復發性翼狀胬肉中VEGF表達情況的臨床研究

鄭蘭育

【摘要】 目的：探討VEGF在原發性翼狀胬肉組織、復發性翼狀胬肉組織和正常球結膜組織中的表達情況。方法：選取2015年4月-2016年4月無錫第二人民醫院眼科的翼狀胬肉患者胬肉病理組織共40例作為試驗組，其中原發性翼狀胬肉30例，復發性翼狀胬肉10例，另選取正常球結膜組織10例作為對照組。采用HE染色的方法觀察正常球結膜、原發性翼狀胬肉患者和復發性翼狀胬肉患者的組織學形態，比較三種組織形態差異。采用免疫組化方法對各組標本進行染色，利用IPP圖像軟件系統測定標本中VEGF表達情況的平均光密度值，采用SPSS 17.0軟件進行統計分析。結果：30例原發性翼狀胬肉患者的VEGF表達值為（0.0082±0.0004），10例正常球結膜患者VEGF表達值為（0.0037±0.0016），10例復發組翼狀胬肉患者VEGF表達值為（0.0232±0.0014），將三組測量結果通過非參數秩和檢驗比較，差異有統計學意義（F=240.211，P<0.01）。復發組翼狀胬肉患者VEGF表達值比原發組翼狀胬肉患者增高，差異有統計學意義（P<0.01），原發組翼狀胬肉VEGF表達值與正常組VEGF表達值相比增高，差異有統計學意義（P<0.01）。結論：VEGF在復發組翼狀胬肉患者中高表達，表明VEGF參與了翼狀胬肉疾病的復發過程。

【關鍵詞】 復發性翼狀胬肉； 血管內皮生長因子

【Abstract】 Objective：To investigate the expression of VEGF in primary pterygium，recurrent pterygium and normal conjunctiva.Method：From April 2015 to April 2016，40 cases of pterygium in Wuxi NO.2 Peoples Hospital were selected as the experimental group，including 30 cases of primary pterygium，10 cases of recurrent pterygium，another 10 cases of normal conjunctival tissue were selected as control group.HE staining was used to observe the histological morphology of normal conjunctiva，primary pterygium patients and recurrent pterygium patients，and to compare the differences between the three groups.The samples were stained with immunohistochemical method. The average light density of VEGF expression was measured by IPP image software system， and the SPSS 17 software was used for statistical analysis.Result：30 cases of primary pterygium was VEGF expression value of（0.0082±0.0004），10 cases of normal conjunctiva in patients with VEGF expression value of（0.0037±0.0016），10 cases of recurrence of pterygium patients the expression of VEGF was（0.0232±0.0014），three groups of measurement results by nonparametric rank sum test，the difference was statistically significant（F=240.211，P<0.01）.The expression of VEGF in patients with pterygium recurrence group than primary pterygium were significantly increased，the difference was statistically significant（P<0.01），primary pterygium group and normal group VEGF expression values of VEGF expression values increased，the difference was statistically significant（P<0.01）.Conclusion：VEGF was highly expressed in the recurrent group，which indicated that VEGF is involved in the recurrence of pterygium.

【Key words】 Recurrent pterygium； Vascular endothelial grow factor

First-authors address：Wuxi NO.2 Peoples Hospital，Wuxi 214000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.30.010

翼狀胬肉是眼科常見的疾病，羅中伶等[1]調查東莞市橫瀝鎮40歲及以上戶籍人口翼狀胬肉的患病率為24.85%，其在臨床上表現為瞼裂部球結膜組織侵襲性生長至角膜的偽肉組織，病變多數發于鼻側，侵犯角膜緣后進一步增大，病情嚴重者可越過瞳孔區而遮蓋患者視野。復發性翼狀胬肉患者，胬肉組織常常充血發炎，再次手術復發率進一步增加，給患者的工作和生活帶來許多麻煩，本試驗通過比較原發性翼狀胬肉、復發性翼狀胬肉、正常球結膜組織中VEGF表達情況，探討VEGF在翼狀胬肉發生、發展以及復發過程中的作用，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年4月-2016年4月無錫第二人民醫院診斷為翼狀胬肉，并經術后病理證實明確為胬肉組織40例為試驗組，男11例，女29例，年齡39～79歲，平均（60.60±10.07）歲。原發性翼狀胬肉30例，男7例，女23例，年齡38～77歲；復發翼狀胬肉10例，男4例，女6例，年齡40～67歲；選取行斜視矯正術患者球結膜組織作為對照組（標本采集均取得患者同意），男3例，女7例，年齡38～69歲。三組一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性，見表1。所有入選患者術前均排除眼外傷史，排除眼部活動性病史。所有入選患者均取得患者本人同意，并經由本院倫理委員會批準。

