黃硝巴布劑中紅花與大黃提取工藝研究

曾明輝，何 林，邱建平，余繼英，居國華

（1．四川省邛崍市醫療中心醫院藥學部，四川 邛崍 611530； 2．四川省醫學科學院·四川省人民醫院藥學部，四川 成都 610072）

黃硝巴布劑中紅花與大黃提取工藝研究

曾明輝1，何 林2，邱建平1，余繼英2，居國華1

（1．四川省邛崍市醫療中心醫院藥學部，四川 邛崍 611530； 2．四川省醫學科學院·四川省人民醫院藥學部，四川 成都 610072）

目的 優選黃硝巴布劑中紅花與大黃水煎提取的最佳工藝。方法 以紅花中羥基紅花黃色素A、大黃中總蒽醌在提取液中的含量為考察指標，采用 L9（34）正交試驗設計，考察煎煮溶劑的量、提取時間和提取次數3個因素對提取效果的影響。結果 紅花、大黃分別加14倍量水，浸泡20min，大黃單獨煎煮提取40min，藥渣與紅花混合，加14倍量水，煎煮2次，每次40min，能最大限度地提取紅花與大黃藥材中的有效成分。結論 該提取工藝簡單可行，可為工業化生產提供依據。

紅花；大黃；正交試驗；提取工藝；羥基紅花黃色素A；總蒽醌

“水晶丹”為醫院治療瘡瘍的自制制劑，由紅花、大黃等組方，在臨床應用多年，療效肯定，無毒副作用[1－2]，但存在制備工藝不規范、患者使用不方便等現象。筆者擬對其制劑工藝等進行研究，將其研制成黃硝巴布膏劑。該制劑處方中紅花為菊科植物紅花的干燥管狀花，主要化學成分為黃酮醇及查爾酮類等，其中羥基紅花黃色素A（HSYA）為其主要活性成分，有活血化瘀、止痛等功效[3]。大黃有消炎鎮痛、收斂止血等作用，其化學成分復雜，其中蒽醌類化合物（TAQN）是重要的活性成分[4]。本研究中基于中藥傳統方劑的煎煮方式，以提取液中HSYA和TAQN的含量為考察指標，采用正交試驗法，優選紅花與大黃水煎提取的最佳工藝。現報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

美國Waters 2690型高效液相色譜系統，包括自動進樣器，996二極管陣列檢測器，Empower3色譜工作站（美國Waters公司）；UV1800型紫外分光光度計（日本島津公司）；BP211型電子天平(德國賽多利斯公司)；Genius3型漩渦混合器（德國IKA公司）；320R型低溫離心機（德國Hettich公司）；H66025T型超聲清洗機（無錫超聲電子設備廠）。

1．2 試藥

HSYA對照品（批號為111637－200905），大黃素對照品（批號為110756－201017），均購自中國食品藥品檢定研究院；紅花（批號為121201，HSYA的標示含量為1．2%）、大黃（批號為 13070，TAQN的標示含量為1．8%），均由四川利民中藥材飲片有限責任公司提供。甲醇、乙腈為色譜純，水為純凈水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 HSYA含量測定(高效液相色譜法)

2．1．1 色譜條件[5]

色譜柱：DiamonsilC18柱（200mm×4．6mm，5μm），柱溫：30℃；流動相：甲醇－乙腈－0．7%磷酸溶液（26∶2∶72）；流速：0．8mL／min；檢測波長：403 nm；進樣量：20μL。

2．1．2 溶液制備

稱取HSYA對照品適量，精密稱定，加25%甲醇制成0．10 g／L的溶液，搖勻，即得HSYA對照品貯備液。精密吸取混合提取液2 m L，用25%甲醇稀釋5倍，搖勻，用0．45μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

2．1．3 方法學考察

線性關系考察：分別精密吸取HSYA對照品貯備液0．2，0．5，1．0，2．0，5．0 mL，加25%甲醇制成2，5，10，20，50μg／mL系列溶液。分別吸取上述溶液各20μL進樣測定，以HSYA峰面積對質量濃度作回歸分析，得回歸方程 Y＝37 640X－3 321．5，r＝0．999 2（n＝5）。結果表明，HSYA質量濃度在2～50μg／mL范圍內與峰面積線性關系良好。

加樣回收試驗：精密吸取含HSYA(0．224 2 g／L)的提取液0．5m L 6份，分別加入一定量的HSYA對照品溶液。按供試品溶液制備方法處理，進樣測定，計算得平均加樣回收率為98．01%，RSD為1．28%（n＝6）。

2．2 TAQN含量測定(紫外分光光度法)

