無償獻(xiàn)血者的乳糜血漿對抗-HCV 檢測影響研究

張杰嫦，林雪珍，劉運(yùn)保，虢娟，鄧凱航，賴艷娥，喻紅玲，謝冬梅，黃勇華，張松英，廖麗梅，龔嘉聰，梁偉文

（清遠(yuǎn)市中心血站，廣東 清遠(yuǎn) 511518 ）

0 引言

采供血機(jī)構(gòu)的質(zhì)量目標(biāo)就是為臨床提供安全優(yōu)質(zhì)的血液。而對無償獻(xiàn)血者血液篩查項目之一是抗-HCV 檢測，ELISA 具有可靠性、敏感性、特異性、操作簡便的特點，故在當(dāng)前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中得到了廣泛應(yīng)用。但ELISA 檢測對象要求空腹抽血，標(biāo)本不能有乳糜，而無償獻(xiàn)血者一般都在餐后隨機(jī)獻(xiàn)血，不可避免采集到不同程度的乳糜血液,國內(nèi)有文獻(xiàn)報道乳糜標(biāo)本對ELISA 實驗有影響[1]，但對無償獻(xiàn)血者乳糜血液的檢測報道卻少見，本文就乳糜血漿不同程度對抗-HCV 檢測的影響進(jìn)行探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

檢測無償獻(xiàn)血者血液，分離血漿，收集血漿標(biāo)本320 袋，其中無乳糜血漿（乳糜指數(shù)≤1）40 袋，不同乳糜程度血漿280 袋（乳糜指數(shù)2、3、4、5、6、8 及＞8 各40 袋）。無乳糜的抗-HCV 陽性血液備用。所有實驗用血漿均經(jīng)病毒滅活處理。

1.2 研究方法

1.2.1 試劑與儀器

抗-HCV 試劑（北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司，批號C20180616），SEPAMATIC-SL(III)全自動血液成分分離機(jī)，BSSD-III-01 速凍機(jī)，Xantus 150 全自動加樣系統(tǒng)，BEPIII 全自動酶聯(lián)免疫分析系統(tǒng)(德國西門子公司)，旋渦混合器（國產(chǎn)），移動式乳糜測定儀(自主研發(fā))，儀器經(jīng)檢定合格。

1.2.2 方法

在乳糜血漿中加入定量的抗-HCV 陽性血液，通過不同檢測時間，對不同乳糜指數(shù)血漿檢測，對影響質(zhì)量因素進(jìn)行分析。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測抗-HCV。具體操作按照產(chǎn)品說明書嚴(yán)格進(jìn)行。

1.2.2.1 血漿乳糜指數(shù)檢測

采用移動式乳糜測定儀測定乳糜指數(shù)，并與稀釋法[2]比較取得一致結(jié)果，將乳糜指數(shù)分為≤1、2、3、4、5、6、8 及＞8，選取乳糜指數(shù)為≤1、2、3、4、5、6、8 及＞8 備用。

1.2.2.2 抗-HCV 陽性血液制備

選取高濃度抗-HCV 陽性無乳糜（指數(shù)≤1）血漿，經(jīng)過稀釋，進(jìn)行預(yù)實驗，使測定管的檢測值S/CO 在弱陽性或中等陽性范圍，取稀釋的TP-Ab 陽性血液作為實驗用。本實驗選取的稀釋后陽性血漿S/CO=50.473。

1.2.2.3 抗-HCV 檢測

取乳糜指數(shù)分別為≤1、2、3、4、5、6、8 及＞8 血漿各40 份，每管4mL 血漿，加入200μL 抗-HCV陽性血清，經(jīng)1000g-1498g 離心20min，分層清晰，取無或少乳糜層的中下層血漿檢測抗-HCV。

1.2.2.4 不同時間檢測抗-HCV

測定后樣本，放置4℃，分別于第3 天、第5 天、第7 天、第10 天檢測抗-HCV。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

全部數(shù)據(jù)使用SPSS Statistics 17.0 軟件進(jìn)行匯總、編輯、計算和顯著性歸納。

2 結(jié)果

2.1 乳糜血漿抗-HCV 檢測結(jié)果

對乳糜指數(shù)分別為≤1、2、3、4、5、6、8 及＞8 血漿進(jìn)行抗-HCV 檢測，根據(jù)檢測值，計算X=S/CO,結(jié)果以表示。隨乳糜程度增加，檢測下降，與無乳糜血漿（乳糜指數(shù)≤1）比較，檢測結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果分析如表1。

表1 不同程度乳糜血漿抗-HCV 結(jié)果分析

2.2 不同時間檢測乳糜血漿抗-HCV 結(jié)果

取乳糜指數(shù)分別為≤1、2、3、4、5、6、8 及＞8 血漿，放置4℃，分別于時間第1d、第3d、第5d、第7d、第10d，按離心血漿檢測抗-HCV。結(jié)果顯示：放置時間越長，檢測結(jié)果升高：第1d 與第3d和第5d 的檢測結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），第7d 以上，各指數(shù)抗HCV 結(jié)果分析，見表2。

