武漢地區人群血清游離脂肪酸參考區間的探索*

周 燕，馬 培，韓 露

(武漢大學中南醫院：1.消化內科;2.基因診斷中心，武漢 430071)

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·論 著·

武漢地區人群血清游離脂肪酸參考區間的探索*

周 燕1，馬 培2，韓 露2

(武漢大學中南醫院：1.消化內科;2.基因診斷中心，武漢 430071)

目的 初步建立武漢地區人群血清游離脂肪酸(NEFA)酶法參考區間。方法 選擇該院健康體檢者1 250例作為研究對象，采用奧林巴斯AU5400生化分析儀及Sekisui酶法檢測試劑檢測血清NEFA。回歸分析NEFA的影響因素，正態分布法估計NEFA 95%參考區間，并驗證參考區間。結果 回歸分析顯示體質量指數(BMI)及年齡對NEFA有顯著影響(P<0.01)。NEFA在大于或等于60歲最高，18～<45歲次之，45～<60歲最低；NEFA在BMI<18.5 kg/m2組最高。估計武漢地區健康人群NEFA 95%參考區間為204.6～975.2 μmol/L。臨床驗證者的測定范圍為242.0～831.2 μmol/L，符合上述參考區間。結論 初步建立武漢地區健康人群NEFA參考區間。

酶法； 血清游離脂肪酸； 參考區間

游離脂肪酸(NEFA)是一類非酯化脂肪酸，主要成分為油酸、亞油酸、軟脂酸等。NEFA不僅是人體包括心、肝、骨骼肌等器官優先選擇的能源物質，還是參與氧化應激及胰島素抵抗的重要物質[1-3]。在介導血管內皮細胞損傷致動脈粥樣硬化及冠心病的發生、發展中起到重要作用。血清NEFA水平與脂代謝、糖代謝及內分泌功能等密切相關。研究表明，與血清三酰甘油及膽固醇比較，NEFA水平更能敏感地反映機體脂代謝的變化[4]。因此建立NEFA參考區間十分必要。本文檢測分析武漢市部分健康體檢者的NEFA水平，旨在初步建立武漢地區健康人群血清NEFA參考區間，為心血管疾病等提供診療依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇長期居住于武漢地區，于2013年5～9月在武漢大學中南醫院進行體檢的健康漢族成年人。所有受試者經武漢大學中南醫院倫理委員會審核批準，本人簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標準[5]所有入選對象經病史詢問、常規體格檢查以及實驗室檢查包括心電圖、X線片、腹部B型超聲波檢查、肝腎功能檢測等，各項檢測指標均顯示正常。排除冠心病、腦卒中、高血壓、血脂異常、糖尿病、非酒精性脂肪肝、其他動脈粥樣硬化性疾病病史等，排除乙肝病毒攜帶者及年齡小于18歲者。

1.3 方法與試劑 收集清晨空腹全血，經4 000 r/min離心5 min，收集血清，于-80 ℃冰箱儲存。血清標本在檢測前復蘇至室溫并保持15 min，于武漢大學中南醫院檢驗科進行檢測，檢測系統為奧林巴斯AU5400生化分析儀，檢測試劑為Sekisui NEFA檢測試劑盒，產品批號803RIJ。校準物質為Sekisui NEFA，批號816RKI，具有校準物質溯源性。質控品為2個定值質控品，批號分別為1004231、1103147。以上試劑由積水醫療科技(中國)有限公司生產提供。

1.5 參考區間驗證 隨機從上述參考人群按不同年齡分組共抽取60例用于參考區間的驗證。若檢測結果最少95%(57例)位于新建參考區間內，不超過3例結果未位于該參考區間，判定參考區間有效。若有4例或4例以上在該參考區間外，須另外收集第2組參考人群重新檢測。第2組檢測數據不超過4例結果落在參考區間外，則認為驗證有效；若第2組數據超過4例結果在參考區間外，首先檢查檢測系統性能及檢測程序是否正確，再考慮該項目是否具有人群生物特性，進行下一步的調查，重新建立生物參考區間[6]。

2 結 果

2.1 參考人群的選擇 參照排除標準后，收錄符合本研究要求的共1 250例健康者，年齡18～88歲。其中男588例，平均年齡(43±19)歲；女662例，平均年齡(40±17)歲。

2.2 參與檢驗中心的標準化 空白及校準物質OD值分別為0.000 005±0.001與0.215 7±0.001 176，校準曲線校準系數為0.976。高、低濃度質控品均值及標準差分別為804.47±29.17、340.54±9.40，均在控，確認檢測系統性能及檢測程序正確。

