組分配伍四逆湯對甲狀腺功能減退并發高脂血癥及心血管系統損害的影響

王 艷，裴妙榮

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組分配伍四逆湯對甲狀腺功能減退并發高脂血癥及心血管系統損害的影響

王 艷，裴妙榮

目的 研究組分配伍四逆湯對甲狀腺功能減退癥并發高脂血癥及心血管系統損害的影響。 方法 將96只大鼠隨機分為空白組、模型組、陽性對照組、四逆湯有效組分高劑量組(CSDH組)、四逆湯有效組分中劑量組(CSDM組)、四逆湯有效組分低劑量組(CSDL組)。除空白組外，其他組連續灌胃丙硫氧嘧啶(PTU)溶液0.01 g/kg 15 d制造甲狀腺功能減退癥模型，用組分配伍四逆湯高、中、低劑量和左甲狀腺素片(優甲樂)對此動物模型進行治療，連續給藥1個月，治療同時隔日給予0.1% PTU維持甲狀腺功能減退癥狀態，實驗結束后，取血，離心分離血清；取心臟做10%心臟組織勻漿，以血清膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)為指標，觀察組分配伍四逆湯對甲狀腺功能減退癥并發高血脂的影響；以血清心鈉素(ANP)、內皮素(ET)及心肌組織Na+-K+-ATP酶的活力為指標，觀察組分配伍四逆湯對甲狀腺功能減退癥心血管系統的影響。結果 與空白組比較，模型組血清三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)水平明顯降低(P<0.01)，高敏促甲狀腺激素(TSH)水平顯著升高(P<0.01)；與模型組相比，四逆湯有效組分高、中劑量組可升高血清T3、T4水平，降低TSH水平(P<0.05)；與空白組相比，模型組TG、TC及LDL-C明顯升高(P<0.05或P<0.01)；與模型組相比，四逆湯有效組分高、中劑量組的TG、TC及LDL-C明顯減少(P<0.05)。與空白組比較，模型組及各藥物治療組血清ANP、ET水平及心臟組織Na+-K+-ATP酶顯著降低(P<0.05或P<0.01)，與模型組相比，四逆湯有效組分各劑量組ANP水平顯著升高(P<0.01)，四逆湯有效組分配伍高劑量組血清ET水平明顯升高(P<0.05)，四逆湯有效組分配伍組心臟組織Na+-K+-ATP酶有所升高，但差異無統計學意義。結論 組分配伍四逆湯可緩解甲狀腺功能減退癥并發高血脂及心血管系統損害。

甲狀腺功能減退癥；高脂血癥；心血管損害；四逆湯

甲狀腺功能減退癥是由于多種原因引起的甲狀腺激素(TH)合成、分泌或生物效應不足所致的全身低代謝綜合征，可引起智力、心血管、消化、肌肉、血液、內分泌等多系統的疾患，引發眾多并發癥，如：甲狀腺功能減退癥合并心臟病及高脂血癥。甲狀腺激素缺乏可影響心肌組織Na+-K+-ATP酶活性障礙，導致細胞間質黏蛋白和黏多糖沉積，間質水腫[1]，近而引起心肌收縮力減弱及心臟擴大。甲狀腺功能減退癥病人存在不同程度的心肌酶學改變，經甲狀腺激素替代治療后心肌酶學可恢復正常[2]。 甲狀腺激素還可影響脂肪的合成及分解，且分解作用大于合成作用，因此甲狀腺功能減退癥病人可繼發高脂血癥，主要是三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)升高。本課題組前期研究表明以有效組分配伍形式的四逆湯對甲狀腺功能減退癥具有較好的治療作用，可改善甲狀腺功能減退癥動物的癥狀及體征，且能夠升高甲狀腺功能減退癥動物的甲狀腺激素水平[3]，本研究探討組分配伍四逆湯對甲狀腺功能減退癥并發高脂血癥及心血管系統改變的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 TG、總膽固醇(TC)、LDL-C、Na+-K+-ATP酶測試盒，南京建成生物工程研究所生產；心鈉素(ANP)、內皮素(ET)酶聯免疫檢測試劑，美國RB生物制劑有限公司生產；三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)、高敏促甲狀腺激素(TSH)放免藥盒購自北京北方生物技術研究所；氯化鈉、乙醚、甲醛等化學試劑由天津市瑞金特化學品有限公司生產；附子采自四川省江油市，干姜購自成都五塊石藥材市場，甘草購自山西省藥材公司，經山西中醫學院中藥鑒定教研室裴香萍副教授鑒定分別為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx.的子根、姜科植物姜Zingiber Officinale Rose.的根莖及豆科甘草屬植物甘Glycyrrhiza uralensis Fisch.的根及根莖。KQ3200E型超聲波清洗器；FSH-Ⅱ型高速電動勻漿器，江蘇金壇生產；Spectra Max190全波長酶標儀，美國分子公司生產；352型洗板機：芬蘭(Thermo Labsystems)生產；TV-1810 紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司生產。