表2 不同時間檢測乳糜血漿抗-HCV 結(jié)果分析（n=20，）

表2 不同時間檢測乳糜血漿抗-HCV 結(jié)果分析（n=20，）

注：*P＜0.05

3 討論

無償獻(xiàn)血者都是在餐后隨機(jī)捐獻(xiàn)血液,采集乳糜血液的幾率更高。干擾更明顯，故對乳糜血液必須進(jìn)行評估和檢測，才能更好的確保血液的安全性和血液的利用率。不同時間段獻(xiàn)血,乳糜血發(fā)生率間顯著性強(qiáng)[3]，尤其是12:01-13:00、13:01-14:00、14:01-15:00 時間段獻(xiàn)血者乳糜血發(fā)生率顯著高于其他時段，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）[4]。分析原因為午后時段獻(xiàn)血者多為剛進(jìn)餐完畢者，而午餐是一日之內(nèi)主要進(jìn)食時間，進(jìn)食種類較為豐富，高脂肪食物進(jìn)食量多，使得獻(xiàn)血者血脂含量上升，乳糜血報廢率增加[5]。周旭[6]對8212 例獻(xiàn)血者獻(xiàn)血兩餐飲食情況分析顯示獻(xiàn)血前兩餐素食可有效降低乳糜血發(fā)生率，且患者獻(xiàn)血反應(yīng)少[7]。獻(xiàn)血次數(shù)：獻(xiàn)血次數(shù)也是影響乳糜血發(fā)生率的主要原因之一。本研究顯示，隨著獻(xiàn)血次數(shù)增加，獻(xiàn)血人群乳糜血發(fā)生率明顯下降。

獻(xiàn)血者體內(nèi)乳糜成分采用自主研制的移動式乳糜測定儀測定乳糜指數(shù)，對不同程度乳糜血漿的成分血進(jìn)行抗-HCV 的檢測，隨乳糜指數(shù)增加，檢測結(jié)果下降，不同指數(shù)乳糜血漿其結(jié)果無差別：乳糜指數(shù)分別為2、3、4、5、6、8 及＞8 與無乳糜指數(shù)（≤1）檢測結(jié)果比較，P均＞0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義。乳糜程度對實驗干擾不大，但隨乳糜程度增加，血漿中乳糜微粒形成乳糜層，干擾洗板，導(dǎo)致本底顯色加強(qiáng)，還會導(dǎo)致總加樣量的誤差[8-9]，乳糜微粒對酶免疫檢測的影響主要是由于乳糜微粒體積大、比重輕,放置一段時間后會在血液上層形成不同厚度的乳糜層,酶免疫儀器檢測時是根據(jù)由上至下液體高度進(jìn)行加樣。若乳糜層較厚會減少血清加入量,從而使檢測結(jié)果發(fā)生偏差,同時乳糜層有可能覆蓋在游離酶標(biāo)記物、結(jié)合酶標(biāo)記物上,干擾洗板,造成顯色反應(yīng)加強(qiáng)[6]乳糜血液上層放置時間越長,乳糜程度越高,其OD 值與正常血液偏差程度越大4 小時內(nèi),中層和下層液體的OD 值與正常血液比較均差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，同時乳糜程度越輕，中層和下層液體的OD 值與正常血液偏差越小，結(jié)果提示乳糜血液上層容易受到影響，而中層和下層的影響較小[9]。因此，加入乳糜血漿而減少了血清的加樣量，使檢測結(jié)果偏低，變異系數(shù)偏大。

不同乳糜指數(shù)血漿在不同放置時間檢測抗-HCV，放置時間越長，檢測結(jié)果升高，第1d 與第3d 和第5d 的檢測結(jié)果比較，P＞0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，第5d 內(nèi)抗-HCV 檢測結(jié)果對乳糜血液質(zhì)量無影響，第7d 以上，各指數(shù)血漿檢測結(jié)果差異不同。放置時間延長增加檢測的陽性率，為防止因檢測結(jié)果升高，增加血液報廢，乳糜血漿應(yīng)在5d 內(nèi)檢測完畢。人體內(nèi)乳糜血常發(fā)生在進(jìn)餐后。大部分獻(xiàn)血者血脂成分以外源性三酰甘油(TG)增高為主,血漿呈乳白色渾濁狀獻(xiàn)血者體內(nèi)，非特異性的與表面活性劑上的非極性基團(tuán)結(jié)合，從而競爭消耗表面活性劑含量，在CM 濃度與丙肝病毒含量相差懸殊的情況下，使作用于HCV 的表面活性劑含量減少[10],從而干擾HCV 檢測使檢測結(jié)果發(fā)生誤差，導(dǎo)致病人輸血后存在風(fēng)險。另乳糜血發(fā)生還與獻(xiàn)血者性別、年齡、BMI、職業(yè)、獻(xiàn)血時間及獻(xiàn)血次數(shù)等有關(guān)[11]，脂肪含量高的食物或者一些藥物的服用，也會影響到血液標(biāo)本的合規(guī)性[12]，在實際工作中，血液標(biāo)本容易受到多方面因素的影響，因此需要采取措施進(jìn)行提示檢驗結(jié)果準(zhǔn)確度[13]為了用血的安全，首先應(yīng)強(qiáng)化無償獻(xiàn)血宣傳力度,普及獻(xiàn)血知識,將獻(xiàn)血注意事項制作成宣傳手冊發(fā)放;對于前來獻(xiàn)血個體,體檢醫(yī)生應(yīng)詳細(xì)詢問其日常飲食結(jié)構(gòu),計算其BMI,對長期飲食油膩、肥胖和嚴(yán)重肥胖者,則在采集血液之前進(jìn)行乳糜血檢測,合格者方可繼續(xù)獻(xiàn)血行為；同時詢問其獻(xiàn)血前飲食狀況，對近期進(jìn)食過油膩食品或飲酒者，則通過溫和的語言告知其不適于獻(xiàn)血原因，動員其延期獻(xiàn)血，獻(xiàn)血前積極合理篩查可有效降低街頭獻(xiàn)血中乳糜血報廢率[14]。