同位素稀釋超高效液相色譜串聯質譜測定尿液中苯系物和三氯乙烯代謝產物

朱 婧 李 妍 雍 莉 鄭 波 鄒曉莉* 劉 珍

1(四川大學華西公共衛生學院衛生檢驗教研室，成都 610041)2(四川省疾病預防控制中心，成都 610041) 3(四川大學華西第二醫院出生缺陷中心，成都 610041)

?

同位素稀釋超高效液相色譜串聯質譜測定尿液中苯系物和三氯乙烯代謝產物

朱 婧1李 妍1雍 莉2鄭 波1鄒曉莉*1劉 珍3

1(四川大學華西公共衛生學院衛生檢驗教研室，成都 610041)2(四川省疾病預防控制中心，成都 610041)3(四川大學華西第二醫院出生缺陷中心，成都 610041)

建立同位素內標稀釋，超高效液相色譜串聯質譜(Ultra performance liquid chromatography-tandem mass sepctrometry, UPLC-MS/MS)同時測定尿中苯系物和三氯乙烯代謝產物的方法，并用于孕婦尿樣的分析。尿樣過經含同位素內標的醋酸銨緩沖液稀釋10倍后，過濾，取濾液進樣分析。采用C18色譜柱，梯度洗脫進行UPLC分離，電噴霧負離子掃描多反應監測(Multiple reaction monitoring，MRM) 模式檢測。方法檢出限在0.0350～1.75 μg/L之間，方法的日內和日間精密度分別為1.2%～9.1%和2.0%～9.7%；用所建立的方法測定了650個孕婦尿液樣品，并統計分析了其地區差異，加標回收率為85.0%～104%。所建立的方法快速靈敏，適合尿液樣品的批量分析。

同位素稀釋； 超高效液相色譜串聯質譜； 苯系物； 三氯乙烯； 代謝物； 尿液

1 引 言

苯系物主要包括苯、甲苯、二甲苯、乙苯和苯乙烯等物質，在化工、建筑等領域應用廣泛，主要對人體皮膚粘膜、中樞神經、造血功能等造成損害。其中，苯已經被世界衛生組織確定為強致癌物。三氯乙烯(Trichloroethylene，TCE)是一種優良的溶劑，廣泛用于金屬清洗、干洗劑、殺蟲劑和萃取劑等。三氯乙烯對中樞神經系統有麻醉作用，亦可引起肝、腎、心臟等損害[1]。近年來，苯系物和三氯乙烯的污染問題受到人們的廣泛關注。特別是孕期接觸苯系物、三氯乙烯的孕婦，自然流產及發生先天畸形的危險性增高[2]。在對這些物質進行環境監測的同時，生物監測也十分必要，通過對生物監測指標的測定，可以在一定程度上說明人體對有害物質的接觸水平。

苯系物的生物監測指標各不相同，苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯和乙苯的生物監測指標通常分別為苯巰基尿酸(苯酚、反式-反式粘糠酸)、馬尿酸、甲基馬尿酸(Methylhippuric acid，MHA)、苯乙醛酸 (Phenylglyoxylic acid，PGA)和苯乙醇酸(Mandelic acid，MA)。三氯乙烯的生物監測指標為三氯乙酸(Trichloroacetic acid，TCA)。其中，因在評價低濃度苯接觸時，苯巰基尿酸(S-phenylmercapturic acid,SPMA)個體差異影響較小，用于生物監測具有較為明顯的優勢[3,4]，因此實驗選擇了苯巰基尿酸作為苯的監測指標。此外，馬尿酸是甲苯的非特異產物，2013年美國政府工業衛生家協會(American Conference of Governmental Industrial Hygienists，ACGIH)已經取消其作為甲苯的生物監測指標，因此實驗采用了它的特異性產物N-乙酰基-S-苯基-L-半胱氨酸(N-acetyl-S-(benzyl)-L-cysteine, BMA)作為監測對象；三氯乙酸亦非是三氯乙烯的特異性產物，因此增加檢測了它的特異性代謝產物N-乙酰基-S-(1,2-二氯乙烯基)-L-半胱氨酸(N-acetyl-S-(1,2-dichlorovinyl)-L-cysteine,1,2-DCVMA、N-乙酰基-S-(2,2-二氯乙烯基)-L-半胱氨酸(N-acetyl-S-(2,2-dichlorovinyl)-L-cysteine，2,2-DCVMA)。

