豬圓環(huán)病毒和鏈球菌混合感染的診斷

馬莉莉,王宇婷,倪宏波

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院,黑龍江 大慶 163319)

豬圓環(huán)病毒和鏈球菌混合感染的診斷

馬莉莉,王宇婷,倪宏波?

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院,黑龍江 大慶 163319)

2016年7月,黑龍江省大慶市某豬場爆發(fā)豬病,臨床主要表現(xiàn)體溫升高、食欲廢絕等癥狀。無菌提取病豬肺臟DNA、RNA,經(jīng)分離純化后PCR進行檢測,同時進行細菌鑒定、生化試驗等。PCR擴增結(jié)果診斷為豬圓環(huán)病毒和鏈球菌的混合感染。藥敏試驗結(jié)果表明該分離菌對強力霉素、頭孢咪唑、氟哌酸高度敏感,并給豬場提出了有效的防治措施,為豬場對該類疾病的防控提供了參考。

豬圓環(huán)病毒;鏈球菌;混合感染;藥敏試驗

豬圓環(huán)病毒病(Porcine circovirus disease)是由豬圓環(huán)病毒引起的豬一種新的傳染病,其臨床診斷表現(xiàn)多種多樣,會造成免疫系統(tǒng)的降低,主要特征為體質(zhì)下降、貧血、腹瀉及內(nèi)臟器官等廣泛病理變化,特別是腎臟、脾臟及全身淋巴結(jié)高度腫大、出血和壞死等［1]。目前認為豬圓環(huán)病毒對免疫系統(tǒng)的破壞是引起豬病的重要原因。豬鏈球菌病(Streptococcus suis)是由鏈球菌屬中致病性鏈球菌所致的一種傳染病,一年四季均可發(fā)生,多發(fā)于3～12周齡的豬,尤其是斷奶仔豬易感染此病,鏈球菌一般會在很多誘因條件下才會發(fā)生作用,如若管理環(huán)境較差也會引起此病。主要表現(xiàn)為心內(nèi)膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎等,可呈地方性暴發(fā),死亡率很高,給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失［2]。因此豬場要加強管理,減少應(yīng)激因素,增強豬的免疫力,避免多種疾病的混合感染等。

1 發(fā)病情況

黑龍江省大慶市某豬場有300頭豬,2016年7月該豬場部分豬突然體溫升高至42℃,流行病學(xué)調(diào)查得知該豬場發(fā)病率25%,死亡率5%,發(fā)病的豬表現(xiàn)食欲廢絕,呼吸困難,體溫升高,皮膚蒼白,消瘦,共濟失調(diào);病豬也可能出現(xiàn)咳嗽、喉頭出血、肺臟病變嚴重、胃黏膜出血嚴重、胃黏膜出血嚴重、腎臟有出血點、脾臟邊緣有突起等臨床癥狀。

2 剖檢變化

病死豬耳根部、背部和股內(nèi)側(cè)皮膚有紅色點狀和片狀紅斑,背部皮膚潮紅,部分豬腹下、臀部皮膚出現(xiàn)不規(guī)則隆起丘疹,呈現(xiàn)出紫色狀。切開兩上前肢,取出頜下淋巴結(jié),淋巴結(jié)呈化膿性病變;打開胸腔,見心包積液;肺表面腫脹壞死;打開腹腔,脾臟邊緣有突起;出現(xiàn)胸膜炎、腹膜炎,心包膜內(nèi)有大量炎性滲出物、有積液;肺呈彌散性、間質(zhì)性肺炎變化、腫大等(如圖1和2)。通過流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀和病理剖檢變化初步懷疑為豬圓環(huán)病毒和鏈球菌混合感染,但還需進一步通過實驗室方法來確診。

圖1 肺臟表面淤血并且腫脹Fig.1 Lung congestion and swelling o f the surface

圖2 肝臟腫大有出血點Fig.2 The liver is swollen have haemorrhage

3 實驗室診斷

3.1 細菌學(xué)檢測無菌采取病死豬的肝臟、肺臟接種于血瓊脂培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)24 h,觀察到長出光滑圓潤細小菌落,菌落周圍形成β溶血環(huán);對其進行革蘭氏染色鏡檢,可見呈圓形或卵圓形呈鏈狀或成雙排列的球菌,革蘭氏染色為陽性(如圖3)。

3.2 生化鑒定細菌純培養(yǎng)后,分別接種于葡萄糖、蔗糖、乳糖、明膠、甘露醇等系列生化培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)24 h后觀察其生化反應(yīng)特性(見表1)。生化鑒定結(jié)果符合豬鏈球菌的特性即分解葡萄糖產(chǎn)酸,表明該分離菌株為鏈球菌。

圖3 圓形鏈狀排列球菌(10×10)Fig.3 Circular catenation aureus(10×10)

表1 生化試驗結(jié)果Table1 The results of biochemical experiment

3.3 藥敏試驗在血平板上培養(yǎng)純化的單菌落,貼藥敏片于培養(yǎng)基進行37℃培養(yǎng),通過測定抑菌環(huán)的直徑來鑒別耐藥性。結(jié)果表明,該分離菌對青霉素、鏈霉素、卡那霉素等產(chǎn)生較強的耐藥性;對強力霉素、頭孢咪唑、氟哌酸高度敏感;對環(huán)丙沙星、恩諾沙星等中敏(見表2)。

