貝氏貝諾孢子蟲巢式PCR檢測方法的建立

王文濤，仇建華，段紅，常巧呈，路義鑫，王春仁，彭博

（1.黑龍江八一農墾大學動物科技學院，大慶　163319；2.東北農業大學動物醫學學院）

貝氏貝諾孢子蟲巢式PCR檢測方法的建立

王文濤1，2，仇建華1，段紅1，常巧呈1，路義鑫2，王春仁1，彭博

（1.黑龍江八一農墾大學動物科技學院，大慶163319；2.東北農業大學動物醫學學院）

根據GenBank上發表的貝氏貝諾孢子蟲核糖體內轉錄間隔區（ITS）序列，在傳統PCR方法的基礎上設計一對特異性內引物，提取病牛血液中貝氏貝諾孢子蟲基因組DNA，建立了貝氏貝諾孢子蟲巢氏PCR檢測方法并進行臨床樣品檢測。結果表明，建立的巢式PCR檢測方法能檢測到貝氏貝諾孢子蟲DNA的最低濃度為24.3 ag·μL-1，剛地弓形蟲、犬新孢子蟲、牛巴貝斯蟲、環形泰勒蟲、邊緣無漿體DNA檢測均為陰性。196份臨床血液樣本，檢測出3份陽性，陽性率為1.53%。由此可見，研究所建立的巢氏PCR檢測方法具有較高的特異性和敏感性，可用于牛貝諾孢子蟲病的早期臨床診斷。

貝氏貝諾孢子蟲；巢氏PCR；檢測；核糖體內轉錄間隔區

牛貝諾孢子蟲?。˙ovine besnoitiosis），又稱牛球孢子蟲?。˙ovine cutaneous globidiosis）或橡皮?。╡lephant skin disease），是由住肉孢子蟲科（Sarcocystidae）、貝諾孢子蟲屬（Besnoitia）的貝氏貝諾孢子蟲（Besnoitia besnoiti）寄生于牛眼、皮膚和生殖系統等部位引起的一種原蟲病［1］。該病主要引起牛皮膚增厚、龜裂，母牛流產、產奶量下降，公牛精液質量下降，嚴重時引起死亡，給養牛業造成很嚴重的經濟損失［2］。貝氏貝諾孢子蟲（Besnoitia besnoiti）1912年首次由Besnoit和Robin在法國南部發現并報道［3］，2010年歐盟食品安全委員會（EFSA）將牛貝諾孢子蟲病列為重要的新興疾病［4］。……