2.4 1 250例健康者的NEFA水平 經K-S法檢驗，P<0.01，NEFA水平為偏態分布，經對數轉換后P=0.2，符合正態分布。參考人群分別按性別、年齡及BMI分組，經比較男、女間NEFA平均水平差異無統計學意義(P=0.125)；年齡分組差異有統計學意義(P=0.001)，≥60歲組最高，18～<45歲組次之，45～<60歲組最低，≥60歲組與18～<45歲組及45～<60歲組差異均有統計學意義(P=0.002)，18～<45歲組較45～<60歲組高(P<0.01)；BMI分組中，BMI<18.5 kg/m2組較18.5～23.9 kg/m2組高(P<0.01)，但與大于23.9 kg/m2組比較差異無統計學意義(P=0.263)，18.5～23.9 kg/m2組與大于23.9 kg/m2組差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 1 250例健康者NEFA水平[M(P25，P75)，μmol/L]

2.5 NEFA水平與臨床指標回歸分析 經多變量線性逐步回歸分析，BMI及年齡對NEFA有顯著影響(P<0.01)。圖1A為不同年齡段各BMI亞組的NEFA水平比較，可見各BMI組的NEFA水平隨年齡增加先降低后升高的趨勢，并且不同年齡段BMI<18.5 kg/m2組均較18.5～23.9 kg/m2組高(P=0.02，0.019，0.049)，其他組間差異無統計學意義(P>0.05)。圖1B為不同BMI各年齡組的NEFA水平比較，可見各年齡組的NEFA水平隨BMI增加而先降低后升高的趨勢，同樣可見不同年齡組BMI<18.5 kg/m2組均較18.5～23.9 kg/m2組高，差異有統計學意義(P<0.05)，其他組間差異無統計學意義(P>0.05)。

注：A為不同年齡組BMI亞組的NEFA水平，B為不同BMI組年齡亞組的NEFA水平。

圖1 不同年齡及BMI組的NEFA水平

2.6 估計武漢地區人群NEFA 95%參考區間 武漢地區人群NEFA 95%參考區間為204.6～975.2 μmol/L。不同年齡組NEFA區間：18～<45歲參考區間為206.6～1 011.5 μmol/L，45～<60歲為198.9～914.6 μmol/L，≥60歲為250.2～1 051.1 μmol/L。

2.7 NEFA 95%參考區間的驗證 按年齡分組，每組共選取參考個體20例，男女均為10例。60例臨床驗證者NEFA檢測范圍為242.0～831.2 μmol/L，檢測范圍未超出估計參考區間204.6～975.2 μmol/L。18～<45歲組NEFA檢測范圍為242.0～749.8 μmol/L，45～<60歲組檢測范圍為227.5～765.1 μmol/L，≥60歲組的檢測范圍為268.6～831.2 μmol/L，均屬于各自的參考區間，因此確認本研究建立的參考區間具有臨床適用性。

3 討 論

本研究使用日本積水醫療株式會社研制的酶法試劑，該法具有良好精密度、高特異性、可直接用于自動生化分析儀等優點。使用該法檢測1 250例健康成人血清NEFA水平，初步建立武漢市健康人群NEFA酶法參考區間。

血清NEFA與飲食習慣、年齡、性別及種族密切相關，本研究對象均為黃種人，飲食習慣未知，根據性別及年齡進行分組統計分析，以確定是否需要建立不同組別的參考區間。多元線性回歸分析BMI及年齡對NEFA水平有顯著影響，可根據此兩類因素估計獨立參考區間，考慮臨床方便應用，本研究采用年齡分組估計獨立參考區間。BMI是反映成人體質量與身高的關系，是判斷人體胖瘦程度的一項重要指標，在篩查肥胖、超重等方面亦得到公認。根據《中華人民共和國衛生行業標準》對中國成人體質量判定，將參考人群分為不同BMI組，分別為體質量過低組、體質量正常組及體質量超重或肥胖組。本研究發現各個年齡組中隨BMI增加，NEFA水平由高降低后輕度升高，體質量正常者水平最低。可見NEFA與BMI密切相關。據國內外有關BMI與心血管疾病的研究發現，BMI與心血管病病死率負相關[7]。肥胖也是導致心血管疾病重要危險因素，也是代謝綜合征的主要表現及重要致病因素。在低BMI亞裔老年人群中發現，低BMI同樣加重了高水平血清脂聯素致心血管病病死率，是新理論“脂聯素悖論”的新研究結果之一[8]。本課題研究也發現低BMI者NEFA水平高。NEFA在心血管疾病的危險分層中作用尚不明朗，有較多爭議，且在急性心肌梗死及急性冠脈綜合征致病機理亦未知，但眾多科研人員在大宗著名的流行病學調查中發現健康成人隨訪22年后，基礎NEFA水平高者發生心源性猝死率升高[9]。諸多證據間接解釋了NEFA與BMI的密切關系，高或低BMI及高水平NEFA在心血管疾病中均有發病作用，是心血管疾病的危險因素。