2．2．1 溶液制備

稱取TAQN對照品適量，精密稱定，用甲醇溶解并稀釋成質量濃度為0．10 g／L的溶液，搖勻，即得TAQN對照品貯備液。精密吸取TAQN提取液5m L，置100m L三角瓶中，加入2．5 mol／L的硫酸溶液50 m L，回流水解2 h；稍冷后用氯仿回流提取4次，用量分別為30，20，10，10mL，每次1 h，合并氯仿液，低溫揮干氯仿，殘渣用氯仿定容于50 m L容量瓶中；精密吸取氯仿液5mL，置蒸發皿中，低溫揮干氯仿，殘渣用適量甲醇轉溶于25m L容量瓶中，即得供試品溶液[6－7]。

2．2．2 檢測波長選擇

精密吸取大黃素對照品溶液3～25 mL置容量瓶中，加入1%醋酸鎂甲醇溶液10m L，再加甲醇至刻度，搖勻，在200～700 nm波長范圍內掃描。結果大黃素在512 nm波長處有最大吸收峰，故以512 nm為檢測波長。2．2．3 方法學考察

線性關系考察：分別精密吸取TAQN對照品溶液1，2，3，4，5，6 m L，置25 mL容量瓶中，加1%醋酸鎂甲醇溶液10mL，加甲醇至刻度，搖勻，得質量濃度為4，8，12，16，20，24μg／m L的系列標準溶液，以甲醇為空白溶液在512 nm波長處測定吸光度，繪制標準曲線，得回歸方程 Y＝0．050 17X－0．001 02，r＝0．999 8（n＝6）。結果表明，TAQN對照品溶液質量濃度在4～24μg／mL范圍內與吸光度值線性關系良好。

加樣回收試驗：精密吸取含TAQN 1．716 g／L的提取液1mL，分別加入一定量的TAQN對照品溶液。按供試品溶液制備方法處理，并測定吸光度值，計算得平均加樣回收率為94．87%，RSD為1．58%（n＝6）。

2．3 混合提取工藝優化

2．3．1 正交試驗設計

在預試驗基礎上，選擇以水為溶劑，考察對象選擇影響TAQN及HSYA提取的3個主要因素，即溶劑量（因素A）、煎煮時間（因素B）、煎煮次數（因素C），進行工藝優化，每個因素3個水平，按正交表 L9（34）進行試驗，因素水平見表1。

表1 正交試驗因素水平表

2．3．2 試驗方法與結果

稱取大黃50 g，紅花10 g，大黃碎斷為1 cm左右的小塊。藥材在第1次煎煮前均浸泡20min，按正交設計進行試驗，收集提取液，藥渣用適量水洗滌。合并提取液和洗滌液，于高速離心機上離心，去除沉淀，溶液減壓濃縮至約300 m L，定容至500 m L，搖勻，測定HSYA及TAQN含量，結果見表2和表3。將以上結果運用正交試驗助手Ⅱ軟件作方差分析，結果見表4和表5。

表2 以HSYA含量為評價指標的正交試驗結果

表3 以TAQN含量為評價指標的正交試驗結果

2．3．3 結果分析

以HSYA含量為評價指標的正交試驗方差分析結果表明，因素重要性 C＞B＞A，最佳工藝為C2B1A3，即煎煮次數 2次，煎煮時間 40 min，溶劑量 14倍。以TAQN含量為評價指標的正交試驗方差分析結果表明，因素重要性A＞C＞B；最佳工藝為A3C3B1，即溶劑量14倍，煎煮次數3次，煎煮時間40min。

表4 以HSYA含量為評價指標的正交試驗方差分析結果

表5 以TAQN含量為評價指標的正交試驗方差分析結果

綜合TAQN及HSYA 2個指標發現，因素C選擇的水平存在矛盾，本研究中擬訂的解決方法是將大黃先單獨煎煮1次，過濾，藥渣再與紅花混合煎煮，故最佳提取工藝為紅花、大黃分別加14倍量水浸泡20min；大黃單獨煎煮提取40min，過濾，藥渣與紅花混合，加14倍量水煎煮2次，每次40min，合并3次提取液及藥渣洗滌液。2．4 驗證試驗

按正交設計試驗得出的最佳工藝進行驗證試驗，并比較大黃14倍量水分別先單獨煎煮0，40，60min，再與紅花煎煮2次，每次加14倍量水煎煮40min，分別測定各提取液中TAQN及HSYA含量，結果見表6。可見，大黃先單煎40 min，藥渣再與紅花混合提取，TAQN提取效果較好，同時不影響HSYA的提取。