1.2 實驗方法

1.2.1 四逆湯各藥味有效組分的制備 前期以附子主要生物堿、干姜總揮發油及甘草中的甘草酸和甘草苷作為指標，采用正交設計法篩選四逆湯中各組成藥味組分(以總生物堿為主的附子組分、干姜總揮發油組分、以總皂苷及總黃酮苷為主的甘草組分)提取、分離的最佳工藝參數，根據最佳工藝提取、分離各組分，用β-環糊精包合干姜揮發油。并分別測定附子組分中代表性成分單酯型和原堿型烏頭堿、中烏頭堿、次烏頭堿的含量，甘草組分中甘草酸及甘草苷的含量及干姜總揮發油包合物中α-姜烯的含量；并采用指紋圖譜的方法對各組分中的成分進行系統檢測，對其質量進行多指標控制，保證各組分質量的穩定。并將附子組分、干姜組分及甘草組分3個劑量水平，采用正交設計，組成不同劑量比組分配方給藥，以甲狀腺功能減退癥模型大鼠的甲狀腺激素水平為指標，篩選出最佳組分配伍劑量比，即四逆湯藥物有效組分用于本次實驗。

1.2.2 分組及造模給藥 取96只大鼠，隨機分為空白組、模型組、陽性對照組、四逆湯有效組分高劑量組(CSDH組)、四逆湯有效組分中劑量組(CSDM組)、四逆湯有效組分低劑量組(CSDL組)。除空白對照組外，其余各組以1 mL/100 g體積灌胃給予0.1%的丙硫氧嘧啶(PTU)溶液(即劑量為10 mg/kg)給予造模組灌胃造模，空白組灌胃同體積自來水，每日1次，連續15 d。造模15 d后，除空白對照組外，其余各組每隔1 d按1 mL/100 g體積灌胃給予0.1%的PTU溶液，空白組灌胃同劑量自來水。四逆湯有效組分高、中、低劑量組按1 mL/100 g分別灌胃給藥，四逆湯有效組分高劑量9.6 g生藥/kg、四逆湯有效組分中劑量4.8 g生藥/kg、四逆湯有效組分低劑量2.4 g生藥/kg；陽性藥物組按1 mL/100 g灌胃給藥左甲狀腺素鈉片(優甲樂)；空白組和模型組灌胃同劑量自來水，每日1次，連續給藥1個月。

1.2.3 樣本采集 末次給藥結束后，稱重，麻醉，從眼眶靜脈叢取血，3 500 r/min離心10 min，取上清。解剖大鼠，取心臟，用生理鹽水勻漿制成10%的心肌組織勻漿液。

1.2.4 檢測指標 用放免法測定血清T3、T4、TSH水平，觀察其對甲狀腺功能的影響；用分光光度計法測定血清TG、TC、LDL-C及Na+-K+-ATP酶的活力；用酶聯免疫吸附法測定血清心鈉素及內皮素含量。