目前，我國職業衛生標準中，這些生物監測指標都是分別進行檢測，多用高效液相色譜法[5～7]、氣相色譜法[8～10]和分光光度法[11]，但生物樣品基質通常較為復雜，用這些方法進行檢測，樣品基質干擾會造成準確度和靈敏度的下降。 結合UPLC的高分離效率和快速及串聯質譜檢測的高特異性的UPLC-MS/MS在痕量測定領域得到了廣泛應用，極大地提高代謝產物測定的靈敏度和準確度。

為了同時測定尿樣中苯系物和三氯乙酸的代謝物，且適應尿中基體復雜、含量低的特點，本實驗采用超高效液相色譜-串聯質譜法，以同位素內標進行基質效應校正，建立簡單快速同時測定尿樣中苯系物和三氯乙酸代謝物的方法，與文獻[5～11]相比，檢出限降低2～3個數量級，更有利于痕量分析，為暴露人群的生物監測提供了有力的檢測手段。將所建立的方法用于各地孕婦尿樣的檢測，初步分析了不同地區孕婦的暴露水平差異。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

Acquity超高液相色譜儀(UPLC，美國Waters公司)，3200Q TRAP聯用質譜儀(LC/MS/MS System，美國AB SCIEX公司)。

標準品(純度≥98%)：苯巰基尿酸(S-phenylmercapturic acid，SPMA，購自東京化成工業株式會社)；N-乙酰基-S-苯基-L-半胱氨酸(N-acetyl-S-(benzyl)-L-cysteine, BMA)、N-乙酰基-S-(1,2-二氯乙烯基)-L-半胱氨酸(N-acetyl-S-(1,2-dichlorovinyl)-L-cysteine，1,2-DCVMA)、N-乙酰基-S-(2,2-二氯乙烯基)-L-半胱氨酸(N-acetyl-S-(2,2-dichlorovinyl)-L-cysteine，2,2-DCVMA)，購自Toronto Research Chemicals公司；苯乙醛酸(Phenylglyoxylic acid，PGA)、苯乙醇酸(Mandelic acid，MA)，購自Aladdin Chemistry公司；三氯乙酸(Trichloroacetic acid，TCA)、甲基馬尿酸(Methylhippuric acid，MHA,)、三氟乙酸(Trifluoroacetic acid，TFA)，均購于Sigma公司。

同位素內標:DL-S-phenylmercapturic-3,3-d2Acid(SPMA-d2，CDN Isotopes公司)；N-acetyl-S-(1,2-dichlorovinyl)-L-cysteine-13C,d3(1,2-DCVMA-13C,d3)、N-acetyl-S-(2,2-dichlorovinyl)-L-cysteine-13C,d3(2,2-DCVMA-13C,d3)、N-acetyl-S-(benzyl-13C6)-L-cysteine (BMA-13C6)，均購于Toronto Research Chemicals公司。

甲醇、乙腈均為色譜純；醋酸銨(優級純)。實驗用水為超純水(由Millipore Synergy 185超純水機制得，18.2 MΩ·cm)。標準溶液配制：分別準確稱取適量的各標準品，用甲醇溶解SPMA，MA，DCVMA和BMA； 水溶解MHA，PGA和TCA，配制成1.0 mg/mL 的標準儲備溶液。取上述標準儲備液適量，用15 mmol/L醋酸銨緩沖液稀釋成適合濃度的混合標準中間應用液，測定前，用15 mmol/L醋酸銨緩沖液(含內標物質)稀釋成混合標準系列溶液(見2.2.3節)。