表6 驗證試驗結果（±s，mg／g，n＝3）

表6 驗證試驗結果（±s，mg／g，n＝3）

大黃單煎時間（min）0 40 60 HSYA 11．012±0．20 11．176±0．24 11．143±0．23 TAQN 14．625±0．25 17．036±0．35 16．514±0．33

3 討論

HSYA為紅花活血化瘀、止痛等功效的主要有效成分，2010年版《中國藥典(一部)》規定紅花藥材中HSYA的含量不得少于1．0%；TAQN為大黃活血化瘀、止痛等功效的主要有效成分，2010年版《中國藥典(一部)》規定大黃藥材中TAQN的含量不得少于1．5%。因此，本研究中選用HSYA和TAQN為2種藥材的代表物質。

本研究中參照藥典方法制備紅花藥材中HSYA含量測定的供試品溶液，并選用403 nm作為檢測波長，具有良好的峰形，與干擾成分分離度大于1．5。同時，在參考文獻[6－7]的基礎上建立了紅花和大黃混合提取液中TAQN的含量測定方法，該方法具有良好的準確性和重復性。

復方制劑是由2味及其以上的藥物組成，其所含成分的種類含量及其治療功效往往并非單味藥的簡單加和，而中藥傳統方劑服用時往往是多種藥材混合在一起煎煮。本研究中優選了紅花與大黃混合提取的工藝，為紅花與大黃復方研究提供了一定基礎。

紅花和大黃為科研課題“黃硝巴布劑”研制處方的主要成分，本研究中以中藥傳統方劑的煎煮方式為基礎，以水為提取溶劑，實現了HSYA及TAQN較高的提取率，成本較低，工藝穩定，易操作，可為工業生產提供依據。

[1]周華君．水晶丹加減治療瘡瘍300例的臨床觀察[J]．四川中醫，1996，14（9）：45．

[2]段 華，母發旭．水晶丹治療痛風性關節炎急性發作135例臨床觀察[J]．四川醫學，2008，29（10）：1 347－1 348．

[3]王藝蓉，白咸勇．紅花的作用及機制研究進展[J]．濱州醫學院學報，2009，32（6）：451－453．

[4]蘭志瓊，王 凌．大黃的藥理作用與臨床應用[J]．中國醫藥指南，2010，13（2）：85．

[5]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010：141．

[6]張志榮，侯世祥，黃 園，等．大黃及其復方中藥制劑中蒽醒衍生物的含量測定[J]．華西藥學雜志，1994，9（4）：225－227．

[7]呂 潔，李曉燕，李向軍，等．大黃中結合蒽醌的提取工藝研究[J]．河北中醫藥學報，2009，24（4）：34－35．

Extraction Technology of Carthamus Tinctorius L．and Radix et Rhizoma．Rhei in Huangxiao Catap lasm ta

Zeng Minghui1，He Lin2，Qiu Jianping1，Yu Jiying2，Ju Guohua1
（1．Department of Pharmacy，Sichuan Qionglai Medical Center Hospital，Qionglai，Sichuan，China 611530； 2．Sichuan Academy of Medicial Sciences· Department of Pharmacy，Sichuan Provincial People′s Hospital，Chengdu，Sichuan，China 610072）

Objective To explore the optional extraction technology of Carthamus tinctorius L．and Radix et Rhizoma．Rhei in Huangxiao Cataplasm ta．M ethods Based on the orthogonal test L9（34），the contents of hydroxysaffl in yellow A and total anthraquinone were regarded as the index to evaluate the extracting conditions such as the water volume，extracting time and extracting times．Resu lts A fter Carthamus tinctorius L．and Radix et Rhizoma．Rhei being soaked respectively for 20 min with 14 times amount of water，the Radix et Rhizoma．Rhei was decocted alone for 40 min with 14 times amount of water．The gruffs were admixed with the Carthamus tinctorius L．The admixture was extracted 2 times by using 14 times amount of water and 40 min each time．In this way，the hydroxysafflof yellow A and total Anthraquinone were utmostly extracted．Conclusion The extraction technology is simple，practicable and may provide a basis for industrial production．

Carthamus tinctorius L．；Radix et Rhizoma．Rhei；orhogonal test；extraction technology；hydroxysafflof yellow A；total anthraquinone

TQ 461；R284．1；R282．71

A

1006－4931(2016)06－0020－04

曾明輝，大學本科，研究方向為中藥新劑型與新工藝及藥事管理，（電話）028－88761203（電子信箱）zengyaoshi168＠163．com；何林，博士研究生，主任藥師，研究方向為藥物新制劑及藥代動力學，本文通訊作者，（電話）028－87393932（電子信箱）helin514＠126．com。

2015-10-14)

四川省中醫藥管理局科研課題，項目編號：No．2010－G－093。