重組人表皮生長因子聯合硫辛酸治療糖尿病足的臨床觀察

張祥運，丁曉斌，林秀峰，楊　平，林　凱（.四川省醫學科學院/四川省人民醫院城東病區胃腸燒傷科，成都　60000；.西南醫科大學附屬醫院整形燒傷科，四川瀘州　646000）

重組人表皮生長因子聯合硫辛酸治療糖尿病足的臨床觀察

張祥運1＊，丁曉斌2，林秀峰1，楊平1，林凱1（1.四川省醫學科學院/四川省人民醫院城東病區胃腸燒傷科，成都610000；2.西南醫科大學附屬醫院整形燒傷科，四川瀘州646000）

目的：考察重組人表皮生長因子（rhEGF）聯合硫辛酸對糖尿病足患者的臨床療效及安全性。方法：選取68例糖尿病足患者按照隨機數字表法分為觀察組和對照組，各34例。兩組患者均給以基礎治療和硫辛酸注射液0.6 ml加入0.9%氯化鈉注射液250 ml，ivgtt（避光），qd；觀察組患者在此基礎上給予rhEGF外用溶液1 ml均勻噴灑創面，給予凡士林涂抹創面，用醫用干紗布包扎，qd。兩組患者療程均為7 d。比較兩組患者的臨床療效、潰瘍面積、B淋巴細胞瘤基因2（Bcl-2）、Bcl-2相關X蛋白（Bax）蛋白表達水平，以及不良反應發生情況。結果：觀察組患者總有效率（94.1%）明顯高于對照組（67.6%），差異有統計學意義（P＜0.05）。治療前，兩組患者潰瘍面積、Bcl-2和Bax水平比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。治療后，兩組患者潰瘍面積均明顯縮小，Bcl-2水平較治療前均明顯升高，Bax水平明顯降低，且觀察組患者的改善程度明顯大于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。兩組患者不良反應發生率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。結論：rhEGF聯合硫辛酸治療糖尿病足臨床療效較好，且完全性較好。

重組人表皮生長因子；硫辛酸；糖尿病足；創面愈合；療效

糖尿病患者因周圍神經病變與外周血管疾病合并過高的機械壓力，可引起足部軟組織及骨關節系統的破壞與畸形形成，進而引發一系列的足部問題，從輕度的神經癥狀到嚴重的潰瘍、感染、血管疾病、關節病和神經病變性骨折等。我國糖尿病足的發病率高達12%[1]，足部潰瘍患者近40%的病因為糖尿病，糖尿病患者出現足部潰瘍等癥狀的風險為非糖尿病者的15～40倍[2]。臨床尚無特異性的糖尿病足治療方法，約50%的患者在3年內復發，臨床的研究重點為尋找高效、安全和可靠的糖尿病足治療方法。傷口愈合分為機體對傷口的反應及調整愈合活動過程的炎性階段、機體所在環境及組織再生的增生階段、變硬及形成疤痕組織的變異階段，3個階段相互交錯卻連續發生。生長因子是影響傷口愈合的可溶性信號蛋白，在炎癥反應期清除壞死細胞和細胞外基質殘片，并促進表皮細胞、纖維母細胞、內皮細胞增殖，在金屬蛋白酶作用下膠原降解，使瘢痕減少變平，故生長因子的表達水平直接影響糖尿病足患者的預后[3]。表皮生長因子（EGF）是一種多功能的生長因子，在體內外對多種組織細胞有極強的促分裂作用，其利用基因重組技術制成，有良好的應用前景[4]。本研究考察了重組人表皮生長因子（rhEGF）聯合硫辛酸對糖尿病足患者的臨床療效及安全性，現報道如下。

