3種豬偽狂犬病gB抗體ELISA檢測試劑盒的比較

蔡振鴻 趙 冉 楊 濤*

（1.廈門市思明區(qū)市政管理中心廈門361005；2.廈門市動物疫病預(yù)防控制中心廈門361009）

3種豬偽狂犬病gB抗體ELISA檢測試劑盒的比較

蔡振鴻1趙 冉2楊 濤2*

（1.廈門市思明區(qū)市政管理中心廈門361005；2.廈門市動物疫病預(yù)防控制中心廈門361009）

采用3種豬偽狂犬病gB抗體ELISA檢測試劑盒檢測121份血清樣品，對檢測結(jié)果進行Kappa一致性檢驗。結(jié)果顯示：3種gB抗體檢測試劑盒都具有很好的重復(fù)性，兩兩之間檢測結(jié)果的符合率達80%以上，Kappa值＞0.6，表明3種檢測試劑盒具有較好的重復(fù)性和一致性。

豬偽狂犬gB抗體ELISA試劑盒Kappa檢驗

豬偽狂犬病（pseudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的多種家畜和野生動物感染的一種急性傳染病。在臨床實踐中，豬偽狂犬病gB抗體ELISA檢測試劑盒常被用于檢測PRV抗體水平。目前市場上有不同廠家生產(chǎn)的PRV gB抗體檢測試劑盒，本研究選取3種進口PRV gB抗體檢測試劑盒，對相同的豬血清樣品分別進行檢測，比較結(jié)果的一致性。

1 材料與方法

1.1 豬偽狂犬病gB抗體檢測試劑盒來源北京愛德士元亨生物科技有限公司（IDEXX），產(chǎn)品批號為

LL492；北京天之泰生物科技有限公司（BIOCHEK），產(chǎn)品批號為FS6233；法國ID.vet（ID Screen），產(chǎn)品批號為781。

1.2 被檢測血清來自某規(guī)模豬場的121份血清，均常規(guī)免疫偽狂犬病疫苗。

1.3 檢測方法試驗方法及結(jié)果判定按照試劑盒說明書進行，其中：血清樣品均按照1∶200稀釋。IDEXX與ID.vet試劑盒采用短期孵育模式。BIOCHEK通過S/P值判定，S/P≥0.500為陽性，S/P＜0.499為陰性；IDEXX與ID.vet通過S/N值判定，IDEXX S/N≤0.600為陽性，0.6＜S/N≤0.70為可疑，S/N＞0.70為陰性，ID.vet S/N≤0.40為陽性，0.4＜S/ N≤0.50為可疑，S/N＞0.50為陰性。

S/P=（樣品OD值-陰性對照OD值）/（陽性對照OD值-陰性對照OD值）；

S/N=樣品OD值/陰性對照OD值。

1.4 統(tǒng)計方法應(yīng)用spss22.0統(tǒng)計學(xué)軟件對結(jié)果進行統(tǒng)計分析。統(tǒng)計S/N值或S/P值的最大值、最小值、平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和陽性率。

1.4.1 重復(fù)性比較隨機抽取12份血清樣品重復(fù)檢測3次，比較3次檢測結(jié)果，了解各試劑盒的重復(fù)性。

1.4.2 一致性比較計算符合率。符合率指2種試劑盒判定結(jié)果相同樣本數(shù)除以檢測總數(shù)。對一致性進行Kappa檢驗。因BIOCHEK試劑盒只有陰性、陽性兩個判定結(jié)果，為方便進行統(tǒng)計，結(jié)合生產(chǎn)實際，將其他試劑盒可疑結(jié)果判定為陰性進行統(tǒng)計。Kappa統(tǒng)計量一致性強度參考判斷指標(biāo)[1]，將Kappa

值大小分為6個區(qū)段，分別代表一致性的強弱程度。Kappa值＜0，極差；0.00～0.20，微弱；0.21～0.40，弱；0.41～0.60，中度；0.61～0.80，高度；0.81～1.00，極強。