表1 色譜梯度洗脫程序

Table 1 Gradient elution program of UPLC

時間Time(min)流速Flowrate(μL/min)15mmol/L醋酸銨緩沖液15mmol/Lammoniumacetatebuffer(%)乙腈Acetonitrile(%)02509822300955330090105300703063006040730080207.5300901083009829250982

2.2 實驗方法

2.2.1 色譜條件 C18柱(50 mm×2.1 mm，1.7 μm，美國Waters公司)，柱溫40℃，進樣體積10 μL。流動相為15 mmol/L醋酸銨緩沖液和乙腈，梯度洗脫，流動相和流速的洗脫程序見表1。

2.2.2 質譜條件 負離子模式；多反應模式(Multiple reaction monitoring mode ，MRM)；離子源電壓-4400 V；離子源溫度400℃；霧化氣345 kPa；輔助霧化氣310 kPa；氣簾氣207 kPa；進口電壓-10 V；出口電壓-10 V；駐留時間100 ms。待測物和內標物質譜條件及其母/子離子見表2。2.2.3 標準曲線的繪制 用15 mmol/L醋酸銨緩沖液(內含各內標物質濃度為10～100 ng/mL)將上述混合標準中間應用液分別稀釋為SPMA, PGA, TCA, BMA, DCVMA濃度為0.1, 0.2, 0.5, 1, 5, 10, 20, 50, 100, 200和500 ng/mL，以及MA, MHA濃度為5, 20, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 800和1000 ng/mL的混合標準系列溶液，進樣10 μL分析。以各待測物的濃度作為橫坐標，待測物峰面積和內標物峰面積的比值或待測物峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，求得回歸方程和相關系數。

表2 待測物和內標物質譜條件及其母/子離子

Table 2 Mass spectrometric parameters for target compounds and their internal standards

待測物名稱Compounds*母離子Parention(m/z)子離子Daughterion(m/z)去簇電壓Declusteringpotential(V)碰撞能Collisionenergy(eV)SPMA238109-4218MHA192148-4522BMA252123-3520MA151107-3314PGA14977-2015TCA161117-20101,2-DCVMA257127-20102,2-DCVMA257127-2014SPMA-d3240109-42181,2-DCVMA-d3261127-20102,2-DCVMA-d3261127-2014BMA-13C625884-3520TFA11369-2010*FullnameofthecompoundsseeFig.1.

2.2.4 樣品的采集與處理 尿樣采集后立即放入冷凍小瓶，-70℃貯存。

取尿樣解凍，用HPLC方法測定肌酐濃度(WS/T98-1996)，肌酐濃度超過0.3～3.0 g/L的范圍，尿樣舍棄，符合此濃度范圍，用于檢測，測定結果同時進行肌酐校正。

尿樣經15000 r/min離心5 min，取上清液，以15 mmol/L醋酸銨緩沖液稀釋10倍(緩沖液中含待測物同位素內標)，過濾，取濾液上樣測定。

2.2.5 空白尿液樣品 分別稱取氯化鈉、磷酸氰二胺、硫酸鉀、尿素、肌酐試劑12.5, 4.05, 1.74, 25.0和1.20 g，溶于1000 mL純水，配制成模擬空白尿樣[12]。按照2.2.4節進行樣品前處理后進行UPLC/MS/MS分析，用于基質效應的評價。

3 結果與討論

3.1 質譜條件的確定

分別配制濃度為 100 μg/mL 的標準溶液和內標溶液，采用全掃描方式，利用針泵以 20.0 μL/min 流速進樣，循環10次后，分別確定其母離子。在優化的最佳錐孔電壓和碰撞能量條件下，進行子離子的選擇。MSM方式下選擇用于分析的母離子和子離子見表2。

