苦丁茶對自發性高血壓大鼠心室重構的影響

申屠敏華++王賽斌++李棟++楊爐剛++陳向東

[摘要] 目的 研究苦丁茶對自發性高血壓大鼠心室重構的影響。 方法 將實驗大鼠隨機分為SHR苦丁茶處理組、SHR空白組以及WKY對照組，實驗8周后觀察大鼠血壓、心肌厚度、LVWI值、CVF值、PVCA值、H-E和Masson染色病理學情況以及心肌AdipoR1 mRNA與AdipoR1蛋白表達情況。 結果 苦丁茶作用8周后，SHR苦丁茶處理組大鼠收縮壓、左心室厚度、LVWI值、CVF值和PVCA值均低于SHR空白組，差異具有統計學意義（P<0.05）。病理學改變上SHR苦丁茶處理組心肌纖維化程度低于SHR空白組。SHR苦丁茶處理組大鼠AdipoR1 mRNA和AdipoR1蛋白相對表達量相比SHR空白組明顯增加，差異具有統計學意義（P<0.05）。 結論 苦丁茶可以抑制自發性高血壓大鼠心肌重構。

[關鍵詞] 苦丁茶；自發性高血壓；心肌重構；收縮壓；心肌纖維化

[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2016）26-0030-04

高血壓作為常見的心血管疾病，其發病率呈逐年上升趨勢[1]，常合并腦卒中、心肌梗死、心力衰竭及慢性腎臟病等主要并發癥，不僅致殘、致死率高，而且嚴重消耗醫療和社會資源，給家庭和國家造成沉重負擔[2]。高血壓通過壓力負荷及一系列神經內分泌因素，引起心室重構，增加心力衰竭的發生風險[3]。苦丁茶是我國一種常見的飲品，已有研究將苦丁茶用于高血壓的治療中，本文擬探討苦丁茶對自發性高血壓大鼠心室重構的影響，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

本實驗采用12只SHR大鼠，購于中科院上海實驗動物中心，均為雄性，12周齡，體重200～250 g，選擇自發性高血壓（SHR）背景品系WKY大鼠6只作為對照。動物均飼養于溫州醫科大學動物實驗中心SPF級別動物房，將實驗大鼠隨機分為SHR苦丁茶處理組、SHR空白組以及WKY對照組，每組各6只。

實驗所用苦丁茶選擇磐安當地茶葉生產基地，為大冬葉青苦丁茶。精選優質茶葉，經過粉碎機粉碎，制成茶粉，灌胃時，將茶葉粉末溶解在蒸餾水中（濃度為1.0 g/100 mL）即可使用。

1.2 實驗方法

SHR空白組與WKY對照組給予蒸餾水灌胃，SHR苦丁茶處理組給予苦丁茶溶液灌胃，每天上午9：00開始灌胃給藥1次（劑量為1.0 g/kg），連續進行8周。每周測量一次體重，并根據體重變化調整給藥劑量。

1.3 觀察指標

（1）血壓測定：每周日采用尾袖法通過無創血壓儀測量清醒安靜狀態下的各組大鼠尾動脈的收縮壓和心率。測量之前加熱大鼠10 min至37℃，使尾動脈充盈以便測量。測壓環置于大鼠尾根部，然后讓大鼠休息3～5 min，開始測量。每次取連續3次血壓差值不超過5 mmHg的血壓平均值作為應測血壓值，并記錄心率。（2）灌胃8周后，各組大鼠分別測定體重（BW），然后將大鼠處死取出左心室測量左心室重量（LVW），計算左室重量指數（LVWI=LVW/BW），并測量左心室厚度；電鏡、H-E染色和Masson染色觀察心肌組織形態學改變，并測定心肌膠原容積分數（CVF）和血管周圍膠原面積（PVCA）；RT-PCR方法檢測心肌組織心肌脂聯素受體1 mRNA（AdipoR1 mRNA）表達水平，蛋白質印跡法（Western-blot）檢測心肌組織AdipoR1蛋白表達水平。