3.4 PCR PCR檢測按照TIANamp Virus DNA/RNA Kit病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒提取病毒的DNA和RNA,用多殺性巴氏桿菌、鏈球菌、藍耳病毒、圓環(huán)病毒、豬瘟病毒等特異性引物進行PCR反應(yīng)擴增。引物參照GenBank發(fā)表的基因序列設(shè)計并合成(見表3)。結(jié)果顯示,第4泳道在700 bp左右有一條帶,與鏈球菌片段相符;第5泳道在500 bp有一條帶,與圓環(huán)病毒片段相符。綜合該病例的發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢變化以及相應(yīng)實驗室診斷可以確診該病例為豬圓環(huán)病毒和鏈球菌混合感染。

圖4 PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果Fig.4 PCR products agarose gel electrophoresis results

表3 引物列表Table3 Primer sequences

4 討論

大慶市某豬場送檢的病豬通過實驗室診斷確診為豬圓環(huán)病毒病毒和鏈球菌的混合感染。雖然該豬場接種了相關(guān)疫苗,但抗體水平不足以抵抗病毒的侵襲,造成疫病流行,所以應(yīng)制訂合理的免疫程序,合理地投喂抗生素,避免繼發(fā)感染［3]。①近年來隨著集約化、規(guī)模化養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,豬場的疾病情況更加復(fù)雜。豬圓環(huán)病毒與豬鏈球菌混合感染表現(xiàn)為發(fā)病快、病程短、死亡率高等特點,一旦發(fā)病,將給養(yǎng)豬場造成很大經(jīng)濟損失,因此豬場必須建立健全衛(wèi)生防疫制度,嚴格控制,監(jiān)督執(zhí)行［4]。②嚴格消毒、搞好環(huán)境衛(wèi)生、疫苗接種等綜合防治措施,避免病原的侵入。豬場全面消毒環(huán)境凈化,豬場環(huán)境要經(jīng)常消毒,疫情嚴重威脅時,在多數(shù)豬場尚無多點生產(chǎn)體系情況下,保育舍和育肥舍要做到單元式全進全出生產(chǎn)管理［5],即每個豬舍的用具、人員等要獨立,用具不可共用。用鏈球菌和胸膜肺炎多價苗預(yù)防1次后,間隔半月再補防1次［6]。③制訂合理的免疫保健程序,對發(fā)病豬應(yīng)該及時進行隔離治療,防止傳染給其他豬［7]。同樣豬場已經(jīng)暴發(fā)了的疾病也要從根本下手,改善環(huán)境,做好豬場的消毒工作,保證消毒效果及防止豬場病原微生物產(chǎn)生耐藥性［8]。

［1]王永輝.規(guī)模化豬場管理中存在的問題及建議［J].今日畜牧獸醫(yī),2011,(4):11-12.

［2]喬瑾,趙保生.規(guī)模化豬場生物安全控制技術(shù)研究［J].畜牧獸醫(yī)雜志,2011,(4):30-35.

［3]王麗峰,黨占國,當前豬病的流行特點、發(fā)病原因及防控對策［J].畜牧與飼料科學(xué),2011,32(8):118-119.

［4]張家崢,程根生,劉小燕.集約化豬場發(fā)生豬鏈球菌病的調(diào)查與防治［J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報,2001,23(4): 306-308.

［5]權(quán)根花,徐惠.豬鏈球菌病的研究進展［J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī),2007(3):50-53.

［6]康麗娟,張鳳玲,于德和,等.豬圓環(huán)病毒病Ⅱ型的診斷與防制［J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī),2005(10):27-28.

［7]盧惠明.豬瘟與豬鏈球菌病混合感染的診治報告［J].福建畜牧獸醫(yī),2005(6):35-36.

［8]陸艷,馬利青,王戈平,等.豬瘟繼發(fā)豬鏈球菌病的診斷與防治［J].中國獸醫(yī)雜志,2007(5):56.

Diagnosis of the combined infection with Circovirus and Streptococcus of swine

Ma Li li,Wang Yuting,Ni Hongbo*
(College of animal science and technology,Heilong jiang Bayi Agricultural University,Heilong jiang Daqing 163319)

On July 2016,an outbreak of swine in Daqing City,Heilongjiang Province,the main clinical symptom such as body temperature,appetite waste off.Extract DNA and RNA from sterile pigs lung isolated after purification,and identification of bacteria,biochemical tests.PCR amplification results diagnosed as mixed infection of porcine circovirus and streptococci.Susceptibility test results show that the isolated bacteria to doxycycline,cephalosporin imidazole,norfloxacin highly sensitive,to farm proposes effective preventive measures for the prevention and control of swine diseases provides a reference.

Circovirus;Streptococcus;Combined infection;Drug sensitive test

S858.28

B

1672-9692(2016)10-0037-04

2016-08-20

馬莉莉(1992-),女,黑龍江人,在讀碩士,研究方向為分子細菌學(xué)和免疫學(xué)。

倪宏波(1972-),男,黑龍江人,教授,博士生導(dǎo)師,主要從事分子細菌學(xué)和免疫學(xué)研究。