3.2 色譜條件的確定

實驗考察了甲醇-甲酸、乙腈-甲酸、甲醇-醋酸銨、乙腈-醋酸銨4種流動相體系下，各待測物質的色譜響應。結果表明，各待測物質以乙腈-醋酸銨作為流動相時分離更好，響應更高。

固定乙腈-醋酸銨體積比為20∶80，流速為300 μL/min，實驗在5～20 mmol/L范圍內研究了流動相中醋酸銨濃度的影響，結果表明，在流動相中加入適量的醋酸銨能提高待測物的離子化效率，利于待測物的分子離子化，從而改善了色譜峰的峰形，提高了靈敏度。當醋酸銨濃度為15 mmol/L時，響應值較高且穩定。實驗選擇乙腈-15 mmol/L醋酸銨為流動相，并考察流動相比例，乙腈-醋酸銨體積比為20∶80時，DCVMA保留時間已經大于30 min，而TFA保留時間小于0.5 min，因此采用梯度洗脫以得到合適的分析時間，優化梯度洗脫條件，程序見表1。在選定色譜和質譜條件下得到的標準溶液色譜圖見圖1。

圖1 混合標準溶液色譜圖Fig.1 Chromatogram of mixed standard solution1. 三氟乙酸(Trifluoroacetic acid，TFA)； 2. 苯乙醇酸(Mandelic acid，MA); 3. 苯乙醛酸(Phenylglyoxylic acid，PGA); 4. 三氯乙酸(Trichloroacetic acid, TCA)； 5. 甲基馬尿酸(Methylhippuric acid，MHA)； 6. 苯巰基尿酸(S-phenylmercapturic acid, SPMA)； 7. 苯巰基尿酸-d2(DL-S-phenylmercapturic-3,3-d2 Acid，SPMA-d2)； 8. N-乙酰基-S-苯基-L-半胱氨酸(N-acetyl-S-(benzyl)-L-cysteine, BMA)； 9. N-乙酰基-S-苯基-L-半胱氨酸-13C6(N-acetyl-S-(benzyl-13C6)-L-cysteine,BMA-13C6); 10. N-乙酰基-S-(1,2-二氯乙烯基)-L-半胱氨酸(N-acetyl-S-(1,2-dichlorovinyl)-L-cysteine，1,2-DCVMA)；11. N-乙酰基-S-(1,2-二氯乙烯基)-L-半胱氨酸-13C,d3(N-acetyl-S-(1,2-dichlorovinyl)-L-cysteine-13C, d3(1,2-DCVMA-13C,d3)； 12. N-乙酰基-S-(2,2-二氯乙烯基)-L-半胱氨酸(N-acetyl-S-(2,2-dichlorovinyl)-L-cysteine，2,2-DCVMA)；13. N-乙酰基-S-(2,2-二氯乙烯基)-L-半胱氨酸-13C,d3(N-acetyl-S-(2,2-dichlorovinyl)-L-cysteine-13C,d3(2,2-DCVMA-13C,d3)

3.3 樣品前處理

為減少飲水量和排汗量的影響，采樣后需盡快測定尿肌酐含量。肌酐濃度超過0.3～3.0 g/L的范圍，尿樣舍棄，符合此濃度范圍，用于待測物檢測。

在實驗所建立的方法下，各待測物質的檢出限在0.035～1.75 μg/L之間，其靈敏度滿足了暴露人群的接觸水平的檢測。實驗平衡了方法靈敏度與大批量分析檢測的實際工作要求，同時為了最大限度保證同時測定大批量尿樣的準確度，采用了稀釋進樣的樣品處理方式代替濃縮的樣品處理方式。結果表明，10倍的稀釋能夠獲得最小的離子抑制, 并且保持合適的靈敏度，此外，少于2%的樣品在分析過程中出現了離子抑制的現象，繼續稀釋能夠解決此問題，同時得到更優的分析結果。稀釋液用15 mmol/L 醋酸銨緩沖液最佳，在其中即便加少量的甲醇也會使得測定靈敏度下降，峰形展寬且拖尾，這對出峰靠前的待測物影響尤為顯著。