經統計分析，年齡分組的NEFA水平顯著不同，≥60歲組最高，18～<45歲組次之，45～<60歲組最低，年齡為影響NEFA水平的因素之一。NEFA平均水平為(528.8±229.3)μmol/L，與國內某些研究水平不同，李義龍等[10]評估296例健康者水平后設置參考區間96～740 μmol/L與本研究相較，低值、高值均較低，范圍較窄，本研究與馮明等[11]研究比較水平類似。分析各類研究水平不同原因，考慮主要原因為個體間生物學變異導致，Widjaja等[12]報道血清NEFA的個體間生物學變異可達45%，且分析前變異如樣品采集時間、采集部位、空腹時間、飲食運動狀態至標本離心、標本保存條件等不同均可影響NEFA水平。另外，上述研究例數較少，必要的標本例數決定了參考限的精度，標本例數較少可以導致參考限精度降低，國際臨床化學和實驗室醫學聯盟推薦每組400例標本[13]，分組越多，需要的標本數量越大。本研究標本量較大，降低了因標本量因素造成的評估偏移。本文檢測60例健康者血清NEFA得出驗證范圍為242.0～831.2 μmol/L，落在本研究估計參考區間內，但較估計參考區間“窄”，且較廠家提供的參考區間129～769 μmol/L水平略高。是否繼續使用廠家提供或本文估計范圍，仍需臨床科室協助觀察，建議半年后再一次進行驗證，如驗證范圍與本次相似或臨床發現有不適用的支持信息，實驗室須自建NEFA生物參考區間[6]。

美國國家膽固醇教育計劃研究表明，基于有高冠心病風險的健康人群建立的血清總膽固醇水平參考區間，可能出現體檢者血清膽固醇水平遠低于此參考區間上限，但其發展為不成熟冠心病的風險仍比一般人群高。因此，推薦建立血清膽固醇參考區間的人群應該選為冠心病發生率低地區的人群及發生率高的低風險人群。本研究采用的參考人群為武漢地區表面健康人群，心血管疾病發生風險未知，按國際臨床化學協會剔除的建立參考區間的方法要求嚴格、程序復雜，自行制訂存在客觀難度，NEFA生物參考區間的建立仍需定期召開評審會議并咨詢臨床意見，在一定程度上保證NEFA參考區間的適用性。

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Investigation on reference interval of serum non-esterified fatty acid among population in Wuhan area*

ZHOUYan1,MAPei2,HANLu2

(1.DepartmentofGastroenterology; 2.CenterforGeneDiagnosis,ZhongnanHospital,WuhanUniversity,Wuhan,Hubei430071,China)

Objective To preliminarily establish the reference interval of serum non-esterified fatty acids(NEFA)among population in Wuhan area by enzymatic assay.Methods NEFA level of serum samples from A total of 1 250 individuals undergoing healthy physical examination in our hospital were selected as the research subjects.The Olympus AU5400 biochemistry analyzer and SEKISUI reagents were adopted to detect serum NEFA level.The regression analysis was adopted to analyze the NEFA influencing factors.The NEFA 95% reference interval was estimated by using the normal distribution method and the reference interval was verified.Results The regression analysis showed that the body mass index(BMI)and age had significant effect on NEFA(P<0.01).NEFA was highest in the group aged ≥60 years old,followed by the group of 18-<45 years old,and lowest in the group of 45-60 years old; NEFA was highest in the group of BMI<18.5 kg/m2.The 95% reference interval of NEFA for healthy population in Wuhan area was estimated as 204.6-975.2 μmol/L.The detected NEFA level for clinical verifiers was 242.0-831.2 μmol/L,which conformed to the above reference interval.Conclusion The serum NEFA reference interval among healthy population in Wuhan area is primarily established.

enzymatic assay; serum non-esterified fatty acids; reference interval

國家重點基礎研究發展規劃“973”資助項目(2012CB720605)。

周燕，女，副主任技師，主要從事消化疾病臨床檢驗研究。△

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.004

A

1673-4130(2016)23-3249-03

2016-03-11

2016-05-29)