞內共同作用會使細胞外觀上變成亮麗的黃色[14]。當光照過低時，或許因為其需要大量的葉綠素保證生長，導致葉上的黃色褪化轉化為葉綠素。而當光照過高時，小苗生長受阻，這也是因為中透藝春蘭不喜強光照的生理特性。

（4）對于葉藝品種來說，根狀莖的選取決定了后代葉藝的藝向。中國蘭花細胞色素體的改變是在新芽的葉原基的分生細胞內發生[13]，也就解釋了不同材料根狀莖分化之后的小苗藝向不同。故在生產中，應盡量選取整條為淡黃色的根狀莖作為材料，以保證葉藝的走向和出藝率。

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