廚房PM2.5對于誘發致敏小鼠肺部炎癥的影響

侯德音 譚序芊 柴寅初 Dr.Bob Yang

（南京市金陵中學 江蘇南京 210014）

廚房PM2.5對于誘發致敏小鼠肺部炎癥的影響

侯德音 譚序芊 柴寅初 Dr.Bob Yang

（南京市金陵中學 江蘇南京 210014）

以小鼠為模型研究日常烹飪時家庭廚房所產生的PM2.5對于誘發致敏小鼠肺部炎癥的影響，通過對小鼠肺部6種（TNF-α，IL-1β，IL-6，IL8，IL13，以及IFN-γ，產生炎癥相關的基因表達量的檢測，對比實驗組和對照組的表達差異，可以明顯發現實驗組小鼠炎癥相關基因的表達量顯著增高。

廚房PM2.5 Real-time PCR 炎癥 基因

1 材料與方法

C57BL/6小鼠，70只雌性，體重18-22克，購自南京大學模式動物研究所。M-MLV Transcriptase（Cat No：M1705）和GoTaq qPCR Master Mix（Cat No：A6001，購自Promega Corporation，SunShineBio Total RNA Extraction Reagent（Cat No：SN114，購自南京生興生物技術有限公司，FUT甲醛檢測儀PM2.5檢測儀五合一甲醛檢測器粉塵檢測儀器購自山雨電子產品，協同舒克貝塔倉鼠糧食實驗小鼠飼料，20千克，購自江蘇協同生物

2 實驗方法

2.1動物模型建立：將70只小鼠分10籠，每籠7只，并標記1-10號籠。1-5籠為實驗組，每天暴露在廚房PM2.5下，其余時間飼養在實驗室；6-10籠為對照組，飼養在實驗室內。實驗組小鼠被暴露在油煙下的時間為一天兩次。早上暴露時間大約在10：30-11：00之間，模擬家庭做午飯時產生的油煙；下午暴露時間大約在16：00-16：30之間，模擬家庭做晚飯時產生的油煙。

2.2 從實驗開始的第一天起，下午戶外實驗結束后，每隔1天解剖小鼠。 從1-5籠和6-10籠中分別取出兩只，共4只，取出肺部組織。

2.3 RNA提取：按照實驗操作說明書提取肺部組織的總RNA，并測定O D值。

2.4 反轉錄實驗：在總體積反應20ul反應液中含有Total RNA（約2ug，、Oligo dT Primer1uL（500μg/ml，、Random 6 mers1uL（500μg/ml，、RNase Inhibitor 0.5uL（40U/μL，、dNTPs （10mM）1uL、M-MLV Transcriptase 1uL（200U，和M-MLV 5X Reaction Buffer 4uL，最后補RNase-Free water至反應體積為20ul。反應程序：65℃保溫5 min，然后冰浴5 min； 先在37℃保溫1 hr，然后70℃保溫15min；……