2 結 果

2.1 組分配伍四逆湯對甲狀腺功能減退癥大鼠血清T3、T4及TSH的影響 與空白組比較，模型組大鼠血清中T3、T4水平明顯降低(P<0.01)；大鼠血清中TSH水平明顯升高(P<0.01)；與模型組相比較，陽性對照組及四逆湯各劑量組大鼠血清中T3、T4水平均有所升高，TSH水平顯著降低，其中陽性對照組及四逆湯有效組分高、中劑量組作用效果顯著(P<0.05或P<0.01)。詳見表1。

表1 四逆湯有效組分配伍對甲狀腺功能減退癥大鼠血清T3、T4及TSH的影響(±s)

2.2 組分配伍四逆湯對甲狀腺功能減退癥脂代謝紊亂的影響 與空白組相比，模型組膽固醇明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，各藥物治療組的TC、TG、LDL-C水平均有所減低，其中陽性對照組及四逆湯有效組分配伍中劑量組作用效果顯著(P<0.05或P<0.01)。詳見表2。

表2 組分配伍四逆湯對甲狀腺功能減退癥大鼠血清血脂的影響(±s) μg/L

2.3 組分配伍四逆湯對甲狀腺功能減退癥性心血管系統的影響 與空白組比較，模型組及各藥物治療組血清心鈉素水平顯著降低(P<0.01)，說明甲狀腺功能減退癥狀態可導致血清心鈉素水平嚴重降低；與模型組相比，陽性對照組及組分配伍四逆湯各劑量組血清心鈉素水平顯著升高(P<0.01)，說明甲狀腺功能減退癥可導致心鈉素水平降低，組分配伍四逆湯可糾正甲狀腺功能減退癥對心鈉素的影響。詳見表3。與空白組比較，模型組及各藥物治療組血清內皮素水平顯著降低(P<0.01)，說明甲狀腺功能減退癥狀態可導致血清內皮素水平嚴重降低；與模型組相比，陽性對照組血清內皮素水平升高顯著(P<0.01)，組分配伍四逆湯高劑量組血清內皮素水平升高，差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表3。

與空白組比較，模型組心臟組織Na+-K+-ATP酶活力明顯降低(P<0.05)，與模型組相比，陽性對照組及組分配伍四逆湯各治療組血清心鈉素水平有所升高，但差異無統計學意義，說明甲狀腺功能減退癥可影響心臟組織Na+-K+-ATP酶活力，組分配伍四逆湯對甲狀腺功能減退癥對心臟組織Na+-K+-ATP酶活力也有一定的影響。詳見表3。

表3 各組大鼠血清心鈉素、內皮素及Na+-K+-ATP酶活力比較(±s) ng/L

3 討 論

四逆湯源于張仲景的《傷寒論》，是治療少陰虛寒證的代表方劑，方中以附子為君藥，辛甘大熱，溫補腎中陽氣，干姜為臣，辛熱之性回守中陽，甘草味甘為使與君臣配伍正合辛甘化陽之旨，三藥相合，可溫補脾腎之陽。甲狀腺功能減退癥多數醫家認為其主要病機為脾腎陽虛證，因此用四逆湯治療甲狀腺功能減退癥正合本病病機。本課題組前期研究表明給大鼠灌服一定濃度的PTU可造成甲狀腺激素水平的降低并見陽虛證表現，用四逆湯治療后，陽虛癥狀改善，甲狀腺激素水平亦逐漸恢復，雄性大鼠的睪酮(T)水平明顯提高，證實了四逆湯對甲狀腺功能減退癥有確切的治療作用[3]。由于傳統中藥方劑成分復雜、療效機制不明確、質量難以控制的原因，已成為中藥方劑現代化、國際化發展的瓶頸。中藥復方有效組分配伍是以中醫藥理論為基礎，利用現代研究方法，在基本認識中藥藥效物質的基礎上，優化設計，針對臨床適應證，篩選出最佳的中藥處方。本課題組在前期對四逆湯進行了深入的研究，證實了全方藥味合煎，附子中生物堿類成分和甘草中甘草酸會相互締合生成大分子復合物(已測知該復合物的結構及溶解性、穩定性等性質)，此復合物在胃液、腸液中都不能溶解，不被吸收，使四逆湯療效不能充分發揮，繼而確定了以有效組分配伍形式組成復方-組分配伍的四逆湯，并以甲狀腺功能減退癥動物為模型篩選出各有效組分的最佳配伍比例，本次研究在此基礎上設立高、中、低3個劑量組，觀察有效組分配伍形式的四逆湯對甲狀腺功能減退癥并發脂代謝紊亂及心血管系統損害的作用效果[4]。

