法氏囊活性七肽BSP—Ⅱ?qū)魅拘苑ㄊ夏乙呙绲拿庖咴鰪?qiáng)作用

王嘉偉　閆婉婉　張巫凡　張聰　王臣

摘要：傳染性法氏囊病（IBD）是由傳染性法氏囊病病毒（IBDV）引起的主要以破壞雛雞法氏囊中樞免疫器官為發(fā)病機(jī)理的傳染病，給我國的養(yǎng)雞業(yè)帶來了巨大經(jīng)濟(jì)損失。為研制具有良好免疫效果的免疫肽，本實驗用人工合成的法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ和傳染性法氏囊疫苗共同免疫雛雞群，通過對體液免疫指標(biāo)的檢測來評價其對傳染性法氏囊疫苗的免疫增強(qiáng)作用。結(jié)果表明，法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ能夠促進(jìn)雛雞中樞免疫器官法氏囊的生長發(fā)育，同時對傳染性法氏囊疫苗具有免疫增強(qiáng)作用，為進(jìn)一步的研究奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：法氏囊；法氏囊活性肽BSP-Ⅱ；體液免疫

傳染性法氏囊病具有發(fā)病突然、傳播速度快、病程短、發(fā)病率高的特點。是近些年來嚴(yán)重危害我國養(yǎng)雞業(yè)的主要傳染性疾病之一。由于傳染性法氏囊病的病原存在容易變異和損害中樞免疫器官的特性，因此該病的疫苗研制、開發(fā)以及臨床上的應(yīng)用都是一個持續(xù)性的難題。研究表明，法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ能夠促進(jìn)B、T淋巴細(xì)胞的生成，增強(qiáng)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化成漿細(xì)胞時產(chǎn)生抗體的能力。還能夠提高機(jī)體抗過氧化應(yīng)激的能力，是具有廣泛應(yīng)用前景的免疫調(diào)節(jié)劑。本研究擬以傳染性法氏囊疫苗聯(lián)合人工合成的BSP-Ⅱ免疫雞，通過對免疫指標(biāo)水平的檢測來評價BSP-Ⅱ?qū)魅拘苑ㄊ夏乙呙绲拿庖咴鰪?qiáng)作用，為進(jìn)一步研究開發(fā)新型免疫佐劑奠定基礎(chǔ)。

一、材料與方法

1.試驗材料。健康非免疫來航雛雞105只，購于洛陽現(xiàn)代禽業(yè)有限公司；傳染性法氏囊弱毒苗購自遼寧益康生物制品有限公司；傳染性法氏囊標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株（BC6/85株）由本實驗室保存。

2.法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ的設(shè)計及合成。法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ根據(jù)TPSGLVY氨基酸序列由上海科肽生物科技有限公司合成，純度達(dá)95%以上。

3.動物的分組及免疫。將105只雛雞分為三組：空白組、單獨疫苗組、疫苗+BSP-Ⅱ組，每組35只?？诜緩綄﹄r雞進(jìn)行免疫接種。劑量：空白組（生理鹽水0.5ml/只）；疫苗組（傳染性法氏囊弱毒苗1頭份/只）；疫苗+BSP-Ⅱ組（傳染性法氏囊弱毒苗1頭份/只+BSP-Ⅱ10ug/只）；首免后間隔一周進(jìn)行第二次免疫。

4.雛雞法氏囊指數(shù)的測定。首免后7 d、14 d采集法氏囊。測定雛雞法氏囊指數(shù)。

5.雛雞AGP抗體效價的測定。將雛雞在首免后14 d分離得到的血清用瓊脂擴(kuò)散實驗測其AGP抗體效價。

6.數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析。采用SPSS17.0軟件進(jìn)行計算分析，不同組間比較采用單因素方差分析，各組之間存在顯著性差異用*（P<0.05）表示；各組之間存在極顯著差異用#（P<0.01）表示；各組之間不存在顯著性差異用（P>0.05）表示。

二、結(jié)果與分析

1.法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ?qū)﹄r雞法氏囊免疫器官生長發(fā)育的影響。通過spss軟件分析得出在首免后7 d、14 d疫苗+BSP-Ⅱ組與空白組存在顯著性差異（P<0.05），疫苗組與空白組之間不存在顯著性差異（P>0.05），如圖1所示。由此可知，傳染性法氏囊疫苗對雛雞法氏囊中樞免疫器官的生長發(fā)育沒有影響，但法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ能夠促進(jìn)雛雞中樞免疫器官法氏囊的生長發(fā)育。

2.法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ?qū)﹄r雞AGP抗體效價的影響

24-48 h觀察瓊脂平板培養(yǎng)皿，經(jīng)過最后的計算得出空白組的平均雛雞AGP抗體效價趨于0；單獨疫苗組的平均雛雞AGP抗體效價為6；疫苗+BSP-Ⅱ組的平均雛雞AGP抗體效價為8；如圖2所示，可以得出法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ?qū)魅拘苑ㄊ夏乙呙缇哂忻庖咴鰪?qiáng)的作用。

三、討論

傳染性法氏囊病具有發(fā)生速度和傳播速度快的特點，雞舍中一旦發(fā)現(xiàn)有感染的雞時，在短時間內(nèi)所有雞均可被感染，嚴(yán)重雞群的死亡率可高達(dá)60%。對于畜牧業(yè)來說，本病一旦發(fā)生就會造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ是從法氏囊中分離出的又一種活性小肽，既可以從雞或其它禽類的法氏囊組織中提取，也可以人工化學(xué)合成，合成時成本很低，可以大量制備。實驗結(jié)果表明，法氏囊活性七肽BSP-Ⅱ作為佐劑既能夠促性雛雞法氏囊中樞免疫器官的生長發(fā)育，而且能夠增強(qiáng)傳染性法氏囊疫苗所誘導(dǎo)的AGP抗體水平。這為法氏囊活性肽的進(jìn)一步研究與生產(chǎn)實踐中的應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。