據文獻[13]報道，苯系物的代謝產物前體 pre-SPMA在酸性條件下能轉化成 SPMA，但實驗發現，采用強酸水解尿樣，會使SPMA以外的分析物的穩定性降低，故省略了此步驟。

因此，尿樣經肌酐校正后，15000 r/min 離心5 min，取上清液用15 mmol/L醋酸銨緩沖液稀釋10倍后，直接進樣分析。

3.4 基質效應

為檢測基質效應，將6 份模擬空白尿樣品按2.2.5 節處理后，加入50 ng/mL混合標準溶液，進樣分析。與用15 mmol/L 醋酸銨緩沖液配制的同樣濃度的混合標準溶液測定的信號強度比較，計算各待測物的基質效應因子(Matrix factor，MF)[14]，其中MHA、MA、PGA的基質效應較小，MF在95%～105%范圍內，而TCA、SPMA、BMA和DCVMA的基質效應對定量結果有顯著影響，主要表現為使測定結果偏低，MF在30%～40%范圍內，為了獲得更為準確的定量測定結果，實驗對 SPMA、BMA 和 DCVMA 采用了同位素內標進行基質效應的校正(TCA同位素內標純度達不到要求，僅為97%，實驗采用三氟乙酸 (Trifluoroacetic acid，TFA)作為其內標物進行基質效應的校正)，通過內標校正，MF可控制在90%～110%范圍內。

3.5 方法指標

3.5.1 線性范圍和檢出限 用15 mmol/L醋酸銨緩沖液配制成混合標準系列應用液，按照2.2.3節繪制標準曲線。實驗結果表明，待測物SPMA, PGA, TCA, BMA和DCVMA分別在0.1～500 ng/mL濃度范圍內，MA、MHA在5～1000 ng/mL濃度范圍內，線性良好，相關系數≥0.997。以3倍基線噪聲所對應的濃度計算檢出限，尿樣稀釋10倍處理，各待測物的方法檢出限在0.035～1.75 μg/L范圍內。

3.5.2 精密度 在本實驗條件下，使用5 ng/mL混合標準溶液在同一天內重復進樣6次和連續6 d進樣測定，內標校正計算其響應值的RSD考察儀器的日內和日間精密度，測定結果分別為1.3%～5.9%和2.1%～6.4%。

3.5.3 加標回收率和精密度 在方法的線性范圍內，于相同的尿樣中分別加入低、中、高3個濃度的混合標準溶液，分別計算加標回收率，結果如表3所示，方法的回收率為85.0%～104%。樣品的日內和日間精密度(RSDs,n=5)分別為1.2%～9.1%和2.0%～9.7%。

表3 加標回收率(n=5)

Table 3 Recoveries of spiked samples (n=5)

待測物Compounds本底值Background(μg/L)加標量Added(μg/L)測定值Detected(μg/L)回收率Recoveries(%)SPMA10.8PGA102TCA22.8BMA40.5515.186.01020.294.02030.910150146.989.8100203.7102200310.41041031.587.02039.885.05073.61022060.399.04079.898.380121101待測物Compounds本底值Background(μg/L)加標量Added(μg/L)測定值Detected(μg/L)回收率Recoveries(%)DCVMA8.4MA466MHA1594.012.398.08.016.510112.019.794.2200657.595.8400848.695.7600988.387.1100260.9102200361.7101300471.8104

3.6 實際樣品分析

隨機采集各地醫院的孕婦尿樣，用所建立的方法測定了深圳、南寧、成都、福州、石家莊、西安等地區650例孕婦尿樣中苯系物和三氯乙烯代謝物的含量，并對測定值進行統計分析。通過正態性檢驗，p<0.05, 說明各樣本所代表的總體不滿足正態分布，故采用非參數檢驗-Bonferroni校正的兩兩比較法。首先進行各指標的總體比較，各地區的各指標中位數和統計結果如表4所示。當p>0.05，尚不能認為各地區孕婦尿樣中相應指標具有差異；當p<0.05，可以認為各地區孕婦尿樣中相應指標具有差異,經成對比較得出兩地區間的差異。

