藍(lán)耳病陰性豬PRRSV攻毒試驗(yàn)結(jié)果及在血清馴化中的應(yīng)用

曹玉美，伍少欽，孫 龍，顏輝孟，吳志金，于俊勇，陸 江，梁恒英

( 廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)有限公司良圻原種豬場(chǎng)，廣西 南寧 530317）

藍(lán)耳病陰性豬PRRSV攻毒試驗(yàn)結(jié)果及在血清馴化中的應(yīng)用

曹玉美，伍少欽，孫 龍，顏輝孟，吳志金，于俊勇，陸 江，梁恒英

( 廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)有限公司良圻原種豬場(chǎng)，廣西 南寧 530317）

良圻原種豬場(chǎng)2009年在后備豬采用血清馴化,以保持豬群藍(lán)耳病的穩(wěn)定。為進(jìn)一步了解公司內(nèi)部所用豬藍(lán)耳病病毒的特性，用同一豬藍(lán)耳病病毒的不同拷貝數(shù)（0、20、40、400、4 000和20 000）分別對(duì)6頭藍(lán)耳病抗原抗體雙陰性仔豬進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。病原檢測(cè)：攻毒24 h后，除陰性豬外，5頭豬均抗原檢測(cè)到PRRSV病毒核酸，抗體檢測(cè)：攻毒后的前6 d抗體均為陰性，7 d后攻毒豬只抗體逐漸轉(zhuǎn)陽(yáng)；第9天抗體全部轉(zhuǎn)陽(yáng)且較第7天有大幅升高；第11天后，整體抗體稍有上升但較緩慢，攻毒21 d后，各豬只抗體值在1.7～2.3之間。表明20個(gè)病毒拷貝數(shù)就足以感染豬只。

豬藍(lán)耳病；血清馴化；抗體消長(zhǎng)；病毒拷貝數(shù)

對(duì)于豬藍(lán)耳病(PRRS)的控制與凈化，20多年來國(guó)內(nèi)外有已經(jīng)有多種方法和措施成功地應(yīng)用于豬場(chǎng)，并取得一定的效果，但由于PRRSV本身的特點(diǎn)，目前并沒有一個(gè)普適的方法，各豬場(chǎng)只能根據(jù)自身特點(diǎn)，有選擇性地采用適合本場(chǎng)的控制方法。目前常見方法有采用空氣過濾等生物安全措施保持豬場(chǎng)PRRS陰性，疫苗免疫控制豬場(chǎng)PRRS穩(wěn)定或凈化PRRS，也有常用血清馴化法控制與凈化PRRS。良圻原種豬場(chǎng)從2007年開始嘗試血清馴化，2008年開始在后備豬采用血清馴化控制豬藍(lán)耳病。由于馴化用的PRRSV不是固定不變的，有時(shí)會(huì)根據(jù)病毒測(cè)序結(jié)果，進(jìn)行相應(yīng)的更換。為了解馴化用PRRSV毒株的特點(diǎn)，特開展相應(yīng)的試驗(yàn)：用不同劑量的豬藍(lán)耳病毒對(duì)抗原抗體雙陰性豬只（35日齡）進(jìn)行攻毒，跟蹤抗原及抗體消長(zhǎng)情況，以便為后續(xù)的豬場(chǎng)PRRS的血清馴化提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料

制備的PRRSV陽(yáng)性血清，2015年制備，公司內(nèi)部保存；PRRS抗原抗體雙陰性豬，35日齡、來源良圻原種豬場(chǎng)PRRS雙陰性核心場(chǎng)；IEDXX PRRS抗體檢測(cè)試劑盒；ABI 7 500 FAST 熒光PCR儀，TAKARA PCR儀，Taqman 熒光定量PCR成套試劑。

2 試驗(yàn)方法

2.1 病毒稀釋方法

對(duì)病毒陽(yáng)性血清用PBS進(jìn)行倍比稀釋，使得每毫升血清稀釋液所含原血清量為1 μL、0.2 μL、0.02 μL、0.002 μL、0.001 μL，經(jīng)熒光定量PCR分析，所含病毒拷貝數(shù)分別為20 000、4 000、400、40、20；每頭豬只相應(yīng)攻毒劑量為1 mL血清稀釋液。

2.2 攻毒方法

每頭豬只分別按相應(yīng)量進(jìn)行攻毒，如表1。

表1 ?PRRSV攻毒試驗(yàn)的劑量和時(shí)間

2.3 采血檢測(cè)

在攻毒后的第1、2、3、4、5、6、7、9、11、13、15、21天進(jìn)行采血和檢測(cè)。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 攻毒前豬只PRRS監(jiān)測(cè)情況