甲狀腺功能減退癥與血脂有較強的相關性，可導致脂代謝紊亂。甲狀腺功能減退癥時由于甲狀腺激素水平降低，對膽固醇的合成作用強于降解及轉化作用，引起血清TC水平升高，并使LDL-C受體數目減少，LDL-C降解速度減慢，其濃度升高。故甲狀腺功能減退癥時一般表現為LDL-C的升高，有時可伴有TG的升高。另外，臨床研究顯示[5]：由于甲狀腺激素能夠促進TC的降解與合成，而且降解作用明顯大于促進合成作用，甲狀腺功能減退癥病人機體內LDL-C升高，肝臟內TG轉變為膽酸明顯減少，血漿內TC升高。甲狀腺激素對脂肪細胞LDL-C具有抑制作用，能夠導致甲狀腺功能減退癥病人機體內血漿的LDL-C水平明顯升高。甲狀腺激素亦可抑制TG合成，導致組織對其他脂解激素敏感性降低，從而刺激脂肪酸的釋放，提高TG清除率。本實驗結果表明：與空白組相比，模型組TC、TG、LDL-C明顯升高，說明甲狀腺功能減退癥狀態存在脂代謝的紊亂。與模型組相比，組分配伍四逆湯組TC、TG、LDL-C明顯降低。本研究表明組分配伍四逆湯可糾正甲狀腺功能減退癥狀態的脂代謝紊亂，其作用機制可能與其對原發病的治療有關。

研究表明[6]：甲狀腺功能減退癥病人有70%左右合并心血管系統損害，表現為心臟功能及傳導異常、心臟擴大、心包積液產生。甲狀腺功能減退癥對心臟的影響包括心肌、心包及冠狀動脈3個方面，由于甲狀腺激素水平較低，心臟組織細胞Na+-K+-ATP酶活性減低，黏多糖清除受阻，導致細胞內鈉潴留，細胞腫脹、變性、壞死、斷裂，細胞間黏蛋白和黏多糖沉積，間質水腫，進而引起心肌收縮力減弱及心臟擴大。Na+-K+-ATP酶是維持細胞內外正常離子濃度的調節酶，與細胞正常能量代謝關系密切，其可調節心肌收縮力、維持中樞神經興奮性、參與細胞內外Na+、K+離子的主動跨膜轉運[7]。本實驗結果表明：與空白組相比，模型組動物心肌組織Na+-K+-ATP酶活力降低，與模型組比較，各藥物治療組心肌組織Na+-K+-ATP酶活力有所升高，提示甲狀腺功能減退癥可影響心肌組織Na+-K+-ATP酶活力，藥物治療后可在一定程度上減輕甲狀腺功能減退癥狀態心肌組織的變化，提高Na+-K+-ATP酶活力。

ANP和ET是與心血管功能密切相關的兩種生物活性物質，參與了多個系統的生理病理活動，并與甲狀腺激素水平密切相關，因此了解ANP和ET水平對于了解甲狀腺功能減退癥病人心血管功能及預防心血管系統并發癥具有重要的意義[8]。ANP是由心房細胞分泌的一種多肽，具有利鈉、利尿、擴張血管及降壓等作用，ANP含量與甲狀腺激素水平密切相關。臨床研究表明[9]：甲狀腺功能減退癥時，病人血漿ANP水平較正常對照組明顯降低。其原因可能是由于甲狀腺功能減退時細胞膜上Na+-K+-ATP酶活性降低，血容量降低，交感神經興奮性降低等因素影響心房肌細胞心鈉素的合成和釋放。本實驗結果表明：與空白組相比，模型組及各給藥組血清ET水平顯著降低，這與臨床研究結果一致。與模型組相比，各藥物治療組血清ET的水平顯著升高，說明藥物治療組可緩解甲狀腺功能減退對心房肌細胞心鈉素的合成和釋放。