1.4 統計學方法

本研究使用的統計分析軟件為IBM公司的SPSS 21.0，本研究均為計量資料，采用獨立樣本t檢驗，進行t檢驗前先進行方差齊性檢驗，三組計量資料間比較采用方差分析。檢驗標準取α=0.05，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 收縮壓和左心室肥厚情況

隨機分組前三組大鼠的血壓平均值比較，差異有統計學意義（P<0.05），SHR苦丁茶處理組與SHR空白組血壓相似，但是均顯著高WKY對照組。實驗8周后，SHR空白組及WKY對照組血壓與實驗前比較差異無統計學意義（P>0.05），而SHR苦丁茶處理組血壓顯著下降，與實驗前比較差異有統計學意義（P<0.05）。實驗8周后三組大鼠的平均血壓比較，差異有統計學意義（P<0.05），其中SHR苦丁茶處理組大鼠血壓平均值小于SHR空白組，表明苦丁茶可顯著降低自發性高血壓大鼠的血壓，見表1。

實驗8周后三組大鼠間LVWI平均值、左室壁厚度平均值比較，差異有統計學意義（P<0.05），其中SHR苦丁茶處理組實驗8周后LVWI值和左室壁厚度均小于SHR空白組，說明苦丁茶可在一定程度上抑制左心室肥厚的進程，見表2。

2.2 病理學改變

2.2.1 H-E染色 實驗8周后大鼠心肌H-E染色顯示，WKY對照組心肌纖維排列整齊致密，SHR苦丁茶處理組和SHR空白組心肌纖維沒有WKY對照組排列的整齊致密，但SHR苦丁茶處理組較SHR空白組心肌纖維排列更整齊致密。SHR空白組心肌排列紊亂，存在斷裂帶。提示苦丁茶處理后大鼠心肌良性肥厚，改善心肌纖維化。見封三圖2。

2.2.2 Masson染色 實驗8周后大鼠心肌Masson染色顯示，WKY對照組心肌間質僅見少量膠原纖維，與WKY對照組相比，SHR苦丁茶處理組和SHR空白組心肌間質膠原纖維均明顯增加，但SHR苦丁茶處理組較SHR空白組少；提示苦丁茶處理可改善大鼠心肌纖維化。見封三圖3。

2.3 三組心肌CVF和PVCA情況

心肌膠原成分增多是心肌纖維化的主要表現。實驗8周后，相比于WKY對照組，SHR空白組大鼠血管周圍和心肌間質的膠原明顯較多，可見心肌組織被大量膠原纖維聯結成網狀包繞，而SHR苦丁茶處理組的情況較SHR空白組心肌纖維化有所改善。三組大鼠心肌CVF和PVCA平均值間差異均有統計學意義（P<0.05），其中SHR苦丁茶處理組和SHR空白組的CVF和PVCA均顯著高于WKY組；而SHR苦丁茶處理組的CVF和PVCA明顯低于SHR空白組。見表3。

2.4 三組心肌AdipoR1 mRNA與AdipoR1蛋白表達情況

熒光定量RT-PCR和Western-blot檢查結果顯示，三組間AdipoR1 mRNA相對表達量、AdipoR1蛋白相對表達量差異均有統計學意義（P<0.05），其中與WKY對照組大鼠相比，SHR處理組大鼠AdipoR1 mRNA和AdipoR1蛋白相對表達量均低，但是相對于SHR對照組，SHR苦丁茶處理組大鼠AdipoR1 mRNA和AdipoR1蛋白相對表達量明顯增加。見表4。

3 討論

心室重構是指心肌對壓力或容量超負荷產生代償性、適應性改變，包括心肌細胞肥大、間質纖維化和心肌細胞凋亡等，進而發展為心力衰竭[4]。高血壓通過影響機體內皮功能、細胞內鈣超載、炎癥反應、腎素血管緊張素系統等造成心血管重構[5]。心臟結構的重構是高血壓引起的最重要的靶器官損害，心臟的重構主要表現為心肌間質纖維化和心肌肥厚缺血缺氧，而心肌間質纖維化在心力衰竭的發生過程中更為重要[6]。