1　資料與方法

1.1納入與排除標準

納入標準：（1）符合世界衛生組織（WHO）1996年制定的《糖尿病足診斷標準》[5]；（2）年齡≥18歲；（3）患者均知情同意并簽署知情同意書。

排除標準：（1）1型糖尿病患者；（2）非糖尿病所致的足部潰瘍者；（3）伴嚴重心、腎、肺等疾病者；（4）對本研究藥物過敏者；（5）妊娠及哺乳期婦女。

1.2研究對象

本研究方案經醫院醫學倫理委員會審核通過后，選取2012年8月－2015年8月于四川省人民醫院就診的糖尿病足患者68例，按照隨機數字表法分為觀察組和對照組，各34例。其中，觀察組患者男性19例，女性15例；年齡47～72歲，平均（64.04±4.52）歲；體質量指數（BMI）22.3～30.0 kg/m2，平均（26.87±3.34）kg/m2；病程4～16年，平均（7.25±2.91）年；潰瘍面積10.0～14.2 cm2，平均（11.22±1.93）cm2；參照糖尿病足Wagner分級[5]為Ⅰ級11例，Ⅱ級15例，Ⅲ級6例，Ⅳ級2例。對照組患者男性21例，女性13例；年齡45～78歲，平均（63.84± 4.77）歲；BMI 22.8～31.2 kg/m2，平均（26.34±2.47）kg/m2；病程3～18年，平均（7.13±2.88）年；潰瘍面積9.1～13.5 cm2，平均（11.05±1.75）cm2；Wagner分級為Ⅰ級14例，Ⅱ級16例，Ⅲ級3例，Ⅳ級1例。兩組患者的性別比、年齡、BMI、病程、潰瘍面積和Wagner分級等一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.3治療方法

兩組患者均給予常規降糖（控制患者空腹血糖＜9.0 mmol/L，餐后2 h血糖＜11.1 mmol/L）、抗感染（根據患者藥敏試驗和病原菌培養結果選擇抗菌藥物）、改善血液循環（高壓氧、血管擴張藥或微循環改善劑）和營養神經（甲鈷胺片等）的基礎治療，同時給予硫辛酸注射液（亞寶藥業集團股份有限公司，批準文號：國藥準字H20055869，規格：6 ml∶0.15 g）0.6 ml加入0.9%氯化鈉注射液250 ml，ivgtt（避光），qd。觀察組患者在此基礎上給予rhEGF外用溶液（深圳市華生元基因工程發展有限公司，批準文號：國藥準字S20010037，規格：2 000 IU/ml，5 ml/瓶）1 ml均勻噴灑創面，給予白凡士林（南昌白云藥業有限公司，批準文號：贛食藥準字F20050006，規格：500 g）均勻涂抹創面，用醫用干紗布包扎，qd。兩組患者療程均為2周。

1.4療效判定標準及觀察指標

（1）比較兩組患者的臨床療效，評價標準參照《糖尿病足診治指南》[6]：痊愈為潰瘍面、壞疽面消失，疤痕或痂皮形成；好轉為創面分泌物減少，壞死組織基本脫落，潰瘍面積縮小，可見肉芽新生；無效為潰瘍面積擴大或未見縮小，分泌物未見減少，或局部惡化?？傆行?痊愈+好轉。（2）比較兩組患者潰瘍面積，參照姜小飛等[7]的糖尿病足潰瘍面積計算方法，根據創面形狀計算面積，矩形面積=長×寬，類圓形、類橢圓形和類三角形則分別取其外切矩形面積的75%、85%和50%計算。（3）采用免疫組化（SP）法檢測兩組患者創面中央部位肉芽組織中的B淋巴細胞瘤基因2（Bcl-2）和Bcl-2相關X蛋白（Bax）表達水平，Bcl-2抗體、Bax抗體和試劑盒均購自美國Santacruz公司，染色后將胞漿/胞核著棕色者作為陽性染色，磷酸緩沖鹽溶液（PBS）作陰性對照，于400倍光學顯微鏡下隨機選擇5個視野，計算陽性細胞數/總細胞數（%）。

1.5統計學方法

采用SPSS 19.0軟件對數據進行統計分析。計量資料以±s表示，采用t檢驗；計數資料以率表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1兩組患者臨床療效比較

觀察組患者總有效率明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。兩組患者臨床療效比較見表1。

表1　兩組患者臨床療效比較[例（%%）]Tab 1　Comparison of clinical efficacies between 2 groups [case（%%）]

