IL-28B基因rs129798600多態性治療HCV基因型1患者早期應答的關系

許建平,鄺永輝

(廣東省河源市源城人民醫院檢驗科 517000)

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·論 著·

IL-28B基因rs129798600多態性治療HCV基因型1患者早期應答的關系

許建平,鄺永輝

(廣東省河源市源城人民醫院檢驗科 517000)

目的 探討在白細胞介素28B(IL-28B)基因多態性基礎上對丙型肝炎病毒(HCV)基因型1患者的持續性病毒學應答(SVR)做出的預測，為患者治療提供科學參考依據。方法 應用熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)檢測HCV定量值；使用基因測序方法檢測rs129798600的基因型。結果 發生完全早期病毒性應答(cEVR)患者的年齡顯著低于未發生cEVR(Non-cEVR)患者，而男性比例與丙氨酸轉氨酶水平則顯著高于后者；IL-28B基因型CC和年齡小于40歲為發生cEVR的獨立相關因素。結論 HCV rs129798600位點CT基因型的患者，則可以考慮對年齡小于40歲的患者進行PEG-IFN聯合利巴韋林治療，而對其他患者可以進行三聯治療。

丙型肝炎； 多態性； 干擾素； 利巴韋林

丙型肝炎是一種主要經血液傳播的疾病，80%的丙型肝炎病毒(HCV)感染者可發展成慢性肝炎，如果不治療大多數患者在20年后可發展成肝硬化，少數可發展成肝癌(HCC)，故HCV是嚴重威脅人類健康的社會和公共衛生問題,其治療也成為非常緊迫的問題[1-2]。影響HCV治療效果的因素既有宿主因素，也有病毒因素。宿主因素包括白細胞介素28B(IL-28B)基因多態性、年齡、性別、種族、肝纖維化程度和肥胖等，病毒因素包括HCV基因型、病毒載量、治療過程中病毒的動力學等[3]。其中IL-28B基因多態性是慢性丙型肝炎(CHC)患者治療持續病毒學應答(SVR)最強的預測因素[4-5]。

本研究回顧性分析感染HCV基因型1的中國CHC患者rs129798600基因多態性與完全早期病毒性應答(cEVR)的關系，探討在IL-28B基因多態性基礎上對HCV基因型1患者的持續性病毒學應答(SRV)做出進一步的預測，為治療前剔除難治性患者提供科學參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究的所有對象來自廣東省河源市人民醫院2009年5月至2015年4月的門診患者。診斷標準符合2004年中華醫學會肝病學分會制定的《丙型肝炎防治指南》中的規定。納入標準：HCV抗體陽性且HCV RNA陽性；未接受過針對CHC的治療；具有實驗室檢測資料；具備全血和血清標本可進行IL-28B和HCV基因分型檢測；接受聚乙二醇干擾素(PEG-IFN)聯合利巴韋林(RBV)標準治療且具有基線和第12周HCV定量數據。排除標準：人類免疫缺陷病毒(HIV)及其他肝炎病毒感染；酒精性或藥物性肝病。選擇其中HCV基因型1的患者共356例進行分析。cEVR的判斷標準為治療第12周 HCV RNA較治療前下降大于2 Log;SVR的判斷標準為治療結束之后12周或者24周HCV RNA檢測不到。標本收集及核酸提取：所有標本均在患者治療前進行收集并分裝保存于-80 ℃。基因組DNA及HCV RNA采用Qiagen離心柱試劑盒，按照說明書進行操作。所有參與患者簽署知情同意書并獲醫院倫理委員會批準。

1.2 儀器與試劑 血球計數儀及配套試劑由日本希森美康公司提供，全自動生化分析儀由日本日立公司生產，配套試劑由上海復星診斷提供。熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)儀為美國ABI公司產品7500。基因組DNA及HCV RNA提取試劑盒為深圳凱杰生物技術公司產品。HCV RNA采用實時熒光定量PCR試劑盒為深圳凱杰生物技術公司產品，檢測下限為100 IU/mL。

1.3 方法 IL-28B與HCV基因分型：IL-28B及HCV基因分型采用測序法檢測，測序的引物提供給Invitrogen公司合成；提取好的IL-28B DNA和HCV RNA直接送Invitrogen公司進行測序及結果分析。

1.4 統計學處理 采用SPSS 19.0軟件進行統計學分析。等位基因頻率進行哈代-溫伯格平衡分析。分類變量采用χ2檢驗或Fisher精確檢驗。連續變量之間的比較采用t檢驗。各因素與SVR的關系采用多元Logistic回歸分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 患者基本特征比較 發生cEVR患者的年齡顯著低于未發生cEVR(Non-cEVR)患者，而男性比例與丙氨酸轉氨酶(ALT)水平則顯著高于后者，其他指標差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 cEVR與Non-cEVR患者的基本資料