PRRS雙陰性豬只的檢測(cè)情況如表2，說明試驗(yàn)動(dòng)物是符合要求的。

表2 攻毒前試驗(yàn)試驗(yàn)動(dòng)物PRRS抗原和抗體檢測(cè)結(jié)果

3.2 攻毒后PRRS抗原監(jiān)測(cè)情況

PRRS雙陰性豬只攻毒后的抗原檢測(cè)情況如表3。

由表3分析，在攻毒24 h，除空白對(duì)照外，只有一頭攻毒豬為陰性，其余均為陽(yáng)性，攻毒劑量為0.001 μL的豬只呈陽(yáng)性，說明20個(gè)病毒拷貝數(shù)即可感染雙陰性豬只；攻毒38 h，各攻毒豬只均轉(zhuǎn)陽(yáng)，一直持續(xù)到攻毒后的第21天，各組試驗(yàn)豬都保持PRRS病原陽(yáng)性。

3.3 攻毒后PRRS抗體監(jiān)測(cè)情況

攻毒后，不同時(shí)間的抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果如表4和圖1。

由表4分析，PRRSV攻毒（馴化）后的前6 d抗體均為陰性，第7天后豬只抗體逐漸轉(zhuǎn)陽(yáng)；在第9天抗體全部轉(zhuǎn)陽(yáng)且較第7天有大幅升高；第11天后，整體抗體稍有上升但趨于平穩(wěn)，攻毒21 d后，各豬只抗體值均未達(dá)到2.5（見圖1）。

表3 ?攻毒后不同時(shí)間PRRS抗原檢測(cè)結(jié)果

表4 ?攻毒后不同時(shí)間PRRS抗體檢測(cè)結(jié)果

圖1 各劑量試驗(yàn)豬PRRS抗體S/P值

4 討論

4.1 PRRS抗原方面

通過本次試驗(yàn)，我們可以得知，對(duì)于藍(lán)耳雙陰性豬，極少的病毒粒子（20個(gè)病毒拷貝）就可以讓其轉(zhuǎn)陽(yáng)，在進(jìn)行血清馴化時(shí)，可以考慮通過減少馴化血清劑量來減輕馴化豬只的臨床癥狀。并由此可聯(lián)想到豬場(chǎng)生物安全方面嚴(yán)格控制的必要性，車流、人流、物流、豬流等依然是防控PRRS需要關(guān)注的重點(diǎn)。

4.2 PRRS抗體方面

通過抗體的消長(zhǎng)規(guī)律可以得出，抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)往往比抗原轉(zhuǎn)陽(yáng)延后6～7 d左右。但抗體從陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性所需要時(shí)間很短，基本上是從陰性值急轉(zhuǎn)為抗體陽(yáng)性，這可能是IgG的暴發(fā)效應(yīng)，分化的B細(xì)胞突然產(chǎn)生大量的IgG，導(dǎo)致S/P值一躍至1.0以上。由于抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)具有的滯后性，因此在對(duì)懷疑豬只的PRRS監(jiān)測(cè)時(shí)，抗原的檢測(cè)往往結(jié)果比抗體更可靠，更具時(shí)效性。PRRS抗體監(jiān)測(cè)一般只能作為是否曾經(jīng)感染過PRRSV的依據(jù)。

試驗(yàn)保育豬在后續(xù)的持續(xù)性檢測(cè)過程中，抗體并沒有繼續(xù)升高至2.5，且只有一頭超過2.0，這可能與保育試驗(yàn)豬自身的免疫系統(tǒng)仍未發(fā)育完全有關(guān)，以住的血清馴化試驗(yàn)中育肥豬或母豬通過血清馴化，抗體很快升至3.0以上。

4.3???PRRS血清馴化病毒量的選擇

保育豬的PRRS抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)過程，豬只一般會(huì)逐漸表現(xiàn)臨床表現(xiàn)（精神差食欲減退，呼吸道問題）。在生產(chǎn)過程中，特別需引起重視，當(dāng)豬只表現(xiàn)出癥狀時(shí)，豬只很有可能已經(jīng)感染疾病。由于病毒在豬群中的連續(xù)傳播，會(huì)使病毒的毒力逐漸增強(qiáng)，因此在后續(xù)的馴化思路中如何降低本場(chǎng)馴化用PRRSV毒株的毒力，同時(shí)提高病毒的感染能力，達(dá)到用低劑量的病毒即可使豬只轉(zhuǎn)陽(yáng)，且不表現(xiàn)嚴(yán)重的臨床癥狀，，是以后生產(chǎn)中要考慮的重點(diǎn)問題之一。

5 結(jié)論

PRRS低病毒拷貝數(shù)（20個(gè)拷貝）就可使陰性豬只感染PRRS；24 h后即可以檢測(cè)到病毒，抗原轉(zhuǎn)陽(yáng)后6～7 d，可以檢測(cè)到PRRS抗體呈陽(yáng)性。

（略）

2018-08-15）

本文受Cars-36現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金資助