蒸餾—氣相色譜法測定血液中乙醇含量方法的研究

王 冰，王希明

（1.甘肅省張掖市公安局，甘肅 張掖 734000；2.甘肅省張掖市疾病預防控制中心，甘肅 張掖 734000）

蒸餾—氣相色譜法測定血液中乙醇含量方法的研究

王 冰1，王希明2

（1.甘肅省張掖市公安局，甘肅 張掖 734000；2.甘肅省張掖市疾病預防控制中心，甘肅 張掖 734000）

采用蒸餾法處理樣品，氣相色譜檢測血液中乙醇含量，無需頂空等特殊設備。在 0～160mg/100mL,濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系，嚴格控制蒸餾速度，平均回收率97%，RSD：5.0%～10.6%，平均7.6%，特異性高，方法快速、簡易可靠，具有良好的通用性。

血液蒸餾；氣相色譜；乙醇檢測

開展生物材料中酒精含量的測定，為公安執法有著重要的作用。血液中乙醇含量檢測，采用自動頂空進樣氣相色譜法最佳[1]，但需要專門儀器，自動頂空進樣裝置，成本高實用性有限，手動頂空進樣體積大[2]，操作難度大，精密度差，色譜耗材大，應用受限。我們根據實驗室的實際條件，采用直接蒸餾法處理樣品氣相色譜法檢測，開展血液乙醇含量測定方法的研究，實驗研究完善了檢測方法。檢出限、精密度和準確度完全符合檢驗的要求。

1 原理

乙醇具有揮發性。血液中的乙醇通過加熱蒸餾，從試樣中蒸發出來，再通過冷卻收集蒸餾液，用帶有氫火焰檢測器的氣相色譜儀進行測定，乙醇的響應值（峰面積）與蒸餾液中乙醇的濃度呈正比例關系，應用標準系列，以試樣的峰面積與標準系列比較，計算出血液中乙醇含量。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

氣相色譜儀：東西電子GC4011A，氫火焰離子化檢測器；色譜柱：不銹鋼柱,長2m，內徑2mm，內裝GDX-102，80～100目；全玻璃磨口蒸餾器500mL；10mL刻度離心管，微量注射器。乙醇；色譜純；乙醇標準液（1mL=50mg）：稱取乙醇2.5000g，于50mL溶量瓶，用純水稀釋至刻度。

2.2 色譜條件

柱溫150℃，汽化室170℃，檢測器190℃。空氣：0.2Pa，氫氣0.08Pa，氮氣0.21Pa。

2.3 檢測步驟

樣品處理，取血樣2～5mL，加入蒸餾瓶中，加水50mL，置電熱板上，連接好冷凝管和冷凝水，中溫加熱蒸餾，小心控制加熱溫度防溢出。準確收集餾液10mL，餾液待測定用。另取25mL溶量瓶6個，分別加入乙醇標準液 （1mL=50mg）0.0，0.10，0.20，0.40，0.50，0.80mL，用純水稀釋至刻度。乙醇濃度分別為0.0，20，40，80，100，160mg/100mL。儀器預熱各項條件穩定后，分別吸取標準系列和樣品蒸餾液進樣，進樣量1ul。用標準系列濃度和相應的峰面積制作標準曲線，計算出回歸方程。以樣品保留時間定性，用峰面積代入回歸方程計算出血液中乙醇含量。

2.4 計算

式中：X——樣品乙醇濃度mg/100mL；

C——樣品蒸餾液乙醇濃度mg/100mL；

V——血液取樣量mL。

3 結果與討論

3.1 色譜條件的選擇

用正交設計方法選擇柱溫、汽化室溫度和載氣流量的最佳條件，以柱溫150℃，汽化室170℃，檢測器190℃，氮氣0.21Pa靈敏度最高。

3.2 樣品蒸餾時間的確定

樣品加熱蒸餾時會產生大量氣泡，很容易溢出，所以要嚴格控制好溫度，主要依所用電熱器及工作經驗加以控制，以不溢出為準。經蒸餾收集餾出液10mL后，再繼續收集餾出液1mL左右于另一容器中，首先用0.1%重鉻酸鉀檢驗，不能使其退色，再與

樣品相同條件下進樣1ul，在已知保留時間內沒有峰出現。同樣在不同時間中測定10個樣品，均沒有色譜峰出現，說明取樣品2～5mL，蒸餾收集餾出液10mL，樣品血液中的乙醇完全被蒸出。

3.3 方法特異性

收集10份前兩天確認沒有喝酒人的血液，取2～5mL蒸餾，收集蒸餾液10mL，在上述條件下分別進樣1ul，5min內無峰出現。說明采用血液直接蒸餾方法具有很高的特異性，在本方法條件下，血液經蒸餾沒有其他干擾物質。采用蒸餾法分離樣品是傳統的實驗技術，所用儀器設備簡單，實用。

3.4 方法線性試驗

對標準系列連續測定3次，每天1次，結果見表1，相關系數r＞0.9991。

表1 線性試驗結果

3.5 回收率試驗

取血液樣品6份，分別取2—5mL加入蒸餾瓶中，分別加入乙醇標準液(1mL=50mg)蒸餾，收集蒸餾液10mL，取1ul進樣測定，結果見表 2，回收率在86%～106%之間，平均回收率為97%。

表2 回收率試驗結果

3.6 精密度試驗

取3份血液樣品，取2～5ml雙份蒸餾，收集蒸餾液10mL,分別進樣3次，結果見表3。精密度(RSD)為5.0%～10.6%，平均值為7.6%，符合標準要求。

表3 精密度試驗結果

人體血液中乙醇是由于喝酒直接吸收入血產生的，大量的乙醇主要作用是起一種中樞神經系統抑制劑的作用[3]，血液中乙醇濃度很低（10mg/ 100mL）時察覺不出什么影響，直到血液中乙醇濃度很高（500mg/100mL）時，最終嚴重地抑制呼吸，并引起死亡。人體對乙醇的耐受性具有較大的個體差異。研究報導，血液中乙醇濃度10～50mg/ 100mL時，人的精神愉悅，抑制作用減弱，注意力和判斷力降低；血液中乙醇濃度50～100mg/100mL時，表現為興奮，鎮靜、肌肉協調能力減弱，敏感反應能力降低；血液中乙醇濃度 150～300mg/ 100mL時，人的精神錯亂，定向力消失，感覺障礙，失去平衡能力，語言含糊；血液中乙醇濃度250～400mg/100mL時，表現為木僵，對外界刺激的反應能力顯著降低，肌肉共濟失調明顯，大小便失禁，昏睡；血液中乙醇濃度10～50mg/100mL時，人昏迷，完全失去知覺，抑郁反射，低常體溫，呼吸性和循環性虛脫，死亡。

3.7 樣品檢驗

從2004年開始，檢測交警送的當事人血液中乙醇含量836份，乙醇含量在0～450mg/100mL，沒有出現當事人不服的情況。參照美國國家乙醇和藥物安全委員會和美國醫學會代表機構規定，從交通事故中責任分析研究，暫定血液乙醇濃度＜20mg/ 100mL未喝酒，血液乙醇濃度＞20mg/100mL已喝酒，血液乙醇濃度＞100mg/100mL，已喝醉。

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