miR-200b與癌胚抗原在大腸癌中的表達及其相關性*

杜葉平，王海蓮，尹莉莉，武春梅，苗晉華

(中國人民解放軍第二六四醫院檢驗科，太原 030001)

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·論 著·

miR-200b與癌胚抗原在大腸癌中的表達及其相關性*

杜葉平，王海蓮，尹莉莉，武春梅，苗晉華△

(中國人民解放軍第二六四醫院檢驗科，太原 030001)

目的 探討miR-200b與癌胚抗原(CEA)在大腸癌發生、 發展中的表達情況及其表達的相關性。方法 采用實時熒光定量PCR方法分析60例大腸癌組織及正常組織中miR-200b mRNA和CEA mRNA表達結果，分析其與患者臨床資料、病理參數之間的關系，研究大腸癌組織中miR-200b mRNA和CEA mRNA表達的相關性。結果 大腸癌組織中miR-200b mRNA的表達顯著低于正常組織，CEA mRNA顯著高于正常組織，差異均有統計學意義(P<0.01)；患者性別、年齡及腫瘤部位的miR-200b mRNA和CEA mRNA表達結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)；不同組織學分級及TNM分期中，CEA呈現過表達狀態，而miR-200b呈現表達降低或缺失狀態；大腸癌組織中miR-200b和CEA 的表達具有相關性，且呈負相關關系(r=-0.790，P<0.001)。結論 miR-200b在大腸癌組織中呈低表達或表達缺失，與CEA的表達呈一定的負相關關系，提示miR-200b可為腫瘤的診斷和治療提供新的依據。

大腸癌； miR-200b； 癌胚抗原； 實時定量PCR

微小RNA(miR)是一類長度約為22個核苷酸的非編碼單鏈RNA小分子，1993年發現首個miR，其功能特征和作用模式廣受關注[1]。目前，miR-200家族包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-429、miR-141，分別位于第1、12號染色體上。國內外研究表明，miR-200b被認為是一種抑癌基因。癌胚抗原(CEA)最初發現于結腸癌和胎兒腸組織中，然后有學者發現在大腸癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、甲狀腺髓樣癌等多種癌癥中均有明顯表達[2]。CEA作為一個廣譜腫瘤標志物，對大腸癌、乳腺癌和肺癌等的療效判斷、病情發展、監測和預后估計是一個良好的指標，但其特異性不強，敏感性不高，對腫瘤早期診斷作用不明顯。現對大腸癌組織中的miR-200b和CEA mRNA的表達情況及其與臨床病理資料的相關性進行研究，為臨床提供高特異性和敏感性的實驗室數據。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取60例大腸癌患者，男37例，女23例；年齡41～85歲，平均年齡60歲。標本取自大腸癌組織，同時采集距癌旁5 cm外的癌旁正常組織作為對照。所有標本選自2010年6月至2015年7月該院進行手術及胃鏡治療的患者，標本切除后直接用生理鹽水漂洗干凈，保存于-70 ℃冰箱備用。60例大腸癌患者均經病理確診，手術前均未接受任何放療、化療，以及其他針對腫瘤的相關治療等。

1.2 儀器與試劑 美國ABI公司Step OneTMReal-Time PCR 儀。美國Invitrogen公司的Trizol試劑； GAPDH引物(Hs002)、miR-200b與CEA引物序列均由日本TaKaRa公司合成；Fast SYBR Green Master Mix購自美國ABI公司。

1.3 方法 (1)組織總RNA提取：使用DEPC處理實驗的器械和溶液，采用Qiagan公司生產的RNAlater，該試劑可穩定保護RNA避免受RNase的降解，保證RNA樣品質量。組織總RNA的提取過程按照說明書嚴格進行，提取的總RNA保存于-70 ℃冰箱備用。(2)熒光定量PCR：將組織總RNA以通用引物oligo(dT)進行逆轉錄合成cDNA，使用SYBR Premix Ex TaqTM試劑盒，以GAPDH為內參，以癌旁正常組織作為對照標本，每個標本設立3個平行管，反應結束后，采用ABI公司Step OneTM軟件比較CT(ΔΔCT)定量方法進行分析。

2 結 果

2.1 2種組織標本的miR-200b和 CEA mRNA 表達水平 大腸癌組織中miR-200b與CEA mRNA的表達與正常組織比較，均顯著升高，差異均有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 2種組織標本的miR-200b與CEA表達水平

注：與正常組織比較,*P<0.01。

2.2 不同臨床資料的miR-200b和CEA mRNA表達水平 大腸癌患者miR-200b 和CEA mRNA表達呈陽性(+)，兩者在正常組織的表達呈陰性(-)。大腸癌患者的miR-200b陽性表達率為25.00%，CEA陽性表達率為80.81%。見表2。