1.2 方法 實驗所需的儀器由無錫第二人民醫院病理科提供，抗VEGF單克隆抗體由北京中衫金橋生物公司提供，即用型SABC試劑盒購自上海博正生物公司。術前0.03%聚維酮碘眼部沖洗，術中取下的胬肉組織，經20%福爾馬林，固定6～8 h，切片后進行相關HE染色和免疫組化染色。

1.3 測量 采用image-proplus進行圖像分析，對VEGF陽性區域進行光密度測量，比較試驗組和對照組陽性區域光密度值。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0進行相關統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗，三組VEGF表達值比較采用非參數K-S檢查進行統計分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HE染色 鏡下見球結膜主要由上皮層和基質層構成，上皮層以非角化的復層鱗狀上皮組織為主，基質層以疏松的結締組織為主，基質層中見少量毛細血管、淋巴細胞等炎性細胞，見圖1。翼狀胬肉上皮層增生顯著，基質層見大量纖維血管組織，同時伴大量炎性細胞浸潤，見圖2。復發性翼狀胬肉組織較原發性翼狀胬肉組織增生厚度更加明顯，炎性細胞數量更多，基質層的毛細血管雜亂排列，見圖3。

2.2 免疫組化染色 VEGF的陽性表達區域表現為棕黃色顆粒沉著于翼狀胬肉的上皮細胞層及血管內皮細胞，而在結膜組織陽性表達部位僅見于上皮基底層細胞有輕微表達，見圖4～6。30例原發性翼狀胬肉患者的VEGF表達值為0.0082±0.0004，10例正常球結膜患者VEGF表達值為0.0037±0.0016，10例復發組翼狀胬肉患者VEGF表達值為0.0232±0.0014，將三組測量結果通過非參數秩和檢驗比較，差異有統計學的意義（F=240.211，P<0.01）。復發組翼狀胬肉患者VEGF表達值比原發組翼狀胬肉患者增高，差異有統計學的意義（P<0.01），原發組翼狀胬肉VEGF表達值與正常組VEGF表達值相比增高，差異有統計學意義（P<0.01）。

3 討論

在翼狀胬肉患者病理組織中，血管內皮細胞生長因子具有調整控制血管組織形成的作用[2-3]，這種細胞因子可以使血管通透性進一步增加，導致血漿及血細胞滲漏，同時血管內皮細胞生長因子還起到增加血管內皮細胞進行遷移、游走以及新生血管組織形成的作用[4]。本文的研究與以往的研究相同，血管內皮細胞生長因子在翼狀胬肉中的表達程度遠遠高于在正常的球結膜部位[5]，這可以充分說明血管內皮細胞生長因子參與了翼狀胬肉發病過程[6]，目前血管內皮細胞因子主要有主要發現三種類型的受體[7]，血管內皮細胞生長因子只有在受體VEGFR-2相互結合后才可以起到增加血管壁的通透性的作用，同時可以通過觀察VEGFR-2在不同組織中的不同表達程度來間接判斷該組織的血管新生能力，文獻[8]研究表明血管內皮細胞生長因子具有誘導血管組織及纖維細胞組織增殖的作用，翼狀胬肉主要是由血管組織和纖維組織構成，血管內皮細胞生長因子在翼狀胬肉中的高表達進一步證明了這種觀點。在復發組翼狀胬肉患者中，血管內皮細胞生長因子表達程度明顯高于原發性翼狀胬肉組，由此筆者推測復發組翼狀胬肉患者血管新生能力高于原發性翼狀胬肉患者，血管內皮細胞因子可能參與了翼狀胬肉的復發過程，正常球結膜組織在病理情況下血管內皮細胞的高表達促進了結膜組織的增生以及新生血管組織的形成[9]，在復發組翼狀胬肉患者中基質層含有更多的新生血管組織，而新生血管的產生與組織損傷、缺血后自我修復密切相關，由此筆者推測翼狀胬肉術后復發的這部分患者可能與術后異常增多的血管內皮細胞生長因子相關。

