法氏囊活性肽BPP—Ⅱ?qū)魅拘苑ㄊ夏乙呙绲拿庖咴鰪?qiáng)作用

高蕾蕾　張聰　張巫凡　王臣

摘要：本試驗旨在研制具有良好免疫效果的免疫活性肽。經(jīng)人工合成法氏囊活性肽BPP-Ⅱ，將其作為佐劑添加到傳染性法氏囊疫苗中免疫雛雞。通過對免疫雛雞法氏囊指數(shù)和AGP抗體水平的測定，來評價BPP-Ⅱ?qū)魅拘苑ㄊ夏乙呙绲拿庖咝Ч挠绊懀Y(jié)果表明BPP-Ⅱ?qū)魅拘苑ㄊ夏乙呙缬酗@著免疫增強(qiáng)作用，為進(jìn)一步的研究奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：法氏囊；BPP-Ⅱ；法氏囊指數(shù)；AGP抗體

傳染性法氏囊弱毒疫苗，是一種常規(guī)傳染性法氏囊疫苗，其免疫效果并不理想，僅能誘導(dǎo)機(jī)體的體液免疫應(yīng)答而不能有效的刺激機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答。因此如何研發(fā)一種修護(hù)受損（免疫抑制作用）免疫器官以及保障甚至激發(fā)機(jī)體內(nèi)在免疫保護(hù)力的免疫佐劑，顯得尤為重要和迫切。法氏囊活性肽BPP-Ⅱ是法氏囊中新分離出來的一種新型的活性小肽[1—2]，結(jié)構(gòu)簡單，分子量小，無化學(xué)毒性，無免疫原性，制備簡單，既可以從禽類的法氏囊分離，也可以人工合成。本研究旨在評價BPP-Ⅱ?qū)魅拘苑ㄊ夏乙呙绲拿庖咝Ч挠绊懀瑸殚_發(fā)一種新型免疫佐劑提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。

一、材料與方法

1.試驗材料

健康未免疫的1日齡來航雞105只，購于洛陽峪口禽業(yè)有限公司；傳染性法氏囊病弱毒苗購于遼寧益康生物制品有限公司；實驗用法氏囊毒株為中國標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株（BC6/85株100ELD50/只）由本實驗室保存。

2.法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ的設(shè)計及合成

法氏囊活性五肽（BPP-Ⅱ）序列為Met-Thr-Leu-Thr-Gly，由上海科肽生物科技有限公司合成，純度95%。

3.動物分組與免疫

將105只雞分為三組：PBS空白組、單獨疫苗組、疫苗+BPP-Ⅱ組，每組35只。采取注射免疫。首免后間隔兩周進(jìn)行第二次免疫。在首疫后14、21 d，對每組雞進(jìn)行心臟采血。將采到的血液分離血清并保存。

4.雛雞法氏囊指數(shù)的測定

首免后14 d、21 d先從各組雞籠隨機(jī)抽取5只雞，解剖后取雞的法氏囊分裝于EP管經(jīng)電子秤稱重后置于4℃冰箱保存。

5.雛雞AGP抗體水平的測定

采用瓊脂擴(kuò)散法測定雛雞AGP抗體效價。

二、結(jié)果與分析

1.法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ?qū)﹄r雞法氏囊器官發(fā)育的影響

在首免后14、21 d分別從各組隨機(jī)取出5只雞進(jìn)行稱重并解剖，取出對應(yīng)雞的法氏囊并稱重，按雞法氏囊指數(shù)即法氏囊指數(shù)=法氏囊重量（mg）/體重（g）公式處理并對其進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)及圖表分析。由表1可以看出在首免后14、21d疫苗+BPP-Ⅱ組的法氏囊指數(shù)明顯大于疫苗組，這說明法氏囊五肽BPP-Ⅱ在促進(jìn)法氏囊生長發(fā)育方面具有顯著影響（P<0.05）。

2.法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ?qū)﹄r雞AGP抗體水平的影響

在首免后21d采集雞血清抗體效價，并對其進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)及圖表分析。據(jù)圖1可以很直觀發(fā)現(xiàn)疫苗+BPP-Ⅱ組的AGP抗體效價比疫苗組顯著增高這一結(jié)果。

三、討論

對于現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)來說，盡管廣泛應(yīng)用疫苗免疫接種，但是傳染性法氏囊病的經(jīng)常爆發(fā)仍然造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。目前，傳染性法氏囊病毒疫苗因具有包含中和抗體的能力而被經(jīng)常單獨選擇。一個基本的認(rèn)識就是這些疫苗在分子水平和細(xì)胞水平所提供的保護(hù)性免疫應(yīng)答對IBDV的控制機(jī)構(gòu)是一個很大的補充。但是這些優(yōu)勢并不能掩飾疫苗在抗原變異性增加而新疫苗研制方面滯后而造成的疫苗經(jīng)常性出現(xiàn)免疫失敗的困局。這一劣勢也是現(xiàn)今大部分疫苗的通病。因此，對疫病傳統(tǒng)的防控措施方面需要注入新的血液。本研究通過探索法氏囊活性五肽（BPP-Ⅱ）對傳染性法氏囊病毒弱毒苗免疫效果及雞生長性能的影響，從而為法氏囊活性肽作為免疫佐劑在臨床上的應(yīng)用提供依據(jù)，為進(jìn)一步開發(fā)新的法氏囊活性肽提供實驗支持。