2 結(jié)果與分析

2.13 種試劑盒的重復(fù)性具體檢測結(jié)果見表1。由表1可知，12份樣品重復(fù)3次檢測的S/N（S/P）值中，INDEXX試劑盒最大變異系數(shù)為15.80%，ID.vet試劑盒最大變異系數(shù)為10.27%，BIOCHEK試劑盒最大變異系數(shù)為8.39%。

2.2 檢測結(jié)果121份豬血清樣品用3種試劑盒檢測的結(jié)果見表2。

表1 3種試劑盒重復(fù)性比較

表2 IDEXX、ID.vet與BIOCHEK檢測結(jié)果

2.3 一致性比較IDEXX與ID.vet檢測結(jié)果符合率為86.8%（見表3），其Kappa值為0.717，一致性強度為高度。IDEXX與BIOCHEK檢測結(jié)果符合率為81.8%（見表4），其Kappa值為0.632，一致性強度為高度。ID.vet與BIOCHEK檢測結(jié)果符合率為81.8%（見表5），其Kappa值為0.626，一致性強度為高度。

表3 IDEXX與IDVET檢測結(jié)果一致性分析

表4 IDEXX與BIOCHEK檢測結(jié)果一致性分析

表5 ID.vet與BIOCHEK檢測結(jié)果一致性分析

3 討論

1）因為血清樣品均來自同一規(guī)模豬場，疫苗免疫比較到位，在預(yù)試驗中檢測到血清抗體滴度很高，樣品陽性率可達96%以上，在這種情況下比較3種試劑盒一致性會非常高。通過倍比稀釋后，發(fā)現(xiàn)血清樣品在1∶200稀釋后檢測的S/P值或S/N值多數(shù)在臨界值附近范圍，這更有利于考察3種試劑盒檢測結(jié)果的一致性，因此，本次試驗血清樣品均采用1∶200稀釋。

2）重復(fù)性試驗中，3種試劑盒重復(fù)3次檢測的S/N（S/P）值變異系數(shù)大多數(shù)位于10%以內(nèi)，表現(xiàn)出很好的重復(fù)性，且本次檢測結(jié)果是采用1∶200稀釋

后的血清，可以得出在實際檢測中，3種試劑盒均具有較好的重復(fù)性。

3）Kappa值主要體現(xiàn)兩種不同試劑或方法檢測結(jié)果的一致性，但不能判定哪個試劑盒或方法較好。Kappa值越大，兩者一致性越高，則表明結(jié)果可靠性越高[2]，可作為檢測試劑或方法對于檢測結(jié)果可靠程度的參考[3]。檢測一致性結(jié)果表明，3種試劑盒檢測結(jié)果兩兩比對均表現(xiàn)為高度一致性，提示3種試劑盒在檢測豬偽狂犬病gB抗體結(jié)果的可靠性程度方面基本相當(dāng)，均可應(yīng)用于臨床檢測。

[1]廈世邦,吳金華.Kappa一致性檢驗在檢驗醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2006,29(1)：83-84.

[2]Landis J R,Koch G G.The measurement of observer agreement for Gategorical data[J].Biometrics,1977,33：159-174.

[3]劉華,詹松鶴,何長生,等.應(yīng)用Kappa檢驗比較豬藍耳病ELISA抗體檢測試劑盒[J].中國動物檢疫,2014,31(11)：95-105.

Application of Kappa test for evaluation of PRV gB antibody ELISA kits

Cai Zhenhong1Zhao Ran2Yang Tao2*
(1.Xiamen Siming District Public Facilities Management Center,Xiamen 361005; 2.Xiamen Center for Animal Disease Control and Prevention,Xiamen 361009)

To compare the consistency between the results of three different PRV gB antibody ELISA Kits by Kappa test,121 swine serum samples were tested by the PRV gB antibody ELISA kits produced by three different firms.The results showed that the three kits had good repeatability respectively,the consistency rate was more than 80%and the Kappa value was more than 0.6．These three kits are highly agreeed.

Pseudorabies gB antibody ELISA kit Kappa test

A

1003-4331（2016）06-0003-03

廈門市科技計劃項目（3502Z20154095）資助。作者簡介：蔡振鴻(1981-)，男，碩士。

*通信作者：楊濤(1971-)，女，碩士，副研究員。