表4 各地區孕婦尿樣中苯系物和三氯乙烯代謝物的中位值和p值

Table 4 Statistic analysis of urine samples of pregnant women in different regional

待測物Compounds深圳Shenzhen南寧Nanning成都Chengdu福州Fuzhou石家莊Shijiazhuang西安Xi'anpSPMA(μg/g.cr)4.423.104.593.943.542.39>0.05PGA(μg/g.cr)589537641578600655>0.05MHA(μg/g.cr)860112110051017834831>0.05MA(mg/g.cr)17.421.58.8615.230.89.63<0.05TCA(μg/g.cr)52.723.611.138.530.210.3<0.05DCVMA(μg/g.cr)8.307.767.036.286.8110.2<0.05BMA(μg/g.cr)107.995.313315211590.0<0.05

經成對比較，得出石家莊地區孕婦尿樣中MA值分別與深圳、西寧、成都、福州、西安地區有明顯差異，石家莊地區孕婦尿樣中的MA值明顯高于上述5個地區；深圳地區孕婦尿樣中MA含量高于西安地區孕婦尿樣中MA含量。

深圳地區孕婦尿樣中TCA值分別與西寧、成都、福州、石家莊、西安有明顯差異，深圳地區孕婦尿樣中的TCA值明顯高于以上地區；此外，福州地區孕婦尿樣中TCA含量高于西寧、成都、西安地區孕婦尿樣中TCA含量。

福州地區孕婦尿樣中DCVMA值分別與深圳、西寧、西安地區有明顯差異，福州地區孕婦尿樣中的DCVMA值低于以上3個地區； 石家莊地區孕婦尿樣中DCVMA含量低于深圳、西安地區孕婦尿樣中DCVMA含量。

福州地區孕婦尿樣中BMA值分別與深圳、西寧地區有明顯差異，福州地區孕婦尿樣中的BMA值高于以上2個地區。

綜上，在各地區孕婦尿樣中苯系物和三氯乙酸的代謝產物含量差異比較中，尚不能認為各地區孕婦尿樣中SPMA、PGA、MHA值具有差異；各地區之間孕婦尿樣中MA、TCA、DCVMA、BMA含量分別具有一定的差異，其中福州、石家莊、深圳地區含量較高，可能與其城市的工業發展狀況、城市環境污染有一定的關系。

1 CHEN Wen, XU Lei, DENG Li-Xia, LI Fang-Hong, YANG Xing-Fen, ZHENG Chang-Liang, CHEN Gang.Chin.Occup.Med., 2000, 27(5): 9-11

陳 雯, 徐 雷, 鄧麗霞, 李方紅, 楊杏芬, 鄭創亮, 陳 剛. 中國職業醫學, 2000, 27(5): 9-11

2 LI Xing-Hu, WANG Jin-Feng, ZHENG Xiao-Ying, ZHANG Ke-Li.Chin.J.PublicHealth, 2005, 21(10): 1158-1160

李新虎, 王勁峰, 鄭曉瑛, 張科利. 中國公共衛生, 2005, 21(10): 1158-1160

3 Boogarrd P J, Van Sittert N J.Environ.HealthPerspect, 1996, 104(6): 1151-1157

4 Qu Q, Melikian A A, Li G, Shore R, Chen L, Cohen B, Yin S, Kagan M R, Li H, Meng M, Jin X, Winnik W, Li Y, Mu R, Li K.Am.J.Ind.Med., 2000, 37(5): 522-531