2.2 患者各項指標異常率比較 患者中小于40歲、男性、IL-28B基因型CC、HCV RNA小于40 000 IU/mL、ALT>90 U/L、其他各項指標處于正常參考范圍以外(異常)的患者比例見表2。cEVR患者中小于40歲、男性、IL-28B基因型CC、ALT>90 U/L比例顯著高于Non-cEVR患者。

表2 cEVR與Non-cEVR患者各項指標異常率比較[n(%)]

2.3 與cEVR相關的獨立因素 以cEVR為因變量，患者中小于40歲、男性、IL-28B基因型CC、HCV RNA小于40 000 IU/mL、ALT大于90 U/L、其他各項指標異常為自變量進行Logistic條件回歸分析，只有IL-28B基因型CC和年齡小于40歲為發生cEVR的獨立相關因素。見表3。

表3 cEVR相關因素的多元Logistic條件回歸分析

3 討 論

目前針對CHC的標準治療方案為聚乙二醇干擾素(PEG-IFN)聯合利巴韋林(RBV)，但SVR的患者只有54%～63%，感染HCV基因型1的患者SVR率僅為40%～50%[1-2]。2006年一項根據早期病毒學應答的差異而采用不同療程治療基因1型CHC的研究，在基因1型患者中,A組和B組的SVR分別只有28%和44%[4-6]。

以往的研究表明，PEG-IFN聯合RBV治療CHC的主要影響因素為HCV基因型，感染HCV基因型1的患者SVR顯著低于感染其他基因型的患者[1]。但在中國IL-28B基因多態性是影響治療效果的最重要因素，中國人感染HCV基因型1的患者SVR卻顯著高于歐美人群[5]。其原因是患者IL-28B基因rs129798600位點CC型CHC患者接受PEG-IFN聯合RBV治療時具有更高的SVR[4]，中國人CC型頻率顯著高于CT型頻率，而SVR最差的TT型在中國人群中比例極低[7]。即便IL-28B基因rs129798600位點CC型具有更高的SVR，仍然有相當比例的HCV基因型1且rs129798600位點CC型的CHC患者無法產生SVR。鑒于cEVR是SVR非常重要的指標，也是判斷治療是否有效的基本依據，本文分析了HCV基因型1患者接受PEG-IFN聯合RBV治療時cEVR與患者年齡、性別、rs129798600基因型、HCV RNA載量以及常規肝功能指標的關系，發現年齡和rs129798600基因型與cEVR獨立相關，這一結論與其他研究一致[5,8]。

本研究結果表明，rs129798600位點CT型患者，則可以考慮對年齡小于40歲的患者進行PEG-IFN聯合RBV治療，對其他患者進行三聯治療。然而，本研究結果僅僅是初步結果，這一方案是否具有臨床應用價值還需要大量的臨床驗證進行支持。美國肝臟病學會于2011年的更新指南中推薦采用三聯療法進行治療，即在PEG-IFN和RBV聯合治療的基礎上增加直接抗病毒治療[9]。即使采用三聯療法，IL-28B基因多態性仍然是影響治療效果的最重要因素[10]。考慮到三聯療法的昂貴成本、不良反應及可能出現的病毒耐藥，對HCV基因型1的患者在治療之前進行分類，選擇合適的患者接受合適的治療方案，在臨床上具有重要意義。

總之，本研究結果初步表明，IL-28B基因多態性可以為感染HCV基因型1的CHC患者的治療方案提供進一步的信息，對CHC患者的個性化治療具有重要參考價值。

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Research of IL-28B gene rs129798600 polymorphism in the treatment of HCV genotype 1 patients with early response

XUJianping,KUANGYonghui

(YuanchengPeople′sHospitalHeyuanCity,Heyuan,Guangdong517000,China)

Objective To explore the prediction of sustained virological response(SVR)in the patients with hepatitis C virus(HCV)genotype 1 based on the polymorphism of IL-28B gene to provide scientific reference basis for the treatment of the patients.Methods the quantitative value of HCV was detected by fluorescence quantitative PCR method,and the genotype of rs129798600 was detected by gene sequencing method.Results The age in the patients with cevr was significantly lower than that in the patients with no cevr(Non-cEVR),while the male proportion and the level of ALT level were significantly higher than those in the latter; IL-28B genotype CC and age less than 40 years old were independent related factors of cEVR occurrence.Conclusion In the patients with HCV rs129798600 site CT genotype,it can be considered that the PEG-IFN combined RBV treatment is conducted in the patients aged less than 40 years old,while the other patients could be treated by the triple therapy.

HCV; polymorphism; interferon; ribavirin

許建平，男，主管技師，主要從事臨床分子檢驗研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.018

A

1673-4130(2016)23-3288-03

2016-03-07

2016-05-25)