表2 不同臨床資料的miR-200b和CEA mRNA表達水平

2.2 miR-200b與CEA 表達的相關性以及與病理參數的關系 大腸癌腺癌的高分化、中分化、低分化之間的miR-200b和CEA的表達率，差異有統計學意義(P<0.05)；且分化越低，miR-200b表達率也低，CEA表達率增高；在TNM Ⅰ、Ⅱ期及Ⅲ、Ⅳ期患者中，miR-200b mRNA表達率逐漸減低，CEA mRNA逐漸增高。淋巴轉移組織的miR-200b 表達率低于無轉移者，CEA mRNA表達率則高于無轉移者。大腸癌組織的miR-200b和CEA的mRNA表達具有相關性(r=-0.790,P<0.001)，且呈負相關關系(-1

表3 miR-200b和CEA 表達的相關性以及與病理參數的關系

3 討 論

CEA 是反映腫瘤發生和發展的標志物，在癌癥的診療中發揮重要作用，具有一定程度的指導意義，但因其缺乏足夠的組織特異性和腫瘤特異性，因此在腫瘤的早期診斷、療效評估和預后判定的應用較為局限[3]。

miR是細胞中的非編碼RNA，在腫瘤的發生、發展中起重要作用，是基因表達的關鍵調節子，調節多種生物學進程，如細胞分化、細胞周期、細胞增殖與凋亡、血管生成等。最新研究報道，miR可通過多種方式促進或抑制腫瘤細胞的增殖或轉移。國內外研究表明，miR-200b在胃癌、肝癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌等多種腫瘤中的表達均下調，可抑制癌細胞增殖和遷移[4-8]。

本研究采用一系列的實驗技術分析miR-200b和CEA在大腸癌組織和相應的癌旁正常組織中的mRNA表達水平，同時研究miR-200b和CEA的表達情況與大腸癌臨床病理參數之間的關系，結果顯示，miR-200b在大腸癌組織呈表達降低或缺失的狀態，是導致大腸癌發生、發展的重要因素之一，miR-200b和CEA的表達具有相關性，且呈負相關關系，說明miR-200b表達的改變可與CEA一樣作為大腸癌發生和發展、治療和預后的潛在指標，而miR-200b可能比傳統的蛋白分子類腫瘤標志物更加有效，解決傳統蛋白標志物抗體在準確定量上的局限性，更好地提供大腸癌患者的個體化診療思路，在早期診斷、腫瘤分子分型、藥物篩選、預后評估中具有很大的潛力，并在一定程度上為大腸癌的早期診斷、治療、預后尋求新的思路。

[1]LeeRC,FeinbaumRL,AmbrosV.TheC.elegansheterochronicgenelin-4encodessmallRNAswith antisense complementarity to lin-14[J].Cell,1993,75(5):843-854.

[2]Gold P,Freedman SO.Specific carcinoembryonic antigens of the human digestive system[J].J Exp Med,1965,122(3):467-468.

[3]Kurashige J,Mima K,Sawada G,et al.Epigenetic modulation and repression of miR-200b by cancer-associated fibroblasts contribute to cancer invasion and peritoneal dissemination in gastric cancer[J].Carcinogenesis,2015,36(1):133-141.

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[7]Khler CU,Bryk O,Meier S,et al.Analyses in human urothelial cells identify methylation of miR-152,miR-200b and miR-10a genes as candidate bladder cancer biomarkers[J].Biochem Biophys Res Commun,2013,438(1):48-53.

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The expression of miR-200b and CEA and the correlation between the two factors in colon cancer*

DUYeping,WANGHailian,YINLili,WUChunmei,MIAOJinhua△

(DepartmentofClinicalLaboratory，the264thHospitalofPLA,Taiyuan,Shanxi030001,China)

Objective To study the expression of transcription factor miR-200b and CEA and the correlation between the two transcription factors in the process of occurrence and development of colorectal cancer.Methods Expression miR-200b and CEA mRNA by real-time PCR in 60 colon cancer tissues and corresponding normal tissues were detected and the results were compared with the clinical features and pathological characters.The relationship between the mRNA expression of miR-200b and CEA in 60 colon cancer tissues was determined.Results The expression rate of CEA mRNA was detectable to highly expressed rates in colon cancer tissues than that in matched normal tissues (P<0.01),whereas miR-200b mRNA in the colon cancer tissues was significantly lower than that in the matched normal tissues(P<0.01).There was no significant correlation between miR-200b,CEA mRNA expression and age,sex,tumor location(P>0.05).Loss expression or down regulation expression of miR-200b mRNA was detected,whereas CEA mRNA was detectable to highly expressed in the different histological grade and Dukes stages.The expression of miR-200b mRNA and CEA mRNA were positively correlated with the histological grade in colon cancer.A significant correlation was found between the expression of miR-200b mRNA and CEA mRNA (r=-0.790,P<0.001).Conclusion Loss or down regulation expression of miR-200b mRNA,whereas CEA is detectable to highly expressed in colon cancer.Negative correlation occurred in miR-200b mRNA and CEA mRNA indicates that miR-200b and CEA provide the new clues of genetic diagnosis and treatment.

colon cancer; miR-200b; CEA; real-time PCR

山西省自然科學基金資助項目(2013011043-4)。

杜葉平，女，主管技師，主要從事腫瘤分子生物學研究。△

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.002

A

1673-4130(2016)20-2808-03

2016-03-20

2016-06-26)