2.2兩組患者潰瘍面積比較

治療前，兩組患者潰瘍面積比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。治療后，兩組患者潰瘍面積均明顯縮小，且觀察組患者潰瘍面積縮小程度明顯大于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。兩組患者治療前后潰瘍面積比較見表2。

表2　兩組患者治療前后潰瘍面積比較（±s ，cm2）Tab 2　Comparison of ulcer area between 2 groups before and after treatment（±s，cm2）

表2　兩組患者治療前后潰瘍面積比較（±s ，cm2）Tab 2　Comparison of ulcer area between 2 groups before and after treatment（±s，cm2）

注：與治療前比較，＊P＜0.05；與對照組比較，#P＜0.05Note：vs.before treatment，＊P＜0.05；vs.control group，#P＜0.05

差值8.14±0.64#6.20±0.55組別觀察組對照組n 潰瘍面積34 34治療前11.03±1.75 11.11±1.82治療后2.74±1.02＊#4.97±1.26＊

2.3兩組患者創面凋亡基因表達水平比較

治療前，兩組患者Bcl-2、Bax比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。治療后2周，兩組患者Bcl-2水平較治療前均明顯升高，Bax水平明顯降低，且觀察組患者的改善程度明顯優于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。治療后3周，兩組患者Bcl-2水平較治療前和治療后2周均明顯升高，Bax水平明顯降低，且觀察組患者的改善程度明顯大于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。兩組患者治療前后創面凋亡基因表達水平比較見表3。

表3　兩組患者治療前后創面凋亡基因表達水平比較（±s，%%）Tab 3　Comparison of the expression of wound apoptotic gene between 2groups before and after treatment（±s，%%）

表3　兩組患者治療前后創面凋亡基因表達水平比較（±s，%%）Tab 3　Comparison of the expression of wound apoptotic gene between 2groups before and after treatment（±s，%%）

注：與治療前比較，＊P＜0.05；與治療后2周比較，#P＜0.05；與對照組比較，ΔP＜0.05Note：vs.before treatment，＊P＜0.05；vs.2weeks after treatment，#P＜0.05；vs.control group，ΔP＜0.05

組別觀察組對照組n Bcl-2 Bax 34 34治療前3.15±1.16 3.12±1.21治療后2周6.77±3.97＊Δ5.45±3.70＊治療后3周13.51±6.74＊#Δ10.02±4.77＊#治療前15.84±7.21 15.90±7.33＊治療后2周10.69±6.10＊Δ13.54±5.31＊治療后3周7.31±4.77＊#Δ11.20±5.03＊#

2.4不良反應

治療過程中，對照組患者有1例出現輕度頭脹，未經干預自行緩解。觀察組患者未見不良反應發生。兩組患者不良反應發生率比較，差異無統計學意義（χ2＝1.015，P＞0.05）。

3　討論

隨著各類新型藥物和監測體系的出現和完善，臨床對糖尿病的治療方案愈發成熟，而糖尿病的并發癥開始成為影響患者生存質量的重要因素。糖尿病足治療難度較大，且預后較差，患者多表現為足部潰瘍和壞疽等癥狀，嚴重者會導致截肢和死亡[8]。隨著對創面愈合分子機制的研究，生長因子在創面愈合進程中的作用逐漸得到認可，生長因子的低表達可能是創面延遲愈合或病情惡化的主要原因[9-10]。

糖尿病足潰瘍的創面修復主要依賴于內源性生長因子，臨床以補充外源性生長因子來加速創面愈合[11]。本研究顯示，觀察組患者給予rhEGF治療糖尿病足的總有效率明顯高于對照組，且潰瘍面積明顯縮小，表示外源性生長因子可發揮與內源性生長因子基本一致的作用，具有良好的促創面愈合效果。對照組患者給予硫辛酸后潰瘍面積也縮小，可能與抗氧化應激相關，硫辛酸可通過改善足部神經、血流狀態發揮療效。王鈺等[12]的研究顯示，補充外源性胰島素樣生長因子-1可促進糖尿病模型大鼠皮膚潰瘍的愈合，表現為增加成纖維細胞與毛細血管肉芽數量。劉如俊等[13]的研究對兔大腿部創口涂抹EGF，15 d后鏡下可見血管新生，組織分層、愈合良好，推測其機制與EGF上調局部組織中EGF信使RNA表達相關。艾俊俊等[14]的研究對激光術后所致皮膚創傷患者給予rhEGF聯用重組牛堿性成纖維EGF進行修復，結果顯示患者的皮膚彈性得到顯著改善，創面愈合良好，與本研究結果一致。

