可見分光光度法測定醬菜中亞硝酸鈉含量

殷紫　 江蘇護理職業(yè)學(xué)院 淮安 223003

可見分光光度法測定醬菜中亞硝酸鈉含量

殷紫 江蘇護理職業(yè)學(xué)院 淮安 223003

本次實驗?zāi)康氖遣捎每梢姺止夤舛确▉頊y定市場醬菜中的亞硝酸鈉含量。采用的方式，在弱酸性條件下亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化反應(yīng)后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色的物質(zhì)，于540nm處測定吸光度。此方法的優(yōu)點在于操作簡便、靈敏度高、穩(wěn)定性好，適用于測量醬菜中亞硝酸鹽的含量。

醬菜；亞硝酸鹽；可見分光光度法

0 前言

人們在日常生活中最常見的一種腌制蔬菜就是醬菜,長期食用會對人體造成一定的危害，越來越多的檢測實驗室開始開展亞硝酸鹽含量的檢測項目，于是選擇準(zhǔn)確經(jīng)濟并且快速又操作簡便的檢測方法就顯得十分重要[1]。

亞硝酸鹽是國際公認的致癌物質(zhì)，因為它具有防腐劑和增強風(fēng)味的作用往往被添加到食品中，但是添加過量的量會損害人體。本文采納可見分光光度法來測定市場中醬菜亞硝酸鈉的含量，該方法具有操作簡單、花費少、耗時短、線性關(guān)系好等諸多優(yōu)點。

1 實驗內(nèi)容

1.1實驗步驟

1.1.1原理

實驗在弱酸性條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化反應(yīng)，然后再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色物質(zhì)，該紫色物質(zhì)最大吸收波長為540nm，且色澤深淺與亞硝酸鹽含量在一定范圍內(nèi)呈正比，通過與標(biāo)準(zhǔn)對照確定含量[2]。

1.2實驗藥品與儀器

1.2.1實驗藥品

乙酸鋅溶液，批號（2016012)；亞鐵氰化鉀溶液，批號(2016074)；飽和硼砂溶液，批號（160120）；對氨基苯磺酸溶液，批號（20151124）；鹽酸萘乙二胺溶液(2g/L)，批號（20150922）；亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(250μg/ml)，批號（20160102）；亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（5.0μg/ml），批號（20151222）。

1.2.2實驗儀器

使用該法所需的儀器有：可見分光光度計（上海美普達儀器有限公50006567），精密電子天平（上海美普達儀器有限公司7292838），硅膠干燥器，100ml容量瓶、500ml容量瓶，50ml具塞比色管。

1.3樣品預(yù)處理

實驗前，稱取被粉碎均勻的樣品8.0克，置于50ml燒杯中，然后加入硼砂飽和溶液12.5ml，充分?jǐn)嚢杈鶆颍瑐溆谩Ｔ?00ml的燒杯加入70℃的熱水300ml，溶解上述備用的飽和溶液，再在80℃熱水中水浴15分鐘，然后慢慢放冷到與室溫一樣的溫度，放冷，在攪拌的同時加入5ml的亞鐵氰化鉀溶液，充分搖勻后再加入乙酸鋅溶液5ml，目的是為了使蛋白質(zhì)沉淀，避免對實驗的影響。靜置半個小時，除去上層脂肪，然后過濾，除去初濾液，再放入500ml的容量瓶中，進行最后的定容。

1.4樣品的測定

吸取40ml的樣品溶液放入50ml的具塞比色管中，加入2ml的對氨基苯磺酸(4g/L)溶液，充分搖勻。放置5分鐘后，再加入lml的鹽酸萘乙二胺(2g/L)溶液，添加純化水至刻度線處，充分搖勻，室溫下靜置15分鐘，然后置于波長540nm處測吸光度。與此同時，做空白試驗。

2 結(jié)果與討論

2.1最大吸收波長的選擇

在50ml的容量瓶中加入精密吸取的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液(5.0μg/ml)2ml，然后再加入對氨基苯磺酸(4g/L)溶液2ml，搖勻，靜置5分鐘。5分鐘后再分別加入乙二胺(2g/L)溶液1ml，加水至刻度線，輕輕搖勻，在25℃的環(huán)境下放置15分鐘后，用lcm的比色皿在波長400到600nm處，用空白試劑作為參比，測定其吸光度，測量結(jié)果為0.22，0.32，0.47，0.61，0.5，結(jié)果顯示亞硝酸鹽的最大吸收波長是540nm。