在本研究中與其他已有的報道中都可以發現在翼狀胬肉患者上皮下組織中含有較多的新生血管成分，這種新生血管成分在復發性翼狀胬肉患者中表現更為突出，血管內皮細胞生長因子是當前引起組織新生血管形成的較強的細胞因子，它可以使微血管組織的通透能力明顯增加，誘導血管內皮細胞組織發生分裂能，同時使組織因子產生增加，血管內皮細胞因子在病變組織中的含量可以應用于判斷該組織新生生血管活性的指標，復發組翼狀胬肉患者血管內皮細胞因子的表達值增高，可以反映出復發組翼狀胬肉患者血管內皮細胞增殖能力較強[10]，這同時也證明再次行翼狀胬肉手術后其復發率可能進一步增加，再次行翼狀胬肉手術前必須加強抗感染時間，必要時予以聯合應用抗代謝增殖藥物[11-13]，復發性翼狀胬肉組織局部注射抗VEGF藥物治療可能是一種較好的選擇[14-15]。

參考文獻

[1]羅中伶，張立新，朱國平，等.東莞市橫瀝鎮40歲及以上人群翼狀胬肉患病率調查[J].國際眼科雜志，2014，14（7）：1292-1294.

[2] Hoyama E，Viveiros M M H，Shiratori C，et al.Expression of vascular endothelial growth factor（VEGF） in macrophages，fibroblasts，and endothelial cells in pterygium treated with 5-Fluorouracil[J].Seminars in Ophthalmology，2015，30（3）：1-6.

[3] Poenaru Sava M G，Raica M L，Cimpean A M.VEGF mRNA assessment in human pterygium： a new scope for a future hop[J].Ophthalmic Research，2014，52（3）：130-135.

[4] Kim K W，Park S H，Wee S W，et al.Overexpression of angiogenin in pterygium body fibroblasts and its association with proliferative potency[J].Investigative Ophthalmology & Visual Science，2013，54（9）：6355-6362.

[5]彭暢，蔣正軒，梁坤，等.翼狀胬肉中血管內皮生長因子、內皮抑素的表達以及新生血管生成情況[J].安徽醫科大學學報，2014，49（5）：645-648.

[6] Ribatti D.The crucial role of vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor in angiogenesis：a historical review[J].British Journal of Haematology，2005，128（3）：303-309.

[7] Gebhardt M，Mentlein R，Schaudig U，et al.Differential expression of vascular endothelial growth factor implies the limbal origin of pterygia[J].Ophthalmology，2005，112（6）：1023-1030.

[8] Livezeanu C，Cr?i?oiu M M，M?nescu R，et al.Angiogenesis in the pathogenesis of pterygium[J].Romanian Journal of Morphology and Embryology，2011，52（3）：837-844.

[9]宋寅偉.翼狀胬肉新生血管形成機制及其治療的研究進展[J].中華實驗眼科雜志，2012，30（2）：172-175.

[10]李永平，朱哲，張文忻，等.翼狀胬肉纖維組織起源于間充質干細胞的證據[J].中國組織工程研究，2008，28（34）：6771-6775.

[11]夏朝霞，楊筱曦，馮志貞，等.抑制翼狀胬肉術后血管增生免疫納米微球VEGF McAb-PLA（Tet）-NP的制備方法研究[J].中華眼科醫學雜志：電子版，2016，6（3）：124-129.

[12]鄭嵐.翼狀胬肉切除聯合平陽霉素沖洗預防翼狀胬肉復發[J].中國老年學雜志，2011，31（23）：4701-4702.

[13]景聰榮，白石，焦建慈.翼狀胬肉切除聯合絲裂霉素C及羊膜移植手術對預防翼狀胬肉復發作用臨床觀察[J].中國社區醫師：醫學專業，2010，12（26）：100.

[14]劉祎，沙翔垠，彭娟，等.Avastin對翼狀胬肉成纖維細胞增殖的影響[J].眼科新進展，2014，34（9）：813-816.

[15] Mak R K，Chan T C Y，Marcet M M，et al.Use of anti‐vascular endothelial growth factor in the management of pterygium[J].Acta Ophthalmologica， 2016，94（4）：1-8.

（收稿日期：2016-06-28） （本文編輯：郎威）