慢性、正常創面在愈合過程中均有細胞凋亡因子的參與，而細胞因子、基因蛋白對細胞凋亡有調控作用[15]。Bcl-2是臨床最早發現的凋亡抑制基因，對不同因素導致的細胞凋亡均有明確的抑制作用，且可通過抗氧化機制抑制細胞凋亡。Bax為促凋亡基因，與Bcl-2互相作用于創面愈合的過程中，當兩者處于失衡狀態時，創面可出現愈合延遲，導致潰瘍發生。陳偉等[16]研究認為，Bax和Bcl-2蛋白在潰瘍、潰瘍邊緣和正常皮膚組織中的表達有明顯區別，兩者表達失衡可誘發潰瘍創面的凋亡增加。在難治性皮膚潰瘍患者中，Bcl-2表達降低，Bax表達上升，抑凋亡及促凋亡機制失衡，從而導致細胞增殖上升。本研究顯示，觀察組患者治療后Bcl-2表達呈上升趨勢，Bax表達呈降低趨勢，且觀察組患者的變化幅度明顯大于對照組，顯示rhEGF的作用機制可能與參與細胞增殖和細胞凋亡調節有關。本研究中觀察組患者未見不良反應發生，表明該方案安全性較好。

綜上所述，rhEGF聯合硫辛酸治療糖尿病足臨床療效較好，且安全性較好。但本研究樣本量較小，且未對遠期復發率進行隨訪觀察，尚待大樣本、多中心、長周期的研究進一步探討。

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（編輯：陶婷婷）

Clinical Observation of Recombinant Human Epidermal Growth Factor Combined with Lipoic Acid in the Treatment of Diabetic Foot

ZHANG Xiangyun1，DING Xiaobin2，LIN Xiufeng1，YANG Ping1，LIN Kai1（1.Dept.of Gastrointestinal and Burn，Chengdong Ward，Sichuan Academy of Medical Science/Sichuan Provincial People’s Hospital，Chengdu 610000，China；2.Dept.of Plastic and Burn，the Affiliated Hospital of Southwest Medical University，Sichuan Luzhou 646000，China）

OBJECTIVE：To investigate the clinical efficacy and safety of recombinant human epidermal growth factor（rhEGF）combined with lipoic acid in the treatment of diabetic foot.METHODS：A total of 68 patients with diabetic foot were randomly divided into observation group and control group with 34 cases in each group.Both groups were given conventional therapy and Lipolic acid injection 0.6 ml added into Sodium chloride injection 250 ml.ivgtt（protecting form light），qd；observation group was additionally given rhEGF for external use 1 ml and vaseline on the wounds，gauze dressing，qd.Treatment course of 2 groups lasted for 7 d.Clinical efficacy，ulcer area，the expression of Bcl-2 and Bax were compared between 2 groups as well as the occurrence of ADR.RESULTS：The total effective rate of observation group（94.1%）was significantly higher than that of control group（67.6%），with statistical significance（P＜0.05）.Before treatment，there was no statistical significance in ulcer area，the levels of Bcl-2 and Bax between 2 groups（P＞0.05）.After treatment，ulcer area decreased significantly，the level of Bcl-2 increased significantly in 2 groups，while the level of Bax decreased significantly；the improvement of observation group was more significant than that of control group，with statistical significance（P＜0.05）.There was no statistical significance in the incidence of ADR between 2 groups（P＞0.05）.CONCLUSIONS：rhEGF combined with lipoic acid is effective for diabetic foot with good safety.

Recombinant human epidermal growth factor；Lipoic acid；Diabetic foot；Wound healing；Efficacy

R587.2

A

1001-0408（2016）29-4147-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.29.38

＊主治醫師，碩士。研究方向：創面修復。電話：028-88424477。E-mail：zxy780502@163.com

（2016-05-11

2016-08-12）