2.2最佳顯色劑用量的確定

精密量取5μg/ml的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液2ml，分別加入6只規(guī)格均為50ml的具塞比色管中。然后6只具塞比色管中再分別加入配制好了的對氨基苯磺酸溶液（4g/L)2ml，搖勻，靜置5分鐘，靜置后逐個加入萘乙二胺溶(2g/L)0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml，加水至刻度，輕輕搖勻，在25℃的環(huán)境下靜靜的放置15分鐘，在波長540nm處進行掃描，用空白試劑作為參比，測量結(jié)果為0.27，0.285，0.32，0.31，0.285，0.27。據(jù)此得出最佳顯色劑用量為1ml。

2.3最佳反應(yīng)溫度對吸光度的確定

精密量取5ug/ml的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液2ml，分別加入6只規(guī)格均為50ml的具塞比色管中，然后6只具塞比色管中分別加入配制好了的對氨基苯磺酸溶液（4g/L)2ml，搖勻，靜置5分鐘，靜置后再加入鹽酸萘乙二胺溶液(2g/L)1ml，加水到刻度線，搖勻，靜置時間為15分鐘，分別在環(huán)境溫度為10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃下，在波長為540nm處進行測定，并且以空白試劑為參比，測量的結(jié)果為0.21，0.265，0.315，0.33，0.32，0.3，0.29。得出其最佳反應(yīng)溫度為25℃。

2.4最佳反應(yīng)時間的確定

精密量取5μg/ml的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液2ml，分別加入6只規(guī)格為50ml的具塞比色管中。往50ml的具塞比色管中分別加入對氨基苯磺酸溶液（4g/L)2ml，輕輕搖勻，靜置時間為3到5分鐘，靜置后再加入鹽酸萘乙二胺溶液(2g/L)1ml，加水到刻度線，輕輕搖勻，在溫度環(huán)境為25℃的情況下分別靜置5min、10min、15min、20min、25min、30min，在540nm處測定吸光度，以空白試劑為參比，測量結(jié)果為0.29，0.31，0.325，0.31，0.3，0.26。結(jié)果反映在15分鐘時吸光度最大。

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取9只相同規(guī)格為50mL具塞比色管，分別滴加亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液(5.0μg/ml)0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml。然后分別加入對氨基苯磺酸溶液（4g/L） 2ml，輕搖，靜置5分鐘，靜置過后再加入鹽酸萘乙二胺溶液（2g/L）1ml，加水到刻度線，搖勻，在25℃的環(huán)境下靜置15分鐘，在波長540nm處測定其吸光度，用空白試劑做對照實驗，其測量的結(jié)果分別0.1,0.2,0.3,0.4,0.41,0.55,0.8,1。用測量結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示。

圖1　亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.6樣品分析與結(jié)果

通過以上實驗得出市場中售醬菜中亞硝酸鈉含量的測定結(jié)果，見表1。

表1　醬菜中亞硝酸鈉的含量

3 結(jié)論

經(jīng)過對實驗結(jié)果的研究，我們可以知道，使用可見分光光度法來測定醬菜中亞硝酸鹽中的含量，這種方法的優(yōu)點有測量結(jié)果準(zhǔn)確、操作過程簡單、省時省力、經(jīng)濟效益高、線性關(guān)系好、測量范圍廣。但是此方法有要求，只能在弱酸性的條件下進行，鹽酸萘乙二胺是顯色劑。

醬菜中的亞硝酸鹽含量不得超過20mg/kg，這在我國的食品分析標(biāo)準(zhǔn)法中是有明確規(guī)定的。我們通過一系列的測量，發(fā)現(xiàn)市面中醬菜的亞硝酸鹽含量是不高于20mg/kg。因此亞硝酸鹽的含量指標(biāo)是合格，是不會對人體造成傷害的。

[1]李鵬飛，王福磊，周海燕，等.格里斯比色法用于亞硝酸鹽檢測的可靠性論證[J]，化學(xué)分析計量，2008，17（5）:55-57.

[2]柏林洋，宋金海，馮剛，亞硝酸鹽檢測方法的研究進展[J]，廣州化工，2011年13期.

殷紫，女，1987年10月生，籍貫常州，中藥藥理，碩士研究生，講師。