高血壓心室重構發生的機制還不是完全清楚，但是近年來有許多研究顯示氧化應激參與心室重構的發生發展[7]。周淑嫻等[8]研究了大鼠急性心肌梗死后氧化應激對心室重構的影響，得出氧化應激參與心室重構的病理生理過程的結論，建議干預氧化應激可作為防治心室重構的手段。在心室重構的過程中，核轉錄因子kappa B（NF-κB）激活，其下游TNF-α、白細胞介素1（IL-1）和白細胞介素6（IL-6）等因子表達增加，這些炎性因子的增加將加速心肌細胞凋亡以及心肌纖維化，另外，NF-κB的激活還可以進一步調誘導型NOS/NO的表達，加重心肌組織損傷[9]。

眾多臨床研究已證實血管緊張素抑制劑、血管緊張素轉換酶抑制劑類（ACEI）、他汀類以及維生素C、維生素E等抗氧化藥物可以延緩心室重構的發生和發展[4]。另外，具有抗氧化、清除自由基的中藥也廣泛用于心室重構的防治，參附注射液[10]、三七總皂苷[11]、黃芪苷Ⅳ[12]、丹參酮ⅡA[13]、燈盞花[14]、葡萄籽原花青素[15]、通心絡[16]、心脈康[17]等中藥或者中藥提取成分均具有干預心室重構的作用。

苦丁茶作為應用歷史悠久的藥食兩用中藥，古代本草典籍中稱其為“瓜盧”、“皋盧”、“過羅”等，又因其味較苦，可以作茶飲而被稱為苦丁茶。苦丁茶含有豐富的茶多酚，可以很好地保護心血管。現有研究報道苦丁茶具有降血脂[18]、抗血小板凝集[19]、擴血管[20]、清除NO2-和·OH的作用[21]，可以降低血壓及保護高血壓引起的靶器官損傷作用[22]，在臨床上也有利用治療高血壓的臨床研究，黃鎮才[23]利用苦丁茶治療35例高血壓病患者，觀察治療兩個月，降壓效果明顯，總有效率達85.7 %；潘桂等[24]利用苦丁茶聯合維生素C治療高血壓病，降壓效果明顯，長期服用，1年后隨訪血壓一直維持正常范圍。但是還沒有苦丁茶對高血壓心室重構的文獻發表。

本研究顯示，苦丁茶作用后8周后大鼠收縮壓明顯降低，可在一定程度上抑制左心室肥厚的進程，降低LVWI值。病理學改變上可改善心肌纖維化，SHR苦丁茶處理組的CVF和PVCA明顯低于SHR空白組，且SHR苦丁茶處理組大鼠AdipoR1 mRNA相對表達量和AdipoR1蛋白相對表達量較SHR空白組明顯增加，從而起到抑制大鼠心肌重構的作用。

綜上所述，苦丁茶作為藥食兩用的中藥，日常生活中可以長期飲用，可有效預防高血壓所致的心室重構。苦丁茶干預心室重構的作用可能與其所含的三萜皂苷、多酌類、多糖類和揮發油類等化學成分相關[25]，本研究證實苦丁茶可干預心室重構過程，為在苦丁茶中尋找具有抑制心室重構過程的單體化學成分提供證據，對發掘祖國中醫藥寶藏具有重要意義。

[參考文獻]

[1] 汪星輝，黃玲玲. 葡萄籽原花青素對DOCA-鹽高血壓小鼠心室重構的影響[J]. 安徽醫藥，2011，15（12）：1485-1488.

[2] 劉力生，吳兆蘇，朱鼎南，等. 中國高血壓防治指南2010[J].中華高血壓雜志，2011，19（8）：701-744.

[3] 王雪婷，羅明. 粒細胞集落刺激因子對自發性高血壓大鼠心室重構的調控[J]. 同濟大學學報（醫學版），2014， 35（2）：24-28.