ET是一種有內皮細胞產生的具有強烈縮血管活性的多肽，在生理狀態下，內皮細胞合成ET很少，且清除速度很快，所以血清中ET濃度很低，但在內皮細胞損傷、組織缺血缺氧等情況下，可導致內皮細胞大量合成ET，因此心血管系統有病理改變時可導致ET改變。ET的合成和釋放同時還受甲狀腺激素的影響，甲狀腺激素可提高機體對兒茶酚胺、血管緊張素Ⅱ等活性物質的敏感性，促進ET的合成和釋放。臨床研究表明[10]：甲狀腺功能減退癥時血清ET水平降低，與機體呈低代謝狀態，對兒茶酚胺的敏感性下降有關。本實驗結果表明，與空白對照組相比，模型組及各給藥組血清ET的水平顯著降低，說明了本模型符合甲狀腺功能減退癥時心血管系統的改變。與模型組比較，陽性組及四逆湯有效組分配伍高劑量組血清ET水平明顯提高，說明組分配伍四逆湯可改善甲狀腺功能減退癥時機體的低代謝狀態，提高機體對兒茶酚胺的敏感性。

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(本文編輯郭懷印)

Influences of Component Comptibility Sini Decoction on Hypothyroidism Complicated with Hyperlipidemia and Cardiovascular Injury

Wang Yan，Pei Miaorong

College of Chinese Materia Medica，Shanxi University of Traditional Chinese Medicine，Taiyuan 030024，Shanxi，China Corresponding Author：Pei Miaorong

Objective To investigate the influences of component comptibility Sini decoction (CCSD) on hypothyroid complicated with hyperlipemia and cardiovascular injury.Methods The hypothyroidism model was established by 0.1% propylthiouracil (PTU) solution 10 mL/kg for 15 days.The hypothyroidism animal were randomly divided into model group，CCSD high，middle，low dose group and positive drugs group，at the same time the mice should give the 0.1% PTU for 4 weeks.At the end of the experiment，took the blood and kidney，separated the serum.Radioimmunoassay was used to determine the serum triiodothyronine (T3)，thyroxine (T4).UV spectrophotometer was used to detected the total cholesterol (TC)，triglyceride (TG)，low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C)，myocardium Na+-K+-ATP enzyme activity concentration.ELEASE method were used to measure the serum atrial natriuretic peptide (ANP)，endothelin (ET).Results Compared with blank group，T3，T4 concentration were decreased while thyroid-stimulating hormone (TSH) concentration was increased in model group (P<0.01).Compared with model group，TG，TC，LDL-C levels were decreased in CCSD high，middle dose group(P<0.05).Compared with blank group，TG，TC，LDL-C levels were increased(P<0.05 or P<0.01).Compared with model group，T3，T4 concentration were increased while TSH concentration was decreased in CCSD high，middle dose group(P<0.05).The levels of ANP，ET and Na+-K+-ATP enzyme activity in model group and CCSD group(P<0.05 or P<0.01).Compared with model group，ANP level was increased in CCSD groups(P<0.01).ET level was increased in CCSD high dose group(P<0.05).Conclusion CCSD can alleviate hyperlipemia and cardiovascular injury in hypothyroidism model rats.

hypothyroidism；hyperlipemia；cardiovascular injury；Sini decotion

國家自然基金項目(No.81373546)；山西中醫學院“2011協調創新”項目

山西中醫學院中藥學院(太原 030024)

裴妙榮，E-mail：peimr602@163.com

R589 R259

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2016.19.009

1672-1349(2016)19-2236-05

2016-05-26)

引用信息：王艷，裴妙榮.組分配伍四逆湯對甲狀腺功能減退并發高脂血癥及心血管系統損害的影響[J].中西醫結合心腦血管病雜志，2016，14(19)：2236-2240.