miR-93真核表達載體的構建及其表達驗證

黃　軍，吳開杰，惠　珂，王　彬，王新陽，賀大林

(西安交通大學第一附屬醫院泌尿外科，陜西西安　710061)

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·基礎研究·

miR-93真核表達載體的構建及其表達驗證

黃軍，吳開杰，惠珂，王彬，王新陽，賀大林

(西安交通大學第一附屬醫院泌尿外科，陜西西安710061)

目的構建人miR-93真核表達載體，并驗證其表達效果，為進一步研究miR-93的生物學功能提供有利工具。方法用PCR方法從293T細胞基因組DNA中擴增miR-93前體序列，引物引入酶切位點和保護堿基，產物用限制性內切酶EcoRⅠ和BglⅡ雙酶切后插入pEZX-MR04表達載體中，構建miR-93真核表達載體pEZX-MR04-miR-93。構建好的載體用雙酶切、PCR和測序鑒定，同時轉染293T細胞，用Real time PCR檢測重組pEZX-MR04-miR-93質粒的miR-93表達效率。結果成功構建miR-93真核表達載體pEZX-MR04-miR-93，重組pEZX-MR04-miR-93質粒轉染293T細胞后miR-93表達上升約21倍。結論構建的miR-93真核表達載體pEZX-MR04-miR-93可顯著上調細胞中miR-93水平，為進一步研究miR-93在泌尿系腫瘤中的生物學功能提供可靠工具，奠定了堅實的實驗基礎。

miR-93；表達載體；pEZX-MR04；293T

微小RNA(microRNA，miR)是一類廣泛存在于生物體內的長度約為19～25個堿基的單鏈非編碼RNA，自被發現以來，數以千計的microRNA相繼被報道并研究。越來越多的研究證實，microRNA可廣泛參與生物體的各項生物學行為，包括腫瘤的進展、生物體的發育、心腦血管疾病、骨關節炎等。人miR-93由7號染色體編碼，自2008年被首次報道參與T細胞白血病進展起[1]，miR-93在多種疾病如川崎病[2]、心肌缺血再灌注[3]、肥胖[4]、腫瘤、腦創傷[5]、糖尿病[6]等中相繼被報道。尤其在腫瘤中miR-93發揮著不同的作用。在結直腸癌患者標本中，miR-93的表達明顯高于復發患者，體外實驗證……