[4] 朱凱媛，蔡輝. 氧化應激致心室重構的研究進展[J]. 安徽醫藥，2015，19（9）：1633-1636.

[5] Cowan BR，Young AA. Left ventricular hypertrophy and renin-angiotensin system blockade[J]. Curr Hypertens Rep，2009，11（3）：167-172.

[6] Takimoto E，Kass DA. Role of oxidative stress in cardiac hypertrophy and remodeling[J]. Hypertension，2007，49（2）：241-248.

[7] 許宏大，陳少輝. 苦丁茶提取物對高血脂大鼠甘油三醋（HG）影響的實驗研究[J]. 中華心血管病雜志，2004，32（10）：694.

[8] 周淑嫻，周艷. 氧化應激對大鼠心肌梗死后心室重構的影響[J]. 南方醫科大學學報，2006，28（11）：2030-2034.

[9] Goto R，Yamashita K，Aoyagi T，et al. Immunomodulatory effect of nuclear factor-kappab inhibition by dehydroxymethylepoxyquinomicin in combination with donor-specific blood transfusion[J]. Transplantation，2012，93（8）：777-786.

[10] 賀蕾. 參附注射液聯合阿托伐他汀對慢性心力衰竭患者氧化應激和心室重構的影響[J]. 臨床醫學，2012，32（10）：44-46.

[11] 楊琳，林萬程，施家樂. 三七總皂苷藥理作用的研究進展[J]. 安徽醫藥，2014，18（5）：963-965.

[12] 楊海波，闞秀蓮，姜華. 黃芪對慢性心力衰竭患者心室重構的影響[J]. 河北中醫，2013，35（2）：194-195.

[13] 張蓓蓓，蔡輝. 丹參酮ⅡA 對心室重構作用的研究進展[J].安徽醫藥，2014，18（12）：2230-2232.

[14] Zhou Jianzhong，Lei Han，Chen Yunzhen，et al. Vemtricular remodeling by Scutellarein treatment in spontaneously hypertensive rats[J]. Chinese Medical Journal，2002， 115（3）：463-479.

[15] 汪星輝，黃玲玲. 葡萄籽原花青素對DOCA-鹽高血壓小鼠心室重構的影響[J]. 安徽醫藥，2011，15（12）：1485-1488.

[16] 趙學強，卜培莉，趙玉霞，等. 通心絡對自發性高血壓大鼠心室重構和功能的影響[A]. //中華中醫藥學會絡病分會.第九屆國際絡病學大會論文集[C]. 中華中醫藥學會絡病分會，2013：113-117.

[17] 葉小漢，呂洪雪. 心脈康對自發性高血壓大鼠左心室重構的影響[J]. 新中醫，2013，45（4）：163-164.

[18] 楊濤. 苦丁茶青冬化學成分及其抗血小板聚集活性研究[D]. 廣州中醫藥大學，2015.

[19] 王志琪. 苦丁茶總皂苷擴血管作用的實驗研究[D]. 湖南中醫藥大學，2002.

[20] 周才瓊，李娟. 苦丁茶對NO2-和-OH清除作用的體外試驗研究[A]//首屆中國西部營養與健康、亞健康學術論文匯編[A]. 2005：28.

[21] 王雪婷，羅明. 粒細胞集落刺激因子對自發性高血壓大鼠心室重構的調控[J]. 同濟大學學報（醫學版），2014， 35（2）：24-28.

[22] Stangl V，Dreger H，Lorenz M，Molecular targets of tea polyphenol in the cardiovascular system[J]. Cardiovasc Reserch，2007，73：348-358.

[23] 黃鎮才. 苦丁茶治療高血壓病35例觀察[J]. 中國中醫藥信息雜志，1997，4（4）：25.

[24] 潘桂，馮江蘭. 苦丁茶合維生素C治療高血壓病[J]. 新中醫，2002，34（12）：26.

[25] 楊滔. 苦丁茶冬青化學成分及其抗血小板聚集活性研究[D]. 廣州中醫藥大學，2015.

（收稿日期：2016-05-07）