5 Inoue O,Kanno E, Yusa T, Kakizaki M, Watanabe T, Higashikawa K, Ikeda M.Biomarkers, 2001, 6(3): 190-203

6 Laffon B, Lema M, Mendez J.J.Chromatogr.B, 2001, 753(2): 385-393

7 Schad H, Schafer F, Weber L, Seidel H J.J.Chromatogr.A, 1992, 593(1-2): 147-151

8 LIU Yun-Fu, TAN Guang-Hui.ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology, 2013, 23(3): 625-627

劉云富, 譚廣輝. 中國衛生檢驗雜志, 2013, 23(3): 625-627

9 DU Hong, KONG Yu-Mei, WANG Ping, DU Guang-Yu.TheAdministrationandTechniqueofEnvironmentalMonitoring, 2000, 12(6): 33-34

杜 宏, 孔玉梅, 王 平, 杜廣玉. 環境監測管理與技術, 2000, 12(6): 33-34

10 LIU Ming-Ren, YANG Xue-Yu, WANG Li, ZHANG Zhao-Liang.EnvironmentalScienceandTechnology, 2011, 34(11): 135-138

劉明仁, 楊學雨, 王 力, 張昭良. 環境科學與技術, 2011, 34(11): 135-138

11 LIU Wen-Jun, DUAN Ai-Ling, GAO Lan-Zhen.GansuEnvironmentalStudyandMonitoring, 2000, 13(4): 195-197

劉文君, 段愛玲, 高蘭珍. 甘肅環境研究與監測, 2000, 13(4): 195-197

12 SUN Chen-Jun.BiomaterialsInspection, Beijing: People′s Medical Publishing House, 2006: 193

孫成均主編. 生物材料檢驗, 北京: 人民衛生出版社, 2006: 193

13 Sterz K, Kohler D, Schettgen T, Scherer G.J.Chromatogr.B, 2010, 878(27): 2502-2505

14 van Eeckhaut A, Lanckmans K, Sarre S, Smolders I, Michotte Y.J.Chromatogr.B, 2009, 877(23): 2198-2207

(Received 17 June 2015; accepted 21 October 2015)

This work was supported by the State Key Development Program for Basic Research of China (No.2010CB529502)

Determination of Metabolites of Benzene Compounds and Trichloroethylene in Urinary by Isotope Dilution-Ultra Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

ZHU Jing1, LI Yan1, YONG Li2, ZHENG Bo1, ZOU Xiao-Li*1, LIU Zhen3

1(DepartmentofLaboratoryTechnologyandScienceofPublicHealth,WestChinaSchoolofPublicHealth,SichuanUniversity,Chengdu610041,China)2(CenterforDiseaseControlandPreventionofSichuanProvince,Chengdu610041,China)3(NationalCenterforBirthDefectMonitoring,WestChinaSecondUniversityHospital,SichuanUniversity,Chengdu610041,China)

A method for simultaneous determination of metabolites of benzene compounds and trichloroethylene in pregnant urine by isotope dilution-ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry was established. Urine samples were diluted 10 times with ammonium acetate buffer containing working mixed internal standard and the filtrate was injected into UPLC/MS/MS for analysis. UPLC-MS/MS was performed on Waters C18column and the gradient elution was used for separation. The negative electrospray ionization (ESI) source under the multiple reaction monitoring (MRM) mode was used for quantitative analysis. The limits of detection (LOD) ranged from 0.0350 μg/L to 1.75 μg/L. The inter-day and intra-day precisions of method were 1.2%-9.1% and 2.0%-9.7%, respectively. The proposed method was applied on detecting 650 urine samples of pregnant women in different region and the results were analyzed by statistical method. The spiked recoveries were in the range of 85.0%-104%. The method was quick, sensitive and suitable for batch analysis of urine samples.

Isotope dilution; Ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; Benzene compounds; Trichloroethylene; Metabolite; Urinary

10.11895/j.issn.0253-3820.150497

本文系國家重點基礎研究發展計劃(No.2010CB529502)資助

2015-06-17投稿；2015-10-21接受

* E-mail：zouxl_1113@163.com